马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究
发布时间：2021-09-29 18:58
目的:对马鹿茸多肽进行分离纯化,获得不同分子量的马鹿茸多肽（A～E）。研究马鹿茸多肽（A～E）对MC3T3-E1成骨细胞的增殖及成骨分化作用、对骨髓间充质干细胞的增殖及骨向分化的作用;马鹿茸多肽A对大鼠肾虚型骨质疏松症的作用,探究马鹿茸防治骨质疏松症的作用机制。通过HPLC-MS联用技术分析马鹿茸多肽A的组分组成,采用原子力显微镜对马鹿茸多肽A的表面结构进行分析和表征,采用网络药理学和生物信息学分析方法,探究马鹿茸多肽A防治骨质疏松症的靶基因和靶蛋白,及相关的作用机制的信号通路,为防治骨质疏松症提供理论依据和科学指导。材料与方法:1材料鹿茸药材购于辽宁西丰药材市场,经辽宁中医药大学中药鉴定教研室的李峰教授鉴定为鹿科动物马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角;马鹿茸多肽,由实验室自制。2方法2.1马鹿茸多肽（A～E）的分离纯化及分子量的分布测定采用多级膜分离技术分离并纯化得到5种不同分子量的马鹿茸多肽（A～E）;采用高效凝胶过滤色谱法和SDS-PAGE电泳法测定马鹿茸多肽（A～E）的分子量。2.2马鹿茸多肽（A～E）对MC3T3-E1成骨细胞的增殖及...
【文章来源】：辽宁中医药大学辽宁省
【文章页数】：215 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
马鹿茸多肽A的粉末
马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究243.2供试品溶液的测定结果由表1-2和图1-8，可知多肽组分的分子量在1000-20000Da范围内。表1-2酶解液中多肽组分信息保留时间/min分子量/Da10.254722609.910.768318646.611.361615194.9
马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究28多肽溶液与2X上样缓冲溶液等量混合，与沸水中反应5min后取出，冷却至室温后备用。2.4电泳条件不连续缓冲系统，内槽装阴极缓冲溶液，外槽装阳极缓冲溶液。上样前60V恒压预电泳10min。随后60V恒压电泳至浓缩胶电泳完毕，样品被压缩成一条直线，进入间隙胶后用100V恒压电泳，达到分离胶后用120V恒压电泳，当溴酚蓝指示剂前沿跑到距胶底端1cm处，停止电泳。2.5上样用微量注射器吸取10μL对照marker和与上样缓冲溶液均匀混合后的多肽溶液，加入点样孔。2.6固定、染色和脱色将电泳完毕后的凝胶取出立即放入固定液中固定30min，然后放入考马斯亮蓝染色液中，置摇床上振摇过夜，水淋洗后用脱色液脱色直至凝胶背景脱去为止，放入保存液中储存。3实验结果1KD图1-9电泳图注：左侧是marker；右侧是样品50KDa10KDa0.5KDa0.4KDa0.3KDa0.01KDa
【参考文献】：
期刊论文
[1]核桃低聚肽对亚健康大鼠氧化应激和炎症反应的影响[J]. 刘睿,康家伟,珠娜,张亭,王天星,杜倩,张黎,李勇. 食品工业科技. 2020(04)
[2]不同级分绿豆肽免疫活性的分析[J]. 刁静静,迟治平,刘妍兵,曲柳青,张丽萍. 食品科学. 2020(01)
[3]蜜蜂肽对育肥湖羊生长性能和瘤胃微生物区系的影响[J]. 张智安,李世易,武刚,李发弟,李飞. 动物营养学报. 2020(02)
[4]伊枯草菌素类抗菌肽抑菌活性及机理研究进展[J]. 邓永卓,张家宁,邓爽,赵心宇,李晓岩,牛犇. 中国抗生素杂志. 2020(07)
[5]袋鼠皮多肽对H2O2诱导人肝细胞LO2氧化损伤的影响[J]. 王碧雪,祝雅雯,何庆,赵晶华,陈清西. 厦门大学学报(自然科学版). 2019(05)
[6]鹿瓜多肽对脐带间充质干细胞增殖、迁移和抗炎因子分泌的影响[J]. 李世梅,王黎明,李铭,汤慧,李峰,刘文聘,潘志荣. 医学综述. 2019(19)
[7]我国已上市治疗用重组蛋白多肽类产品分析[J]. 辛中帅,张彦彦,晋小雁,杨建红. 中国药事. 2019(09)
[8]杜仲治疗骨质疏松的网络药理学作用机制探讨[J]. 董航,严娇,谢铱子,纪树亮,孙伟鹏,孙治中,李宗瑶. 广州中医药大学学报. 2019(09)
[9]鹿瓜多肽联合双醋瑞因治疗膝骨关节炎的疗效[J]. 周欢斌. 骨科临床与研究杂志. 2019(05)
[10]骨代谢组学在中医药治疗骨质疏松症应用概况[J]. 杨杰,孙宇,聂士超,陈崇民. 辽宁中医药大学学报. 2019(08)
博士论文
[1]桃叶珊瑚苷通过Nrf2/Keapl信号通路促进成骨细胞分化抑制骨质疏松作用的研究[D]. 李雨桐.吉林大学 2019
[2]螺旋藻蛋白源生物活性肽的制备及其抗皮肤光老化机理研究[D]. 曾巧辉.华南理工大学 2016
[3]螺旋藻抗菌肽的纯化鉴定及其抑菌机理的研究[D]. 孙宜君.北京林业大学 2016
硕士论文
[1]基于BMP2/Smad1/Runx2/Osterix通路探讨健骨颗粒氯仿萃取部位对体外成骨细胞分化的影响[D]. 孙雨晴.福建中医药大学 2018
[2]马鹿茸多肽的制备及质量标准研究[D]. 赵丽莉.辽宁中医药大学 2018
[3]淫羊藿次苷Ⅱ促进骨髓间充质干细胞成骨分化及相关基因表达的研究[D]. 范亚楠.河南中医药大学 2018
[4]基于Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路探讨龟鹿二仙胶抗骨质疏松实验研究[D]. 徐卫峰.南京医科大学 2017
[5]奶山羊胎盘抗氧化多肽制备及其功能活性研究[D]. 高闪闪.西北农林科技大学 2017
[6]马鹿茸多肽的提取分离及性质研究[D]. 张微.辽宁中医药大学 2017
[7]绿原酸通过Shp2/PI3/Akt信号通路防治去卵巢大鼠获得性骨质疏松症[D]. 毛玉琳.南昌大学 2016
[8]枸杞ACE抑制肽的提取、分离纯化、活性测定及其结构鉴定[D]. 陈琨.宁夏医科大学 2016
[9]仙茅苷通过FoxO1保护氧化损伤成骨细胞的作用机制及体内代谢研究[D]. 何勇静.第二军医大学 2015
[10]福莫特罗和ICI118551对大鼠骨髓间充质干细胞来源的成骨样细胞增殖和分化的影响[D]. 胡安全.南京医科大学 2009
本文编号：3414281
【文章来源】：辽宁中医药大学辽宁省
【文章页数】：215 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
马鹿茸多肽A的粉末
马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究243.2供试品溶液的测定结果由表1-2和图1-8，可知多肽组分的分子量在1000-20000Da范围内。表1-2酶解液中多肽组分信息保留时间/min分子量/Da10.254722609.910.768318646.611.361615194.9
马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究28多肽溶液与2X上样缓冲溶液等量混合，与沸水中反应5min后取出，冷却至室温后备用。2.4电泳条件不连续缓冲系统，内槽装阴极缓冲溶液，外槽装阳极缓冲溶液。上样前60V恒压预电泳10min。随后60V恒压电泳至浓缩胶电泳完毕，样品被压缩成一条直线，进入间隙胶后用100V恒压电泳，达到分离胶后用120V恒压电泳，当溴酚蓝指示剂前沿跑到距胶底端1cm处，停止电泳。2.5上样用微量注射器吸取10μL对照marker和与上样缓冲溶液均匀混合后的多肽溶液，加入点样孔。2.6固定、染色和脱色将电泳完毕后的凝胶取出立即放入固定液中固定30min，然后放入考马斯亮蓝染色液中，置摇床上振摇过夜，水淋洗后用脱色液脱色直至凝胶背景脱去为止，放入保存液中储存。3实验结果1KD图1-9电泳图注：左侧是marker；右侧是样品50KDa10KDa0.5KDa0.4KDa0.3KDa0.01KDa
【参考文献】：
期刊论文
[1]核桃低聚肽对亚健康大鼠氧化应激和炎症反应的影响[J]. 刘睿,康家伟,珠娜,张亭,王天星,杜倩,张黎,李勇. 食品工业科技. 2020(04)
[2]不同级分绿豆肽免疫活性的分析[J]. 刁静静,迟治平,刘妍兵,曲柳青,张丽萍. 食品科学. 2020(01)
[3]蜜蜂肽对育肥湖羊生长性能和瘤胃微生物区系的影响[J]. 张智安,李世易,武刚,李发弟,李飞. 动物营养学报. 2020(02)
[4]伊枯草菌素类抗菌肽抑菌活性及机理研究进展[J]. 邓永卓,张家宁,邓爽,赵心宇,李晓岩,牛犇. 中国抗生素杂志. 2020(07)
[5]袋鼠皮多肽对H2O2诱导人肝细胞LO2氧化损伤的影响[J]. 王碧雪,祝雅雯,何庆,赵晶华,陈清西. 厦门大学学报(自然科学版). 2019(05)
[6]鹿瓜多肽对脐带间充质干细胞增殖、迁移和抗炎因子分泌的影响[J]. 李世梅,王黎明,李铭,汤慧,李峰,刘文聘,潘志荣. 医学综述. 2019(19)
[7]我国已上市治疗用重组蛋白多肽类产品分析[J]. 辛中帅,张彦彦,晋小雁,杨建红. 中国药事. 2019(09)
[8]杜仲治疗骨质疏松的网络药理学作用机制探讨[J]. 董航,严娇,谢铱子,纪树亮,孙伟鹏,孙治中,李宗瑶. 广州中医药大学学报. 2019(09)
[9]鹿瓜多肽联合双醋瑞因治疗膝骨关节炎的疗效[J]. 周欢斌. 骨科临床与研究杂志. 2019(05)
[10]骨代谢组学在中医药治疗骨质疏松症应用概况[J]. 杨杰,孙宇,聂士超,陈崇民. 辽宁中医药大学学报. 2019(08)
博士论文
[1]桃叶珊瑚苷通过Nrf2/Keapl信号通路促进成骨细胞分化抑制骨质疏松作用的研究[D]. 李雨桐.吉林大学 2019
[2]螺旋藻蛋白源生物活性肽的制备及其抗皮肤光老化机理研究[D]. 曾巧辉.华南理工大学 2016
[3]螺旋藻抗菌肽的纯化鉴定及其抑菌机理的研究[D]. 孙宜君.北京林业大学 2016
硕士论文
[1]基于BMP2/Smad1/Runx2/Osterix通路探讨健骨颗粒氯仿萃取部位对体外成骨细胞分化的影响[D]. 孙雨晴.福建中医药大学 2018
[2]马鹿茸多肽的制备及质量标准研究[D]. 赵丽莉.辽宁中医药大学 2018
[3]淫羊藿次苷Ⅱ促进骨髓间充质干细胞成骨分化及相关基因表达的研究[D]. 范亚楠.河南中医药大学 2018
[4]基于Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路探讨龟鹿二仙胶抗骨质疏松实验研究[D]. 徐卫峰.南京医科大学 2017
[5]奶山羊胎盘抗氧化多肽制备及其功能活性研究[D]. 高闪闪.西北农林科技大学 2017
[6]马鹿茸多肽的提取分离及性质研究[D]. 张微.辽宁中医药大学 2017
[7]绿原酸通过Shp2/PI3/Akt信号通路防治去卵巢大鼠获得性骨质疏松症[D]. 毛玉琳.南昌大学 2016
[8]枸杞ACE抑制肽的提取、分离纯化、活性测定及其结构鉴定[D]. 陈琨.宁夏医科大学 2016
[9]仙茅苷通过FoxO1保护氧化损伤成骨细胞的作用机制及体内代谢研究[D]. 何勇静.第二军医大学 2015
[10]福莫特罗和ICI118551对大鼠骨髓间充质干细胞来源的成骨样细胞增殖和分化的影响[D]. 胡安全.南京医科大学 2009
本文编号：3414281
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3414281.html
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