外泌体穿梭miR-135在结直肠癌肝转移微环境中的机制研究

发布时间：2021-10-08 12:41

　　研究背景及目的结直肠癌（Colorectal Cancer,CRC）是目前全球的第三大癌症死因,也是全球范围内因癌症死亡的主要原因之一。结直肠癌发病隐匿,多数确诊时已为晚期。结直肠癌患者死亡主要是由于转移发生,超过70%的患者会出现肝脏转移,肝转移是影响结直肠癌预后差的重要因素。阐释结直肠癌肝转移发生和发展的分子机制,探寻结直肠癌肝转移早期诊断标志物及有效的治疗靶点,是降低结直肠癌死亡率的关键。本研究中,通过microRNA微阵列芯片高通量筛选正常组织-腺瘤-结直肠癌发生和发展相关的差异miRNA,并通过进一步扩大样本量,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术验证并建立结直肠癌miRNA差异表达谱,筛选出在正常组织-腺瘤-结直肠癌中表达逐渐增加的miR-135a-5p进行后续的功能研究。结合结直肠癌患者及细胞外泌体分析,识别及验证外泌体miR-135a-5p调控的下游靶基因及相关信号通路,初步探讨外泌体穿梭miR-135a-5p在结直肠癌肝转移微环境中的作用机制,并进一步评价其作为结直肠癌诊断及预后标志物的诊断价值,为阐明结直肠癌肝转移的发病机理、发现早期诊断标志物及以miR-1... 

【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：155 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

miRNA芯片扫描结果

东南大学博士学位论文10图1-1.提取总RNA的电泳图（28S和18S核糖体的RNA电泳带比较亮，且未发现RNA弥散现象，可见RNA带清晰，未发生弥散，可用于miRNA芯片杂交）3.3miRNA芯片扫描结果（以1号癌旁组织，7号腺瘤组织，1号癌组织为例）图1-2中所示的绿色荧光信号表示在该位置探针所检测的miRNA在组织中可能有表达，并且荧光信号的强弱与组织样本中miRNA的表达水平直接相关无荧光信号则提示在该处芯片探针所检测的miRNA在组织样本中可能没有表达。图1-2.miRNA芯片扫描结果3.4芯片数据质量评估Boxplot（箱形图）可以直观地显示出数据集的分布，通过对miRNA表达谱的原始

第一章结直肠癌组织microRNA差异表达谱的分析11数据进行标准化后，各样本数据的中位数基本保持一致，符合正态分布特征，能较好的进行差异表达miRNA的筛选（图1-3）。图1-3.miRNA芯片数据标准化前后比较的boxplot图（BeforeNormalization：数据标准化前；AfterNormalization：数据标准化后）3.5芯片中差异表达miRNA的识别通过对miRNA芯片数据进行分层聚类分析，结果显示芯片可正确区分癌旁组织、腺瘤组织以及结直肠癌组织样本（图1-4）。差异miRNA筛选条件为：阈值Foldchange上调2倍以上或下调超过0.5倍，P<0.05，进行三组样本间差异表达的miRNA的交互分析，最终筛选出3个miRNA在三组样本均差异表达（图1-5），其中，仅有miR-135a-5p的表达在癌旁-腺瘤-癌组织中呈逐渐增加趋势（图1-6）。图1-4.组织样本中差异表达的miRNA聚类分析热图（NOR：癌旁组织；ADE：腺瘤组织；CRC：结直肠癌组织；红色表示基因表达上调，蓝色表示基因表达下调）


本文编号：3424181