S100A14在乳腺癌转移中的功能及机制研究

发布时间：2021-10-09 04:20

　　S100A14是EF-手型钙结合蛋白家族成员之一,在多种肿瘤中表达异常并与肿瘤发生发展密切相关。TCGA乳腺癌数据库分析表明:S100A14在乳腺癌中存在拷贝数扩增,在转移性乳腺癌数据集中拷贝数扩增比例高达27%;S100A14拷贝数扩增与其mRNA表达正相关;淋巴结转移的乳腺癌患者S100A14表达亦显著升高。GEO数据库进一步分析表明S100A14高表达的乳腺癌患者无进展生存差。我们进一步通过免疫组化实验在蛋白水平验证S100A14在乳腺癌配对组织和淋巴结中的表达,结果显示:S100A14在乳腺癌组织中表达显著上调,且与淋巴结转移正相关。为了明确S100A14在乳腺癌转移中的作用,我们通过一系列功能获得和缺失实验进行表型研究。结果表明:过表达S100A14显著增强乳腺癌细胞侵袭和迁移能力;敲除S100A14起到相反的作用。过表达S100A14的原位种植转移、实验性转移结果均显示:S100A14促进乳腺癌体内肺转移;而抑制S100A14表达后实验性肺转移能力和S100A14基因敲除MMTV-PyMT自发乳腺癌肺转移能力均显著降低。进一步研究发现S100A14促进乳腺癌细胞发生上皮间质... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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图１－１本实验所用质粒的图谱

清和小鼠血清中ＣＸＣＬ３和ＣＸＣＬ５含量的检测??胞上清和小鼠血清中ＣＸＣＬ３和ＣＸＣＬ５含量的检测选用的试剂盒，具体操作步骤如下：??３／ＣＸＣＬ５标准品的稀释：在使用前２ｈ内准备。将标准品稀释Ｋ?２５０ｐｇ／ｍＫ?１２５ｐｇ／ｍｌ、６２＿５ｐｇ／ｍｌ、３１．３ｐｇ／ｍｌ、１５．６ｐｇ／ｍｌ标记抗小鼠ＣＸＣＬ３／ＣＸＣＬ５抗体工作液：在使用前２ｈ内准记抗小鼠ＣＸＣＬ３／ＣＸＣＬ５加抗体稀释液９叫１的比例配制工－过氧化酶复合物（ＡＢＣ）工作液的准备：在使用前ｌｈ内准氧化酶复合物（ＡＢＣ）加ＡＢＣ稀释液９９ｙ的比例配制工的ＡＢＣ应预先在３７°Ｃ中平衡至少３０ｍｉｎ后加入孔内。??子水将２５ｘ洗涤液稀释至ｌｘ。??需酶标板数目，其余包装好放入冰箱中，其中一空作为空品和稀释好的待测样品各１０００依次加入孔中。酶标板加上０ｍｉｎ。??

院中国医学科学院博士学位论文好的ＡＢＣ工作液按每孔１００４依次加入，酶标板加上封板〇??缓冲液洗涤５次，每次浸泡２ｍｉｎ。??９〇４依次加入ＴＭＢ显色液，３７°Ｃ避光反应２５－３０ｍｉｎ。??９〇４依次加入ＴＭＢ终止液，此时颜色由蓝色转为黄色。??在４５０ｎｍ波长测定ＯＤ值。??品的浓度和吸光度值绘制曲线（见图１－３）。??测样品浓度。??


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