癌相关成纤维细胞及其外泌体在卵巢癌转移中的作用
发布时间：2021-10-25 14:30
第一部分癌相关成纤维细胞促进卵巢癌腹水多细胞聚集体的形成及转移目的研究癌相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts,CAF）在高级别浆液性卵巢癌（High grade serous ovarian cancer,HGSOC）患者腹水多细胞聚集体（Multicellular aggregates,MCA）形成和转移中的作用。方法1.术中收取15例高级别浆液性卵巢癌患者的腹水,直接镜下观察形态、细胞免疫荧光和石蜡包埋切片后免疫组化分析腹水MCA的细胞成份及细胞表型。检测指标包括:上皮性钙粘附蛋白（E-cadherin,E-cad）、神经性钙粘附蛋白（N-cadherin,N-cad）、波形蛋白（vimentin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、成纤维细胞活化蛋白（Fibroblast activation protein,FAP）、成纤维细胞特异性蛋白1（Fibroblast specific protein 1,FSP-1）、上皮特异性抗原（Moc-31）、核转录因子8（PAX8）、增殖细胞相关核抗原Ki-6...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
腹水中MCAs的形态
华中科技大学博士学位论文34在间皮细胞中呈阳性表达。雌激素受体(EstrogenReceptor,ER)主要在卵囊泡膜细胞和某些基质细胞中表达，但它在卵巢癌中表达却很低。该实验结果显示MCAs主要由卵巢肿瘤细胞（Tumorcell，TC）构成。图1-2.MCAs主要由卵巢肿瘤细胞构成。IHC染色见上皮肿瘤标记物Moc-31、卵巢癌标记物PAX8及Ki67呈阳性表达；间皮标记物Claudin4、Calretinin及ER呈阴性表达（标尺为20μm）。四、CAF参与了一部分MCAs的构成为了进一步明确CAF是否参与腹水MCAs的构成，我们通过免疫组化染色检测CAF标记物：α-SMA、FSP-1及FAP在石蜡包埋的腹水细胞中的表达。结果显示，在所研究的患者中，尽管大多数MCAs阴性表达α-SMA，但均可发现α-SMA阳性的MCAs（图1-3A）及FSP-1、FAP阳性MCAs（图1-4）。但是，MCAsTC/CAF与没有CAF的MCAsTC在形态、大小和致密程度上没有观察到明显差异。对患者（#5，#6，#8）的腹水细胞免疫荧光实验也证实了MCA的表型异质性，存在α-SMA阳性和α-SMA阴性的MCAs（图1-3B）。该结果显示，CAF参与了部分MCAs的构成。
华中科技大学博士学位论文36呈阳性表达（标尺为50μm）。（B）IF见部分MCAs有α-SMA（红色）的免疫荧光，DAPI（蓝色）标记细胞核。在同一患者中，可以观察到α-SMA阳性和α-SMA阴性MCAs（标尺为20μm）。图1-4.部分MCAs存在FSP-1及FAP阳性细胞。IHC染色见CAF标记物FSP-1及FAP在部分MCAs呈阳性表达（标尺为20μm）。五、CAF促进MCA的形成为了阐明CAF在恶性腹水MCA形成中的作用，我们用原代肿瘤细胞和SKOV3细胞单独或与CAF悬浮共培养5天，进行MCA形成实验。除SKOV3细胞外，还使用从HGSOC患者（#6）的腹水中通过流式分选获得的原代肿瘤细胞（图1-5A）。从HGSOC患者的有转移灶的网膜组织中分离的原代CAF最初呈多极和单极型，融合成典型的纺锤形，细胞之间鱼贯相连或平行排列，或呈漩涡样排列。成纤维细胞免疫组化显示vimentin呈阳性表达，细胞角蛋白8呈阴性表达，CAF为α-SMA阳性表达（图1-5B）。Westernblot蛋白印迹试验证实了前三代CAF中的α-SMA呈阳性表达（图1-5C）。在悬浮培养5天后，TC-CAF共培养组MCAs的数量和体积均显著大于单独培养组的MCAs（图1-5D），组间差异有统计学意义（图1-5E，F）。
本文编号：3457594
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
腹水中MCAs的形态
华中科技大学博士学位论文34在间皮细胞中呈阳性表达。雌激素受体(EstrogenReceptor,ER)主要在卵囊泡膜细胞和某些基质细胞中表达，但它在卵巢癌中表达却很低。该实验结果显示MCAs主要由卵巢肿瘤细胞（Tumorcell，TC）构成。图1-2.MCAs主要由卵巢肿瘤细胞构成。IHC染色见上皮肿瘤标记物Moc-31、卵巢癌标记物PAX8及Ki67呈阳性表达；间皮标记物Claudin4、Calretinin及ER呈阴性表达（标尺为20μm）。四、CAF参与了一部分MCAs的构成为了进一步明确CAF是否参与腹水MCAs的构成，我们通过免疫组化染色检测CAF标记物：α-SMA、FSP-1及FAP在石蜡包埋的腹水细胞中的表达。结果显示，在所研究的患者中，尽管大多数MCAs阴性表达α-SMA，但均可发现α-SMA阳性的MCAs（图1-3A）及FSP-1、FAP阳性MCAs（图1-4）。但是，MCAsTC/CAF与没有CAF的MCAsTC在形态、大小和致密程度上没有观察到明显差异。对患者（#5，#6，#8）的腹水细胞免疫荧光实验也证实了MCA的表型异质性，存在α-SMA阳性和α-SMA阴性的MCAs（图1-3B）。该结果显示，CAF参与了部分MCAs的构成。
华中科技大学博士学位论文36呈阳性表达（标尺为50μm）。（B）IF见部分MCAs有α-SMA（红色）的免疫荧光，DAPI（蓝色）标记细胞核。在同一患者中，可以观察到α-SMA阳性和α-SMA阴性MCAs（标尺为20μm）。图1-4.部分MCAs存在FSP-1及FAP阳性细胞。IHC染色见CAF标记物FSP-1及FAP在部分MCAs呈阳性表达（标尺为20μm）。五、CAF促进MCA的形成为了阐明CAF在恶性腹水MCA形成中的作用，我们用原代肿瘤细胞和SKOV3细胞单独或与CAF悬浮共培养5天，进行MCA形成实验。除SKOV3细胞外，还使用从HGSOC患者（#6）的腹水中通过流式分选获得的原代肿瘤细胞（图1-5A）。从HGSOC患者的有转移灶的网膜组织中分离的原代CAF最初呈多极和单极型，融合成典型的纺锤形，细胞之间鱼贯相连或平行排列，或呈漩涡样排列。成纤维细胞免疫组化显示vimentin呈阳性表达，细胞角蛋白8呈阴性表达，CAF为α-SMA阳性表达（图1-5B）。Westernblot蛋白印迹试验证实了前三代CAF中的α-SMA呈阳性表达（图1-5C）。在悬浮培养5天后，TC-CAF共培养组MCAs的数量和体积均显著大于单独培养组的MCAs（图1-5D），组间差异有统计学意义（图1-5E，F）。
本文编号：3457594
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