乌头汤缓解神经病理性疼痛的药效物质基础及其作用机制探索
发布时间：2021-10-26 21:41
研究目的1.采用脊神经结扎（Spinal Nerve Ligation,SNL）模型,模拟神经病理性疼痛（Neuropathic Pain,NP）的疾病状态,考察乌头汤缓解NP的镇痛作用特点,并分析其作用于NP的病理环节。2.通过网络药理学方法预测乌头汤缓解NP的分子调控机制,并结合化学特性评价、分子对接模拟、表面等离子共振结果筛选乌头汤缓解NP的关键药效物质。3.采用两种NP动物模型,借助激动剂和拮抗剂从正、反两个方向,验证乌头汤缓解NP关键药效物质的镇痛作用及其分子调控机制。研究方法1.乌头汤缓解NP的药效特点及其药理作用探索1.1动物及分组实验动物为雄性ICR小鼠（8周龄）,无特定病原体（SPF）级。组别设置为:假手术组（Sham）、SNL组、SNL-乌头汤低剂量组（3.15g/kg,约为临床日剂量的0.5倍）、SNL-乌头汤中剂量组（6.30g/kg,约为临床日剂量的1倍）、SNL-乌头汤组（12.60g/kg,约为临床日剂量的2倍）。从手术后第一天开始灌胃给药,连续给药21天,Sham组及SNL组用等体积的蒸馏水代替。1.2镇痛药效学指标的检测1.2.1机械痛阈值在符合行为学...
【文章来源】：中国中医科学院北京市
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１乌头汤对ＳＮＬ模型小鼠机械痛阈值和热痛阈值的影响
ａｌｉｌ??Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５?Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５??ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）?ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）＂＂??Ｃ?Ｄ??ｃｎ４?１００－｝?］?１００－１??Ｑ?＃?Ｏ??＾?８０－?＊?－Ｔ－?Ｏ?８０－?＃??ｉ：ｉｕｌｌｌｌ?ｉｄＤｌｌｌｌ??Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５?Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５??ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）?ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）??图２乌头汤对ＳＮＬ小鼠脊髓背角组织中炎症因子的影响。不同组别小鼠脊髓背??角组织中ＩＬ－１?０?（Ａ），ＴＮＦ－?ａ?（Ｂ），ＣＣＬ２（Ｃ）以及ＣＸＣＬ１?（Ｄ）的含量。（数据为均数??土标准差，“＃”表示与Ｓｈａｍ组相比／＜０？?０５，?“林”分别表示与ＳＮＬ组??相比?Ｋ０．?０５?和?０．０１。）??３．２乌头汤可显著改善ＮＰ小鼠的疼痛症状??乌头汤低、中、高剂量均可有效升高ＳＮＬ小鼠的机械痛阈值（均Ｋ０．?０５），??单次给药后该现象至少持续２个小时，其中给药１小时后药效最佳。每天给药持??续７天后检测行为学，发现乌头汤的时－效关系与给药第１天类似，提示动物未??对乌头汤产生药物耐受问题。乌头汤高剂量可以显著升高ＳＮＬ小鼠的机械痛阈??值，但是Ｓｈａｍ组小鼠给予同样剂量的乌头汤后其机械痛阈值的基线没有改变，??提示乌头汤仅在ＮＰ状态下发挥作用。热板实验的检测结果表明，乌头汤可剂量??依赖性地升高ＳＮＬ小鼠的热痛阈值，不存在药物耐受现象，且对Ｓｈａｍ组小鼠的??热痛阈值基线无明显影响。??ＥＬＩＳＡ检测不同组别小鼠脊髓背角组织中炎症
索???３．３?ＮＰ发病相关的基因主要调控胶质细胞活化、神经－免疫反应和神经炎症??转录组表达谱检测到ＳＮＬ组与Ｓｈａｍ组共有５６７个差异表达基因，其中３３１??个为上调基因，２３６个为下调基因。上述基因中有１８个基因是己知ＮＰ相关基因，??分别是?ＡＤＣＹ１、ＡＤＲＡ２Ａ、Ｂ４ＧＡＬＴ３、ＢＲＡＦ、ＢＴＧ２、ＣＨＲＮＡ４、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＧＦＲ、ＧＬ０１、??ＨＴＲ１Ｄ、ＴＵＲ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＰＫ１、ＰＧＲ、ＰＮＰＬＡ６、ＳＣＮ１Ｂ、ＴＥＫ?和?ＷＡＲＳ。此外，如??图３?（分层聚类分析－Ａ，散点图－Ｂ）所示，ＳＮＬ组与Ｓｈａｍ组显著不同。??基于上述差异表达基因信息以及己知ＮＰ相关基因信息，我们构建了?“ＳＮＩ，??所致ＮＰ失衡网络”，该网络由７６５个节点和４７７４条边组成，以节点的网络拓扑??特征值度的数值大于所有节点度的中位数为标准，筛选出２４８个ｈｕｂ基因，将其??视为ＮＰ相关基因。如图３Ｃ所示，通路富集分析结果表明，上述ｈｕｂ基因主要参??与胶质细胞活化、神经－免疫反应和神经炎症相关的信号通路（Ｋ０．?０５）。其中，??神经活性配体受体相互作用，钙离子信号通路、神经营养素信号通路、间隙连接??和长期增强通路是胶质细胞活化相关的信号通路；Ｆｃ?ｅｐｓｉｌｏｎ－ＲＴ和Ｔ细胞受体??信号通路可介导神经－免疫反应；ＭＡＰＫ信号通路、细胞因子－细胞因子受体相互??作用、Ｊａｋ－ＳＴＡＴ信号通路、趋化因子信号通路、ＮＯＤ样受体信号通路及Ｔｏｌｌ样??受体信号通路与神经炎症密切相关。??Ａ?Ｃ?Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔａｔｅ?＿?Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ?ｐａｍ?ｓｔａｔｅ??篇?、，夺＃?ｖ？＇一
【参考文献】：
期刊论文
[1]芍药甘草汤合四物汤对糖尿病周围血管病变患者血液流变学及周围神经传导速度的影响[J]. 于洋,张海丽,王景,麻继超. 四川中医. 2020(01)
[2]加味身痛逐瘀汤对骨质疏松性疼痛患者的干预效应研究[J]. 韩鹏勃,于继岗. 辽宁中医杂志. 2019(12)
[3]从BDNF/TrkB信号通路探讨乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠脑神经元的保护作用[J]. 师钰琪,吴红艳,朱春燕,林娜. 中国实验方剂学杂志. 2020(07)
[4]不同药物组合雾化吸入治疗小儿喘息性支气管肺炎的临床观察[J]. 缪博. 世界最新医学信息文摘. 2019(97)
[5]葛根素对神经病理性疼痛模型大鼠机械/热痛觉超敏的影响[J]. 谢恒韬,段轶轩,张照庆,王娟,夏中元. 中国疼痛医学杂志. 2019(11)
[6]加味乌头汤加减治疗癌性疼痛临床作用评价[J]. 王鹏辉. 中西医结合心血管病电子杂志. 2019(30)
[7]甘草苷治疗抑郁症和糖尿病共病的网络药理学作用机制研究[J]. 刘鹏,田俊生. 天然产物研究与开发. 2019(11)
[8]乌头汤调控海马BDNF/Trk B通路以缓解神经病理性疼痛的痛共情绪症状[J]. 吴红艳,师钰琪,朱春燕,林娜. 中国实验方剂学杂志. 2020(01)
[9]基于网络药理学研究芍药苷治疗糖尿病周围神经病变作用机制[J]. 邢琪昌,陈佳,李伟,刘征,刘湘. 中国药理学与毒理学杂志. 2019(09)
[10]芍药苷镇痛机制的研究进展[J]. 王冰,孙义. 世界最新医学信息文摘. 2019(72)
硕士论文
[1]元胡止痛方及其配伍镇痛药效评价及分子机制研究[D]. 苏瑾.中国中医科学院 2019
[2]氧化苦参碱对神经病理性疼痛镇痛中N-、L-型钙通道介导作用研究[D]. 王鑫蕊.辽宁中医药大学 2018
[3]鞘内注射青藤碱对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用和机制研究[D]. 王杉.厦门大学 2017
[4]青藤碱对神经病理性疼痛大鼠脊髓GLT-1和GLAST mRNA表达的影响[D]. 于洁.兰州大学 2015
[5]基于NF-κB信号通路探讨氧化苦参碱对神经病理性疼痛的镇痛作用[D]. 许雅琼.宁夏医科大学 2015
[6]基于CaMKII/CREB信号通路探讨氧化苦参碱对神经病理性疼痛的镇痛作用[D]. 顿玲露.宁夏医科大学 2014
本文编号：3460234
【文章来源】：中国中医科学院北京市
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１乌头汤对ＳＮＬ模型小鼠机械痛阈值和热痛阈值的影响
ａｌｉｌ??Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５?Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５??ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）?ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）＂＂??Ｃ?Ｄ??ｃｎ４?１００－｝?］?１００－１??Ｑ?＃?Ｏ??＾?８０－?＊?－Ｔ－?Ｏ?８０－?＃??ｉ：ｉｕｌｌｌｌ?ｉｄＤｌｌｌｌ??Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５?Ｓｈａｍ?ＳＮＬ?１２．６０?６．３０?３．１５??ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）?ＷＴＤ?（ｇ／ｋｇ）??图２乌头汤对ＳＮＬ小鼠脊髓背角组织中炎症因子的影响。不同组别小鼠脊髓背??角组织中ＩＬ－１?０?（Ａ），ＴＮＦ－?ａ?（Ｂ），ＣＣＬ２（Ｃ）以及ＣＸＣＬ１?（Ｄ）的含量。（数据为均数??土标准差，“＃”表示与Ｓｈａｍ组相比／＜０？?０５，?“林”分别表示与ＳＮＬ组??相比?Ｋ０．?０５?和?０．０１。）??３．２乌头汤可显著改善ＮＰ小鼠的疼痛症状??乌头汤低、中、高剂量均可有效升高ＳＮＬ小鼠的机械痛阈值（均Ｋ０．?０５），??单次给药后该现象至少持续２个小时，其中给药１小时后药效最佳。每天给药持??续７天后检测行为学，发现乌头汤的时－效关系与给药第１天类似，提示动物未??对乌头汤产生药物耐受问题。乌头汤高剂量可以显著升高ＳＮＬ小鼠的机械痛阈??值，但是Ｓｈａｍ组小鼠给予同样剂量的乌头汤后其机械痛阈值的基线没有改变，??提示乌头汤仅在ＮＰ状态下发挥作用。热板实验的检测结果表明，乌头汤可剂量??依赖性地升高ＳＮＬ小鼠的热痛阈值，不存在药物耐受现象，且对Ｓｈａｍ组小鼠的??热痛阈值基线无明显影响。??ＥＬＩＳＡ检测不同组别小鼠脊髓背角组织中炎症
索???３．３?ＮＰ发病相关的基因主要调控胶质细胞活化、神经－免疫反应和神经炎症??转录组表达谱检测到ＳＮＬ组与Ｓｈａｍ组共有５６７个差异表达基因，其中３３１??个为上调基因，２３６个为下调基因。上述基因中有１８个基因是己知ＮＰ相关基因，??分别是?ＡＤＣＹ１、ＡＤＲＡ２Ａ、Ｂ４ＧＡＬＴ３、ＢＲＡＦ、ＢＴＧ２、ＣＨＲＮＡ４、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＧＦＲ、ＧＬ０１、??ＨＴＲ１Ｄ、ＴＵＲ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＰＫ１、ＰＧＲ、ＰＮＰＬＡ６、ＳＣＮ１Ｂ、ＴＥＫ?和?ＷＡＲＳ。此外，如??图３?（分层聚类分析－Ａ，散点图－Ｂ）所示，ＳＮＬ组与Ｓｈａｍ组显著不同。??基于上述差异表达基因信息以及己知ＮＰ相关基因信息，我们构建了?“ＳＮＩ，??所致ＮＰ失衡网络”，该网络由７６５个节点和４７７４条边组成，以节点的网络拓扑??特征值度的数值大于所有节点度的中位数为标准，筛选出２４８个ｈｕｂ基因，将其??视为ＮＰ相关基因。如图３Ｃ所示，通路富集分析结果表明，上述ｈｕｂ基因主要参??与胶质细胞活化、神经－免疫反应和神经炎症相关的信号通路（Ｋ０．?０５）。其中，??神经活性配体受体相互作用，钙离子信号通路、神经营养素信号通路、间隙连接??和长期增强通路是胶质细胞活化相关的信号通路；Ｆｃ?ｅｐｓｉｌｏｎ－ＲＴ和Ｔ细胞受体??信号通路可介导神经－免疫反应；ＭＡＰＫ信号通路、细胞因子－细胞因子受体相互??作用、Ｊａｋ－ＳＴＡＴ信号通路、趋化因子信号通路、ＮＯＤ样受体信号通路及Ｔｏｌｌ样??受体信号通路与神经炎症密切相关。??Ａ?Ｃ?Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔａｔｅ?＿?Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ?ｐａｍ?ｓｔａｔｅ??篇?、，夺＃?ｖ？＇一
【参考文献】：
期刊论文
[1]芍药甘草汤合四物汤对糖尿病周围血管病变患者血液流变学及周围神经传导速度的影响[J]. 于洋,张海丽,王景,麻继超. 四川中医. 2020(01)
[2]加味身痛逐瘀汤对骨质疏松性疼痛患者的干预效应研究[J]. 韩鹏勃,于继岗. 辽宁中医杂志. 2019(12)
[3]从BDNF/TrkB信号通路探讨乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠脑神经元的保护作用[J]. 师钰琪,吴红艳,朱春燕,林娜. 中国实验方剂学杂志. 2020(07)
[4]不同药物组合雾化吸入治疗小儿喘息性支气管肺炎的临床观察[J]. 缪博. 世界最新医学信息文摘. 2019(97)
[5]葛根素对神经病理性疼痛模型大鼠机械/热痛觉超敏的影响[J]. 谢恒韬,段轶轩,张照庆,王娟,夏中元. 中国疼痛医学杂志. 2019(11)
[6]加味乌头汤加减治疗癌性疼痛临床作用评价[J]. 王鹏辉. 中西医结合心血管病电子杂志. 2019(30)
[7]甘草苷治疗抑郁症和糖尿病共病的网络药理学作用机制研究[J]. 刘鹏,田俊生. 天然产物研究与开发. 2019(11)
[8]乌头汤调控海马BDNF/Trk B通路以缓解神经病理性疼痛的痛共情绪症状[J]. 吴红艳,师钰琪,朱春燕,林娜. 中国实验方剂学杂志. 2020(01)
[9]基于网络药理学研究芍药苷治疗糖尿病周围神经病变作用机制[J]. 邢琪昌,陈佳,李伟,刘征,刘湘. 中国药理学与毒理学杂志. 2019(09)
[10]芍药苷镇痛机制的研究进展[J]. 王冰,孙义. 世界最新医学信息文摘. 2019(72)
硕士论文
[1]元胡止痛方及其配伍镇痛药效评价及分子机制研究[D]. 苏瑾.中国中医科学院 2019
[2]氧化苦参碱对神经病理性疼痛镇痛中N-、L-型钙通道介导作用研究[D]. 王鑫蕊.辽宁中医药大学 2018
[3]鞘内注射青藤碱对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用和机制研究[D]. 王杉.厦门大学 2017
[4]青藤碱对神经病理性疼痛大鼠脊髓GLT-1和GLAST mRNA表达的影响[D]. 于洁.兰州大学 2015
[5]基于NF-κB信号通路探讨氧化苦参碱对神经病理性疼痛的镇痛作用[D]. 许雅琼.宁夏医科大学 2015
[6]基于CaMKII/CREB信号通路探讨氧化苦参碱对神经病理性疼痛的镇痛作用[D]. 顿玲露.宁夏医科大学 2014
本文编号：3460234
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