miR-182-5p下调介导苦参碱抑制乳头状甲状腺癌恶性生物学行为的机制研究
发布时间：2021-10-29 20:05
目的:以miRNA-182在乳头状甲状腺癌组织及细胞中高表达为切入点,拟在组织、细胞和分子水平探讨苦参碱抗乳头状甲状腺癌的潜在分子机制,并在此基础上寻找新的抗分化型甲状腺癌的化疗药物及潜在的诊疗干预靶点,对于提高甲状腺癌的防治水平,改善预后及提高患者生存率具有重要临床意义。方法:1.RT-qPCR检测miR-182在乳头状甲状腺癌组织及细胞中的表达:分别收集乳头状甲状腺癌组织和其对应的正常组织标本,RT-qPCR在组织水平检测miRNA-182-3p和miRNA-182-5p的表达;培养人正常甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1和人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1、BCPAP及K1,在细胞水平检测miRNA-182-3p和miRNA-182-5p的水平。2.抑制miRNA-182-5p,CCK-8检测miRNA-182-5p对乳头状甲状腺癌细胞TPC-1和BCPAP增殖的影响:用阳离子脂质体分别将抑制miRNA-182-5p的miRNA-182-5p inhibitor和其对照inhibitor NC转入TPC-1与BCPAP细胞,24h后传代培养上述细胞至96孔板,分别于培养的0、24...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：133 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 实验材料和方法
1.1 实验仪器
1.2 实验材料与试剂
1.3 主要的实验方法
1.3.1 细胞培养
1.3.2 RNA提取实验
1.3.3 miRNA的 cDNA合成
1.3.4 miRNA RT-qPCR扩增
1.3.5 细胞转染实验
1.3.6 RT-qPCR检测不同浓度的miRNA-182-5p抑制剂转染TPC-1和BCPAP细胞后miRNA-182-5p的表达
1.3.7 细胞增殖实验
1.3.8 细胞迁移实验
1.3.9 细胞凋亡实验
1.3.10 RT-qPCR检测不同浓度苦参碱对miRNA-182-5p表达的影响
1.3.11 CCK-8 检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞增殖的影响
1.3.12 Transwell迁移实验检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞迁移的影响
1.3.13 流式细胞技术检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞凋亡的影响
1.3.14 RT-qPCR检测不同浓度的mi RNA-182-5p模拟物转染TPC-1和BCPAP细胞后miRNA-182-5p的表达
1.3.15 实验分组及药物干预
1.3.16 过表达miRNA-182-5p,CCK-8 检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞增殖的影响
1.3.17 过表达miRNA-182-5p,Transwell迁移实验检测苦参碱对TPC-1 和BCPAP细胞迁移的影响
1.3.18 过表达miRNA-182-5p,流式细胞仪检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞凋亡的影响
1.3.19 蛋白质的免疫印迹实验
1.3.20 慢病毒的感染实验
1.3.21 裸鼠异位移植瘤实验
1.3.22 活体成像检测乳头状甲状腺癌细胞体内成瘤实验
1.3.23 免疫组织化学染色的原理及步骤
1.3.24 HE染色的实验步骤
1.3.25 裸鼠肝功、肾功和心肌酶的测定步骤
1.3.26 数据的处理与统计分析
第二部分 细胞水平探讨苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞恶性生物学行为的分子机制
2.1 miR-182对PTC细胞生物学功能的影响
2.1.1 引言
2.1.2 miR-182在乳头状甲状腺癌组织及细胞中表达上调
2.1.3 miRNA-182-5p inhibitor能有效抑制miRNA-182-5p的表达
2.1.4 下调的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP细胞的增殖
2.1.5 下调的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP细胞的迁移
2.1.6 下调的miRNA-182-5p诱导TPC-1和BCPAP细胞的凋亡
2.1.7 讨论
2.2 苦参碱对miRNA-182-5p及 TPC-1和BCPAP细胞恶性生物学功能的影响
2.2.1 引言
2.2.2 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞中miRNA-182-5p的表达
2.2.3 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞的增殖
2.2.4 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞的迁移
2.2.5 苦参碱诱导TPC-1和BCPAP细胞的凋亡
2.2.6 讨论
2.3 过表达miR-182-5p削弱苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞恶性生物学功能的研究
2.3.1 引言
2.3.2 筛选最佳的过表达miR-182-5p的模拟物浓度
2.3.3 过表达miR-182-5p削弱了苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖
2.3.4 过表达miR-182-5p减弱了苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞的迁移
2.3.5 过表达miR-182-5p抑制了苦参碱诱导乳头状甲状腺癌细胞的凋亡
2.3.6 讨论
2.4 苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞增殖、迁移和诱导其凋亡的分子机制
2.4.1 引言
2.4.2 苦参碱抑制p-ERK/Bcl-2 和促进Bax和 Caspase3 信号分子的表达
2.4.3 过表达miR-182-5p减弱了苦参碱对p-ERK/Bcl-2/Bax/Caspase3 信号分子的调节作用
2.4.4 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞中N-cadherin、Vinmentin和促进E-cadherin的表达
2.4.5 过表达miR-182-5p,部分削弱了苦参碱对N-cadherin、E-cadherin和Vinmentin的调节作用
2.4.6 讨论
第三部分 体内研究苦参碱干预乳头状甲状腺癌的效应及机制
3.1 引言
3.2 检测携带过表达miRNA-182 慢病毒感染的TPC-1 细胞中miRNA-182-5p的表达水平
3.3 苦参碱部分通过下调miR-182-5p抑制裸鼠移植瘤的研究
3.4 小动物活体成像观察苦参碱抑制移植瘤瘤体大小及转移的研究
3.5 苦参碱部分通过下调miRNA-182-5p调节瘤体组织Bcl-2和Caspase3 的表达抑制了瘤体的生长
3.6 苦参碱部分通过下调miRNA-182-5p抑制肿瘤的侵袭转移
3.7 苦参碱对裸鼠的肝、肾和心脏组织没有毒副作用
3.8 讨论
全文结论
参考文献
研究展望
在学期间的研究成果
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Matrine attenuates oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis in doxorubicin-induced cardiotoxicity via maintaining AMPKα/UCP2 pathway[J]. Can Hu,Xin Zhang,Wenying Wei,Ning Zhang,Haiming Wu,Zhenguo Ma,Lingli Li,Wei Deng,Qizhu Tang. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(04)
[2]中医药治疗甲状腺癌研究进展[J]. 艾望,张莹雯,沈鑫,夏玉坤. 辽宁中医药大学学报. 2018(12)
[3]甲状腺癌中医药诊治研究进展[J]. 王芷乔,夏仲元. 山东中医杂志. 2017(10)
[4]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen. Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[5]中医药治疗甲状腺癌术后之临床体会[J]. 邵灿灿,吕久省,余丹丹,韩青青,胡晓,王萍,刘元炜,潘研,燕树勋. 中国中医基础医学杂志. 2017(07)
[6]苦参碱在抗肿瘤治疗中的研究进展[J]. 李琦,王玲玲,徐佳,尚晓泓,王成彬. 国际检验医学杂志. 2017(04)
[7]中医药治疗甲状腺癌研究近况[J]. 景玺润. 湖南中医杂志. 2016(10)
[8]甲状腺癌的中医药治疗[J]. 周立娟,赵晓珍,王中奇. 黑龙江中医药. 2014(02)
[9]Effect of Matrine on Human Ether à go-go Related Gene （HERG） Channels Expressed in Chinese Hamster Ovary Cells[J]. 吴红金,邹安若,谢芳,杜以梅,曹于,刘宇娜,杨继媛,李新民. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2010(05)
[10]Antitumor effect of matrine in human hepatoma G2 cells by inducing apoptosis and autophagy[J]. Jun-Qiang Zhang, Yu-Min Li, Tao Liu, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, Gansu Province, China; Gansu Provincial Key Laboratory of Digestive System Tumors, Lanzhou 730030, Gansu Province, ChinaWen-Ting He, Xun Li, Wen-Ce Zhou, Department of General Surgery, First Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, ChinaYing-Tai Chen, Xiao-Hui Chen, Jian-Feng Yi, Zhi-Jian Ren, First Clinical Medical School of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2010(34)
本文编号：3465312
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：133 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 实验材料和方法
1.1 实验仪器
1.2 实验材料与试剂
1.3 主要的实验方法
1.3.1 细胞培养
1.3.2 RNA提取实验
1.3.3 miRNA的 cDNA合成
1.3.4 miRNA RT-qPCR扩增
1.3.5 细胞转染实验
1.3.6 RT-qPCR检测不同浓度的miRNA-182-5p抑制剂转染TPC-1和BCPAP细胞后miRNA-182-5p的表达
1.3.7 细胞增殖实验
1.3.8 细胞迁移实验
1.3.9 细胞凋亡实验
1.3.10 RT-qPCR检测不同浓度苦参碱对miRNA-182-5p表达的影响
1.3.11 CCK-8 检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞增殖的影响
1.3.12 Transwell迁移实验检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞迁移的影响
1.3.13 流式细胞技术检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞凋亡的影响
1.3.14 RT-qPCR检测不同浓度的mi RNA-182-5p模拟物转染TPC-1和BCPAP细胞后miRNA-182-5p的表达
1.3.15 实验分组及药物干预
1.3.16 过表达miRNA-182-5p,CCK-8 检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞增殖的影响
1.3.17 过表达miRNA-182-5p,Transwell迁移实验检测苦参碱对TPC-1 和BCPAP细胞迁移的影响
1.3.18 过表达miRNA-182-5p,流式细胞仪检测苦参碱对TPC-1和BCPAP细胞凋亡的影响
1.3.19 蛋白质的免疫印迹实验
1.3.20 慢病毒的感染实验
1.3.21 裸鼠异位移植瘤实验
1.3.22 活体成像检测乳头状甲状腺癌细胞体内成瘤实验
1.3.23 免疫组织化学染色的原理及步骤
1.3.24 HE染色的实验步骤
1.3.25 裸鼠肝功、肾功和心肌酶的测定步骤
1.3.26 数据的处理与统计分析
第二部分 细胞水平探讨苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞恶性生物学行为的分子机制
2.1 miR-182对PTC细胞生物学功能的影响
2.1.1 引言
2.1.2 miR-182在乳头状甲状腺癌组织及细胞中表达上调
2.1.3 miRNA-182-5p inhibitor能有效抑制miRNA-182-5p的表达
2.1.4 下调的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP细胞的增殖
2.1.5 下调的miRNA-182-5p抑制TPC-1和BCPAP细胞的迁移
2.1.6 下调的miRNA-182-5p诱导TPC-1和BCPAP细胞的凋亡
2.1.7 讨论
2.2 苦参碱对miRNA-182-5p及 TPC-1和BCPAP细胞恶性生物学功能的影响
2.2.1 引言
2.2.2 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞中miRNA-182-5p的表达
2.2.3 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞的增殖
2.2.4 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞的迁移
2.2.5 苦参碱诱导TPC-1和BCPAP细胞的凋亡
2.2.6 讨论
2.3 过表达miR-182-5p削弱苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞恶性生物学功能的研究
2.3.1 引言
2.3.2 筛选最佳的过表达miR-182-5p的模拟物浓度
2.3.3 过表达miR-182-5p削弱了苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖
2.3.4 过表达miR-182-5p减弱了苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞的迁移
2.3.5 过表达miR-182-5p抑制了苦参碱诱导乳头状甲状腺癌细胞的凋亡
2.3.6 讨论
2.4 苦参碱抑制乳头状甲状腺癌细胞增殖、迁移和诱导其凋亡的分子机制
2.4.1 引言
2.4.2 苦参碱抑制p-ERK/Bcl-2 和促进Bax和 Caspase3 信号分子的表达
2.4.3 过表达miR-182-5p减弱了苦参碱对p-ERK/Bcl-2/Bax/Caspase3 信号分子的调节作用
2.4.4 苦参碱抑制TPC-1和BCPAP细胞中N-cadherin、Vinmentin和促进E-cadherin的表达
2.4.5 过表达miR-182-5p,部分削弱了苦参碱对N-cadherin、E-cadherin和Vinmentin的调节作用
2.4.6 讨论
第三部分 体内研究苦参碱干预乳头状甲状腺癌的效应及机制
3.1 引言
3.2 检测携带过表达miRNA-182 慢病毒感染的TPC-1 细胞中miRNA-182-5p的表达水平
3.3 苦参碱部分通过下调miR-182-5p抑制裸鼠移植瘤的研究
3.4 小动物活体成像观察苦参碱抑制移植瘤瘤体大小及转移的研究
3.5 苦参碱部分通过下调miRNA-182-5p调节瘤体组织Bcl-2和Caspase3 的表达抑制了瘤体的生长
3.6 苦参碱部分通过下调miRNA-182-5p抑制肿瘤的侵袭转移
3.7 苦参碱对裸鼠的肝、肾和心脏组织没有毒副作用
3.8 讨论
全文结论
参考文献
研究展望
在学期间的研究成果
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Matrine attenuates oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis in doxorubicin-induced cardiotoxicity via maintaining AMPKα/UCP2 pathway[J]. Can Hu,Xin Zhang,Wenying Wei,Ning Zhang,Haiming Wu,Zhenguo Ma,Lingli Li,Wei Deng,Qizhu Tang. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(04)
[2]中医药治疗甲状腺癌研究进展[J]. 艾望,张莹雯,沈鑫,夏玉坤. 辽宁中医药大学学报. 2018(12)
[3]甲状腺癌中医药诊治研究进展[J]. 王芷乔,夏仲元. 山东中医杂志. 2017(10)
[4]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen. Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[5]中医药治疗甲状腺癌术后之临床体会[J]. 邵灿灿,吕久省,余丹丹,韩青青,胡晓,王萍,刘元炜,潘研,燕树勋. 中国中医基础医学杂志. 2017(07)
[6]苦参碱在抗肿瘤治疗中的研究进展[J]. 李琦,王玲玲,徐佳,尚晓泓,王成彬. 国际检验医学杂志. 2017(04)
[7]中医药治疗甲状腺癌研究近况[J]. 景玺润. 湖南中医杂志. 2016(10)
[8]甲状腺癌的中医药治疗[J]. 周立娟,赵晓珍,王中奇. 黑龙江中医药. 2014(02)
[9]Effect of Matrine on Human Ether à go-go Related Gene （HERG） Channels Expressed in Chinese Hamster Ovary Cells[J]. 吴红金,邹安若,谢芳,杜以梅,曹于,刘宇娜,杨继媛,李新民. Chinese Journal of Integrative Medicine. 2010(05)
[10]Antitumor effect of matrine in human hepatoma G2 cells by inducing apoptosis and autophagy[J]. Jun-Qiang Zhang, Yu-Min Li, Tao Liu, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, Gansu Province, China; Gansu Provincial Key Laboratory of Digestive System Tumors, Lanzhou 730030, Gansu Province, ChinaWen-Ting He, Xun Li, Wen-Ce Zhou, Department of General Surgery, First Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, ChinaYing-Tai Chen, Xiao-Hui Chen, Jian-Feng Yi, Zhi-Jian Ren, First Clinical Medical School of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2010(34)
本文编号：3465312
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