白血病抑制因子及其受体对脑室周围白质软化新生大鼠星形胶质细胞凋亡的作用及机制研究

发布时间：2021-10-30 23:09

　　目的:随着早产儿存活率的逐渐增加,早产儿脑白质损伤的发病率也呈现逐年增加的趋势。脑室周围白质软化（periventricular leukomalacia,PVL）是早产儿脑白质损伤的主要类型之一,其损伤部位及程度直接关系到早产儿神经系统功能的发育。但目前该病仍没有有效的临床治疗措施。近些年随着国内外学者对PVL研究的不断深入,人们发现星形胶质细胞活化是早产儿脑白质损伤的一个标志性特征,活化的星形胶质细胞可能不是PVL发生发展的偶然病理反应,而是PVL组织损伤修复过程中的主要参与者。星形胶质细胞在脑白质损伤情况下,可以通过抑制毒性反应的机制维持神经元周围微环境及整个脑组织的稳态,从而发挥保护神经元功能的关键作用。目前有研究表明白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）可通过白血病抑制因子受体（leukemia inhibitory factor receptor,LIFR）介导Stat3信号通路促进体外培养的星形胶质细胞存活,从而保护星形胶质细胞免受活性氧自由基损伤并促进少突胶质前体细胞发育成熟。但星形胶质细胞不同活化状态下LIFR的表达变化以及下游... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :白血病抑制因子对脑室周围白质软化新生大鼠脑白质损伤及星形胶质细胞凋亡的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要药品及试剂的配置
        2.2 研究对象和分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 实验分组
        2.3 研究方法
            2.3.0 PVL动物模型的建立
            2.3.1 新生大鼠脑组织HE染色
            2.3.2 免疫组化染色
            2.3.3 TUNEL及 GFAP双标免疫荧光染色
            2.3.4 Western Blot检测技术
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 PVL新生大鼠一般情况及行为学表现
        3.2 LIF对 PVL大鼠脑组织病理形态学的影响
        3.3 LIF对 PVL大鼠脑白质中相关蛋白表达的影响
            3.3.1 LIF对 PVL大鼠脑白质中GFAP表达的影响
            3.3.2 LIF对 PVL大鼠脑白质中MBP表达的影响
            3.3.3 LIF对 PVL大鼠脑白质中Bax/Bcl2 表达的影响
            3.3.4 LIF对 PVL大鼠脑白质中LIFR表达的影响
        3.4 LIF对 PVL大鼠脑白质中星形胶质细胞凋亡的影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :LIF及 LIFR在氧糖剥夺诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡中的作用及机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 研究方法
            2.3.1 原代大鼠星形胶质细胞培养及鉴定
            2.3.2 氧糖剥夺诱导原代培养星形胶质细胞凋亡模型建立
            2.3.3 实时荧光定量PCR检测技术
            2.3.4 流式细胞仪检测技术
            2.3.5 TUNEL染色法
            2.3.6 MTT法检测技术
            2.3.7 Western Blot检测技术
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 原代培养大鼠星形胶质细胞鉴定
        3.2 氧糖剥夺后星形胶质细胞LIF的表达变化
        3.3 氧糖剥夺条件下LIF干预后原代培养星形胶质细胞凋亡的变化
            3.3.1 氧糖剥夺条件下LIF干预后星形胶质细胞凋亡形态学观察
            3.3.2 氧糖剥夺条件下LIF干预后星形胶质细胞凋亡水平的变化
        3.4 氧糖剥夺条件下LIF干预后原代培养星形胶质细胞活力变化
        3.5 氧糖剥夺条件下LIF干预后星形胶质细胞LIFR表达变化
            3.5.1 氧糖剥夺条件下LIF干预后星形胶质细胞LIFR的 mRNA表达变化
            3.5.2 氧糖剥夺条件下LIF干预后星形胶质细胞LIFR的蛋白表达变化
        3.6 氧糖剥夺条件下LIF干预后星形胶质细胞凋亡蛋白及相关信号通路蛋白的变化
    4 讨论
    5 结论
第三部分 沉默LIFR对氧糖剥夺诱导星形胶质细胞凋亡的影响及机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 研究方法
            2.3.1 原代大鼠星形胶质细胞培养
            2.3.2 氧糖剥夺诱导原代培养星形胶质细胞凋亡模型建立
            2.3.3 SiRNA基因干扰技术
            2.3.4 流式细胞仪检测技术
            2.3.5 MTT检测法
            2.3.6 TUNEL染色法
            2.3.7 Western Blot方法
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 SiRNA抑制原代培养星形胶质细胞LIFR表达情况
            3.1.1 SiRNA瞬时转染星形胶质细胞情况
            3.1.2 原代星形胶质细胞LIFR表达抑制效果最好的siRNA及时间点
            3.1.3 抑制LIFR表达后原代星形胶质细胞中LIFR蛋白表达情况
        3.2 沉默LIFR后星形胶质细胞在常氧和氧糖剥夺条件下活力变化
        3.3 沉默LIFR后星形胶质细胞在常氧和氧糖剥夺条件下凋亡水平变化
        3.4 沉默LIFR后星形胶质细胞的凋亡蛋白及相关信号通路蛋白的变化
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]BCI induces apoptosis via generation of reactive oxygen species and activation of intrinsic mitochondrial pathway in H1299 lung cancer cells[J]. Jong-Woon Shin,Sae-Bom Kwon,Yesol Bak,Sang-Ku Lee,Do-Young Yoon.  Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[2]Pathophysiology of periventricular leukomalacia: what we learned from animal models[J]. Nahla Zaghloul,Mohamed Ahmed.  Neural Regeneration Research. 2017(11)
[3]Reactive astrocyte scar and axon regeneration:suppressor or facilitator?[J]. Yosuke Ohtake,George M.Smith,Shuxin Li.  Neural Regeneration Research. 2016(07)
[4]New advances on glial activation in health and disease[J]. Kim Mai Lee,Andrew G Mac Lean.  World Journal of Virology. 2015(02)
[5]內源性白血病抑制因子在脑室周围白质软化新生大鼠脑组织中的表达[J]. 范玉颖,于涛,张俊梅,王华,赵桂锋,刘波.  中国当代儿科杂志. 2014(09)



本文编号：3467595