基于AMPK/PGC-1α通路探讨亚甲蓝对脓毒症脑能量代谢调控作用

发布时间：2021-11-12 01:35

　　目的:本研究的目的是在观察脓毒症相关性脑病（Sepsis-associated Encephalopathy,SAE）线粒体损伤的基础上,探讨亚甲蓝（Methylene Blue,MB）通过AMPK/PGC-1α通路对SAE脑能量代谢的调控作用。主要研究包括:1)制备脓毒症相关性脑病的细胞实验模型,观察线粒体损伤,三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）水平、细胞凋亡等;2)探讨MB在SAE细胞模型中对AMPK/PGC-1α通路的激活以及能量调控;3)建立Wistar大鼠脓毒症模型,探讨亚甲蓝在SAE动物模型中对SAE Wistar大鼠的AMPK/PGC-1α通路的激活以及能量调控。方法:1)应用细胞原代培养技术分离纯化Wistar大鼠乳鼠（出生3天以内）的大脑皮质星形胶质细胞,进行纯度鉴定后,以不同浓度的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）和20 ng/mL的干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）联合孵育,依照孵育时间（6h,12h,24h,48h）以及脂多糖的浓度（50 ng/mL,100 ng/mL,200 ng/mL）制备... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：148 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-1分组示意图

新疆医科大学博士学位论文22图1-2技术路线图Fig.1-2Studytechnologyroadmap2结果2.1原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯度鉴定应用ImageJ软件对图片中的抗GFAP抗体标记的绿色星形胶质细胞和蓝色DAPI复染的全部细胞核计数，算出二者比例，为原代培养的星形胶质细胞纯度，随机选3个视野，求得纯度平均值为98%以上，视为纯度合格，满足后续实验需要。如图1-3所示：图1-3原代培养星形胶质细胞纯度鉴定（200×）Fig.1-3Purityidentificationofprimaryculturedastrocytes（200×）

新疆医科大学博士学位论文22图1-2技术路线图Fig.1-2Studytechnologyroadmap2结果2.1原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯度鉴定应用ImageJ软件对图片中的抗GFAP抗体标记的绿色星形胶质细胞和蓝色DAPI复染的全部细胞核计数，算出二者比例，为原代培养的星形胶质细胞纯度，随机选3个视野，求得纯度平均值为98%以上，视为纯度合格，满足后续实验需要。如图1-3所示：图1-3原代培养星形胶质细胞纯度鉴定（200×）Fig.1-3Purityidentificationofprimaryculturedastrocytes（200×）

【参考文献】：
期刊论文
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[9]日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂干预脂多糖诱导的小鼠脓毒症[J]. 万勇坤,李徽徽,左琳,王小莉,王黎源,贺文欣,姜辉,王守祥,盛洁,张敏,钱海春,杨芳芳,谢红,高世芳,方强,杨小迪,刘牧林.  南方医科大学学报. 2018(05)
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本文编号：3489943