肌肉再生过程中Hsp90β通过与MDM2互作调控p53依赖的细胞衰老的机制研究
发布时间：2021-11-13 11:21
细胞衰老是一种持久的细胞增殖停滞,但近期研究显示细胞衰老在发育和组织再生中起着重要作用。最近的研究揭示,热休克蛋白在调节肌肉再生中的重要作用。热休克蛋白Hsp90（Heat shock protein 90 KDa,Hsp90）有两个亚型:诱导表达亚型Hsp90α和持续表达亚型Hsp90β。本论文发现Hsp90β在肌肉再生过程中表达上调,而Hsp90α表达水平在肌肉再生过程中没有明显差异,提示Hsp90β更有可能参与肌肉再生调节过程。RNAseq分析以及随后的qPCR验证结果都揭示,特异性敲降Hsp90β后,成肌细胞中的p21转录水平升高。在这过程中,抑制Hsp90β后诱导p21上调依赖于p53。过表达Hsp90β和siRNA敲降实验结果均表明,Hsp90β通过蛋白酶体途径抑制p53的稳定性。另外,成肌细胞中Hsp90β的表达降低导致细胞增殖减少,诱导p53调节的细胞衰老。之前报道的研究结果表明,在肿瘤中Hsp90与突变型p53存在相互作用,并对突变型p53有保护作用。然而,本研究发现,在成肌细胞中Hsp90β特异性结合野生型p53。此外,Hsp90β通过与p53的主要E3泛素化连接酶...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３．１．１?Ｈｓｐ９〇ｐ在肌肉再生过程中表达上调??（Ａ）８心（ＣＴＸ），
图３．１．２敲降Ｈｓｐ９０ｐ特异性诱导成肌细胞ｐ２１上调。??（Ａ）对照或Ｈｓｐ９〇ＰｓｉＲＮＡ转染后Ｃ２Ｃ１２成肌细胞的ＲＮＡ－ｓｅｑ分析热图。蓝色??表示成肌细胞中敲降Ｈｓｐ９０ｐ后下调的基因，而红色表示上调基因。以Ｌｏｇ２（ＦＰＫＭ??倍数变化）值显示。（Ｂ）对照、Ｈｓｐ９０ａ或Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ转染Ｃ２Ｃ１２成肌细胞??４８小时后ｑＰＣＲ分析ｐ２１表达。以Ａｃｔｉｎ作为内参基因分析基因相对表达，独立??实验重复３次，（＊＊：?ｐ＜０．０１）。（Ｃ）对照、Ｈｓｐ９０ａ或Ｈｓｐ９〇ｐｓｉＲＮＡ转染成肌??细胞后Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测ｐ２］表达水平。ｔｕｂｕｌｉｎ作为内参蛋白；（Ｄ?）对照或??Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ转染成肌细胞后用ｐ２１抗体进行免疫染色。蓝色为Ｈｏｅｃｈｓｔ染色，??红色为Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ染色，分别标记细胞核和肌动蛋白丝。比例尺：２０）＿ｉｍ。??负责ｐ２１转录的主要转录因子有Ｐ５３、Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４［１７］。为研究Ｈｓｐ９０ｐ??通过何种通路调控ｐ２１转录水平，在抑制Ｈｓｐ９〇ｐ表达的同时，分别敲降ｐ５３、??Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４，抑制?ｐ５３、Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４?表达上升，然后此时检测??
浙江大学博士学位论文?实验结果??图?３．１．３?Ｈｓｐ９０（３抑制?ｐ２１?需要?ｐ５３。??（Ａ）对照、Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ、Ｈｓｐ９０（３?ｓｉＲＮＡ?分别与?ｐ５３?或?ＦｏｘＯｌ／３?或?Ｓｍａｄ２／３／４??ｓｉＲＮＡ同时转染成肌细胞４８ｈ，免疫荧光染色，绿色标记为ｐ２１，蓝色为Ｈｏｅｃｈｓｔ??染色标记细胞核；（Ｂ）对照、Ｈｓｐ９０ｐ?ｓｉＲＮＡ、Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ与ｐ５３?ｓｉＲＮＡ同时??转染成肌细胞４８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ分析，ｔｕｂｕｌｉｎ作为内参蛋白。??根据以上结果我们提出假设，成肌细胞中Ｈｓｐ９０ｐ的下调可能导致ｐ５３的表达??增加。然而，之前有充分证据表明，在肿瘤中Ｈｓｐ９０的表达下调或活性抑制会加??速ｐ５３降解［１６］。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ和免疫荧光染色的方法，检测成肌细胞中Ｈｓｐ９〇ｐ??对ｐ５３的表达影响。与我们的假设一致，敲降Ｈｓｐ９０ｐ特异地显著增加成肌细胞核??内ｐ５３的表达，而Ｈｓｐ９０ａ对ｐ５３表达没有明显影响（图３．１．４Ａ，?Ｂ）。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Senescence-like changes induced by expression of p21Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line[J]. XI CHEN1, WEI ZHANG2, YUN FEI GAO1, XIAO QIN SU1, ZHONG HE ZHAI1,*1 College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China2 The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of the Ministry of Education, College of Life Sciences,. Cell Research. 2002(Z1)
本文编号：3492931
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３．１．１?Ｈｓｐ９〇ｐ在肌肉再生过程中表达上调??（Ａ）８心（ＣＴＸ），
图３．１．２敲降Ｈｓｐ９０ｐ特异性诱导成肌细胞ｐ２１上调。??（Ａ）对照或Ｈｓｐ９〇ＰｓｉＲＮＡ转染后Ｃ２Ｃ１２成肌细胞的ＲＮＡ－ｓｅｑ分析热图。蓝色??表示成肌细胞中敲降Ｈｓｐ９０ｐ后下调的基因，而红色表示上调基因。以Ｌｏｇ２（ＦＰＫＭ??倍数变化）值显示。（Ｂ）对照、Ｈｓｐ９０ａ或Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ转染Ｃ２Ｃ１２成肌细胞??４８小时后ｑＰＣＲ分析ｐ２１表达。以Ａｃｔｉｎ作为内参基因分析基因相对表达，独立??实验重复３次，（＊＊：?ｐ＜０．０１）。（Ｃ）对照、Ｈｓｐ９０ａ或Ｈｓｐ９〇ｐｓｉＲＮＡ转染成肌??细胞后Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测ｐ２］表达水平。ｔｕｂｕｌｉｎ作为内参蛋白；（Ｄ?）对照或??Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ转染成肌细胞后用ｐ２１抗体进行免疫染色。蓝色为Ｈｏｅｃｈｓｔ染色，??红色为Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ染色，分别标记细胞核和肌动蛋白丝。比例尺：２０）＿ｉｍ。??负责ｐ２１转录的主要转录因子有Ｐ５３、Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４［１７］。为研究Ｈｓｐ９０ｐ??通过何种通路调控ｐ２１转录水平，在抑制Ｈｓｐ９〇ｐ表达的同时，分别敲降ｐ５３、??Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４，抑制?ｐ５３、Ｆｏｘ０１／３、Ｓｍａｄ２／３／４?表达上升，然后此时检测??
浙江大学博士学位论文?实验结果??图?３．１．３?Ｈｓｐ９０（３抑制?ｐ２１?需要?ｐ５３。??（Ａ）对照、Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ、Ｈｓｐ９０（３?ｓｉＲＮＡ?分别与?ｐ５３?或?ＦｏｘＯｌ／３?或?Ｓｍａｄ２／３／４??ｓｉＲＮＡ同时转染成肌细胞４８ｈ，免疫荧光染色，绿色标记为ｐ２１，蓝色为Ｈｏｅｃｈｓｔ??染色标记细胞核；（Ｂ）对照、Ｈｓｐ９０ｐ?ｓｉＲＮＡ、Ｈｓｐ９〇ｐ?ｓｉＲＮＡ与ｐ５３?ｓｉＲＮＡ同时??转染成肌细胞４８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ分析，ｔｕｂｕｌｉｎ作为内参蛋白。??根据以上结果我们提出假设，成肌细胞中Ｈｓｐ９０ｐ的下调可能导致ｐ５３的表达??增加。然而，之前有充分证据表明，在肿瘤中Ｈｓｐ９０的表达下调或活性抑制会加??速ｐ５３降解［１６］。通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ和免疫荧光染色的方法，检测成肌细胞中Ｈｓｐ９〇ｐ??对ｐ５３的表达影响。与我们的假设一致，敲降Ｈｓｐ９０ｐ特异地显著增加成肌细胞核??内ｐ５３的表达，而Ｈｓｐ９０ａ对ｐ５３表达没有明显影响（图３．１．４Ａ，?Ｂ）。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Senescence-like changes induced by expression of p21Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line[J]. XI CHEN1, WEI ZHANG2, YUN FEI GAO1, XIAO QIN SU1, ZHONG HE ZHAI1,*1 College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China2 The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of the Ministry of Education, College of Life Sciences,. Cell Research. 2002(Z1)
本文编号：3492931
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教材专著
