Streptococcus anginosus和Streptococcus constellatus在胃癌患者胃黏膜组织

发布时间：2021-11-14 22:24

　　目的此课题旨在基于探究胃黏膜和粪便微生态在胃癌中的变化,筛选并验证细菌可作为生物标记物,日后可能临床应用于胃癌诊断、早期胃癌筛查的一种非侵入性、精确、简便、灵敏、人群接受度高的检测方法。方法我们通过16S r RNA基因测序在队列1中的13名胃癌患者和7名慢性萎缩性胃炎患者的胃黏膜及粪便的配对标本中筛选出胃黏膜及粪便中发生协同变化的差异菌种,进一步通过实时定量PCR的方法分别在队列2中胃癌组和对照（胃炎）组检测菌种的相对丰度,验证测序结果,其中包含141份癌组织及癌旁正常组织标本、127份对照组内镜下胃黏膜活检标本、217份胃癌组术前粪便及124份对照组内镜检查前粪便标本。其中35名胃癌患者、64名胃炎患者同时提供其胃黏膜与粪便配对标本。通过与肿瘤标记物的联合检测,我们评估该差异细菌在胃癌的早期筛查、预警、诊断中的效力。结果通过16S r RNA基因测序筛选出Streptococcus anginosus和Streptococcus constellatus在胃癌组和对照组中胃黏膜、粪便中发生同步变化。q PCR进一步证实了上述测序结果。在胃黏膜及粪便中,胃癌组S.anginosus和... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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图2-1两大研究队列设计及标本纳入情况

AJCC2010年第7版TNM分期Fig.2-2AJCC20107thEditionTNMStaging

上海交通大学博士学位论文28图2-3各引物的熔解曲线（A:16srDNA；B:S.anginosus;C:S.constellatus;D:H.p）Fig.2-3Themeltingcurveofprimers(A:16srDNA；B:S.anginosus;C:S.constellatus;D:H.p)2、qPCR扩增采用TBGreenII10μl为扩增反应体系，所需试剂盒TBGreenPremixExTaqTMII（TliRNaseHPlus）由TAKARA公司提供。经反复试验和测试，粪便DNA模板量统一取40ng，黏膜DNA模板量统一取160ng。按测定的各DNA样本的浓度，通过计算所得的体积，根据每一对应引物重复取3次该体积的DNA样本，加入96孔板，随后离心混匀。qPCR仪使用StepOnePlusReal-TimePCR系统，参数设置及操作流程均按厂商要求进行。所有试剂的配置均在冰上进行，反应条件及体系配置要求（见表2-3）具体如下：反应条件：变性：95℃，30秒；退火：95℃，5秒；40个循环延伸：60℃，40秒将qPCR扩增结束后所得的每个DNA对应的每种引物的3个副孔的循环阈值（CycleThreshold，Ct）进行筛选，具体标准如下：（1）若3个数值的Ct值（最

【参考文献】：
期刊论文
[1]Probiotics in Helicobacter pylori eradication therapy: A systematic review and meta-analysis[J]. Min-Min Zhang,Wei Qian,Ying-Yi Qin,Jia He,Yu-Hao Zhou.  World Journal of Gastroenterology. 2015(14)
[2]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)



本文编号：3495463