miR-552-3p改善糖脂代谢失调性疾病作用发现及机制研究
发布时间：2021-11-16 23:18
糖脂代谢失调性疾病是指因体内糖脂代谢异常而造成全身脏器损伤及功能减退的一类疾病,其主要临床症状表现为高血糖、高血脂、肝脂蓄积以及胰岛素抵抗等。目前糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等糖脂代谢失调性疾病发病率不断上升,已成为人民健康的严重威胁。然而由于它们的发病机制至今尚不明确,造成这类疾病缺乏有效的治疗药物。microRNA作为体内众多生理过程的重要调控分子,在糖脂代谢失调性疾病发生发展中的作用逐渐被发现,为这类疾病发病机制研究和药物研发提供了新的可能。我们针对实验室前期研究发现的对CYP2E1表达具有双重调控机制的miR-552-3p进行深入序列分析发现其序列中具有与NR1家族核受体响应元件类似的碱基排列;同时基于NR1家族核受体对糖脂代谢的关键调控作用,提出本论文拟解决的科学问题—miR-552-3p与糖脂代谢的关系及其在糖脂代谢失调性疾病中的功能。miR-552-3p的生物学功能目前多集中在肿瘤领域,其对糖脂代谢的调节作用尚未有人涉及。基于此,我们通过体内和体外实验对miR-552-3p对糖脂代谢调节的功能及作用机制进行了深入和系统的研究。miR-552-3p调控代谢相关基因表达的功能发...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)上海市
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
miR-552-3p与NR1核受体响应元件（FXRE，LXRE，PPRE等）序列匹配示意图
miR-552-3p改善糖脂代谢失调性疾病作用发现及机制研究24HepG2细胞内分别转染1nMmiR-552-3pmimics与阴性对照mimics，培养72小时。之后弃去培养基，加入500μLPBS润洗一次，加入500μLRNAisoplus裂解细胞，用异丙醇沉淀法提取总RNA。将样品送给华大公司进行RNA-seq，对细胞内各基因mRNA含量进行测定。并且我们设定与对照组相比，表达差异倍数log2ratio>1，显著性差异Q-value0.001，基因表达丰度FPKM>10的基因为差异表达基因。如图2.2A所示，与转染阴性对照mimics（NC）的细胞相比，转染miR-552-3pmimics后，细胞内共有1529个基因的表达发生了明显改变，其中表达上调的基因有754个，表达下调的基因有775个。进一步我们利用京都基因与基因组百科全书（KEGG）对差异表达的基因进行分析与归类，找寻差异表达基因所参与的生物学过程。结果显示（图2.2B），富集程度最高的生物学通路是代谢通路，这表明受到miR-552-3p调控的基因主要参与体内代谢过程。图2.2miR-552-3p调控代谢相关基因的表达Figure2.2miR-552-3pregulatedmetabolism-relatedgeneexpression.（A）RNA-seq测序结果的热图分析数（log2ratio>2，Q-value0.001，FPKM>10）。向HepG2细胞转染miR-552-3pmimics以及阴性对照mimics，72小时后收集样品进行RNA-seq。（B）针对RNA-seq中差异表达基因进性KEGG分析。
miR-552-3p改善糖脂代谢失调性疾病作用发现及机制研究26图2.3差异表达基因的KEGG分析Figure2.3TheKEGGpathwayanalysisfordifferentialexpressiongenes（A）针对RNA-seq中表达下调基因进行KEGG分析。（B）针对RNA-seq中表达上调基因进行KEGG分析。为了进一步验证miR-552-3p对代谢相关基因的调控功能，我们采用RT-PCR技术对RNA-seq中表达下调的基因进行验证。如图2.4A所示，转染miR-552-3p
【参考文献】：
期刊论文
[1]PCSK9 inhibitors: A new era of lipid lowering therapy[J]. Rahul Chaudhary,Jalaj Garg,Neeraj Shah,Andrew Sumner. World Journal of Cardiology. 2017(02)
[2]Micro RNA-185 regulates expression of lipid metabolism genes and improves insulin sensitivity in mice with non-alcoholic fatty liver disease[J]. Xiao-Chen Wang,Xiao-Rong Zhan,Xin-Yu Li,Jun-Jie Yu,Xiao-Min Liu. World Journal of Gastroenterology. 2014(47)
[3]Obesity, fatty liver disease and intestinal microbiota[J]. Nur Arslan. World Journal of Gastroenterology. 2014(44)
本文编号：3499756
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)上海市
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
miR-552-3p与NR1核受体响应元件（FXRE，LXRE，PPRE等）序列匹配示意图
miR-552-3p改善糖脂代谢失调性疾病作用发现及机制研究24HepG2细胞内分别转染1nMmiR-552-3pmimics与阴性对照mimics，培养72小时。之后弃去培养基，加入500μLPBS润洗一次，加入500μLRNAisoplus裂解细胞，用异丙醇沉淀法提取总RNA。将样品送给华大公司进行RNA-seq，对细胞内各基因mRNA含量进行测定。并且我们设定与对照组相比，表达差异倍数log2ratio>1，显著性差异Q-value0.001，基因表达丰度FPKM>10的基因为差异表达基因。如图2.2A所示，与转染阴性对照mimics（NC）的细胞相比，转染miR-552-3pmimics后，细胞内共有1529个基因的表达发生了明显改变，其中表达上调的基因有754个，表达下调的基因有775个。进一步我们利用京都基因与基因组百科全书（KEGG）对差异表达的基因进行分析与归类，找寻差异表达基因所参与的生物学过程。结果显示（图2.2B），富集程度最高的生物学通路是代谢通路，这表明受到miR-552-3p调控的基因主要参与体内代谢过程。图2.2miR-552-3p调控代谢相关基因的表达Figure2.2miR-552-3pregulatedmetabolism-relatedgeneexpression.（A）RNA-seq测序结果的热图分析数（log2ratio>2，Q-value0.001，FPKM>10）。向HepG2细胞转染miR-552-3pmimics以及阴性对照mimics，72小时后收集样品进行RNA-seq。（B）针对RNA-seq中差异表达基因进性KEGG分析。
miR-552-3p改善糖脂代谢失调性疾病作用发现及机制研究26图2.3差异表达基因的KEGG分析Figure2.3TheKEGGpathwayanalysisfordifferentialexpressiongenes（A）针对RNA-seq中表达下调基因进行KEGG分析。（B）针对RNA-seq中表达上调基因进行KEGG分析。为了进一步验证miR-552-3p对代谢相关基因的调控功能，我们采用RT-PCR技术对RNA-seq中表达下调的基因进行验证。如图2.4A所示，转染miR-552-3p
【参考文献】：
期刊论文
[1]PCSK9 inhibitors: A new era of lipid lowering therapy[J]. Rahul Chaudhary,Jalaj Garg,Neeraj Shah,Andrew Sumner. World Journal of Cardiology. 2017(02)
[2]Micro RNA-185 regulates expression of lipid metabolism genes and improves insulin sensitivity in mice with non-alcoholic fatty liver disease[J]. Xiao-Chen Wang,Xiao-Rong Zhan,Xin-Yu Li,Jun-Jie Yu,Xiao-Min Liu. World Journal of Gastroenterology. 2014(47)
[3]Obesity, fatty liver disease and intestinal microbiota[J]. Nur Arslan. World Journal of Gastroenterology. 2014(44)
本文编号：3499756
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3499756.html
教材专著
