金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR调控巨噬细胞自噬促进hVISA免疫逃逸的分子机制研究

发布时间：2021-11-18 01:33

　　金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界中,可分泌多种毒力因子以及表面黏附蛋白,能引起菌血症、肺炎、心内膜炎、化脓性关节炎、中耳炎、深部脓肿等严重感染。金黄色葡萄球菌具有较强的存活能力和免疫逃逸能力,常导致慢性迁延性感染。其免疫逃逸机制,一方面与细菌本身的毒力因子,如毒素、酶和表面黏附因子等因素有关;另一方面可能通过与宿主细胞的相互作用,消减或抑制宿主免疫防御功能。近年来,随着万古霉素广泛应用于临床,异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌（hVISA）菌株不断出现。针对hVISA的研究显示,不但抗菌药物难以发挥作用,机体免疫系统也难以将其清除。hVISA在宿主体内免疫逃逸的分子机制尚不清楚,因此,深入探讨hVISA与宿主免疫系统之间的相互作用,将有助于我们理解金黄色葡萄球菌逃避宿主免疫反应并实现持续性感染的分子机制,为寻找新的治疗靶点提供理论依据。巨噬细胞是人体固有免疫系统重要的组成部分,具有强大的识别、吞噬、清除细菌及外来异物的功能。自噬是广泛存在于真核细胞中的一种机体生存,分化,发育,代谢所必须的自稳机制,作为天然免疫中重要的组成部分,同时也作为机体自我保护的生理学行为,在抵抗病原微生物感染以及其... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

pET28a-VraR表达产物Westernblotting鉴定M．预染标准蛋白分子量1：鼠源性抗His抗体对重组rVraR蛋白的识别

安徽医科大学博士学位论文33结果可以在25KDa附近检测到清晰而深染的条带，见图2，说明抗VraR多克隆抗体的特异性良好。图1.pET28a-VraR表达产物Westernblotting鉴定M．预染标准蛋白分子量1：鼠源性抗His抗体对重组rVraR蛋白的识别Fig1.IndentificationofrecombinatVraRproteinbyWesternblottingM:Prestainedproteinmolecularmarker1:DetectionofrecombinateVraRproteinwithHis.Tagmonoclonalantibody图2.抗-rVraR多克隆抗体的Westernblotting验证M：蛋白分子量标准1：1:20000倍稀释抗体2：1:10000倍稀释抗体Fig2.IndentificationofAnti-rVraRpolyclonalantibodybyWesternblotting

安徽医科大学博士学位论文34M:Proteinmolecularmarker1:Detectionof1:20000timesdilutedantibody2：Detectionof1:10000timesdilutedantibody4.1.2VraSR缺失株和回补株的鉴定：通过qRT-PCR对Mu3，Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株中vraSR基因的转录水平进行了确认，在Mu3ΔvraSR株中vraSR基因的转录完全缺失，Mu3ΔvraSR-C菌株回复了vraSR基因的转录，见图3。Westernblotting分析结果显示，Mu3ΔvraSR株不表达VraR蛋白，而Mu3ΔvraSR-C菌株部分回复了VraR蛋白的表达，见图4。以上结果均证实Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株敲除和回补成功。图3.qRT-PCR检测Mu3，Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株vraR转录水平Figure3.DetectionofvraSRtranscriptionlevelsinMu3,Mu3ΔvraSRandMu3ΔvraSR-CstrainsbyqRT-PCR图4.Westernblotting检测Mu3，Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株VraR蛋白表达水平Figure4.DetectionofVraRproteinlevelsinMu3,Mu3ΔvraSRandMu3ΔvraSR-CstrainsbyWesternblotting

【参考文献】：
期刊论文
[1]万古霉素耐药金黄色葡萄球菌致病性研究[J]. 张涛,马筱玲,戴媛媛,陈多炎,鲁怀伟.  中国人兽共患病杂志. 2005(11)



本文编号：3501956