巨噬细胞对多发性骨髓瘤细胞DNA损伤应答的影响及机制研究

发布时间：2021-12-12 05:43

　　研究背景:多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是终末分化阶段B细胞的一种血液系统恶性肿瘤,以恶性浆细胞克隆性增殖为特征。克隆性浆细胞分泌大量单克隆免疫球蛋白（monoclonal protein,M蛋白）,导致终末器官的损害引起临床症状。尽管当前治疗手段的发展对MM疗效有了很大的改善,但目前MM仍是不可治愈的血液系统恶性肿瘤,MM发生发展的机制尚待深入挖掘。浆细胞遭受感染、炎症的刺激后,会产生DNA损伤和基因组不稳定性,可以通过出现和积累遗传学事件,逐渐发展成为有临床症状的MM。随着疾病的进展,新的细胞遗传学事件不断出现,染色体易位、基因拷贝数变异和体细胞单核苷酸变异等事件的积累促进了 MM的克隆演变。遗传事件的出现与MM细胞（multiple myeloma cells,MMCs）的基因组不稳定性密切相关,DNA损伤后的修复异常是直接原因。DNA损伤中,最严重的是DNA双链断裂（double strand break,DSB）,主要由细胞通过同源重组（homologous recombination,HR）以及非同源末端连接（non-homologous end j... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：162 页

【学位级别】：博士

【图文】：

图１．２流式细胞术检测体外诱导的Ｍ＜Ｄｓ表面分子??Ａ．流式细胞术检测Ｍ＜Ｄｓ表面ＣＤ８０，?ＣＤ８６，?ＣＤ１６３和ＣＤ２０６的表达

ｙＨ２ＡＸ是ＤＮＡ损伤的标志性蛋白，为研究ＭＯｓ对ＭＭＣｓ基线ＤＮＡ损伤的??影响，本课题收取与ＭＯｓ共培养前后的ＡＲＰ－１，０ＰＭ２，ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ细胞，??提取蛋白做Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ测ＭＭＣｓ内ＹＨ２ＡＸ表达水平。结果表明（图１．４Ａ），??Ｍ＜Ｄｓ可明显降低ＡＲＰ－１，?０ＰＭ２，?ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ细胞基线的ＹＨ２ＡＸ水平。??为进一步探究在ＡＲＰ－１，?０ＰＭ２，?ＭＭ．１Ｓ和ＣＡＧ在遭受ＤＮＡ损伤的情况下，??Ｍ〇）ｓ对ＭＭＣｓＤＮＡ损伤的作用，我们用博来霉素（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ，?ＢＬＭ）诱导ＭＭＣｓ??ＤＮＡ损伤，再让ＭＭＣｓ与Ｍ＜Ｄｓ共培养２４ｈ，结果提示（图１．４Ｂ）Ｍ（Ｄｓ可显著降??低?ＡＲＰ－１

Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验检测ＭＭＣｓ中ＹＨ２ＡＸ的表达。我们观察到，不管是单独培养组??还是ＭＯｓ共培养组，在博来霉素造成ＭＭＣｓＤＮＡ损伤后，ＹＨ２ＡＸ都经历了由高??到低的过程（图１．５），代表对照组和实验组中，ＭＭＣｓ在面对ＤＮＡ损伤时都启??动了细胞ＤＤＲ，随着损伤的ＤＮＡ逐渐被修复，＂／Ｈ２ＡＸ表达量逐渐下降。结果显??示，Ｍ＜Ｄｓ?共培养组?ＡＲＰ－１?（图?１．５Ａ），０ＰＭ２?（图?１．５Ｂ），ＭＭ．１Ｓ?（图?１．５Ｃ）??和ＣＡＧ?（图１．５Ｄ）?ｙＨ２ＡＸ下降地更快。??为了更加直观及客观地阐述ＭＭＣｓＤＮＡ损伤后，ＹＨ２ＡＸ在对照组和实验组??中表达量的变化，本课题采用Ｘ光（Ｘ－ｒａｄｉａｔｉｏｎ，?Ｘ－Ｒａｙ）?５Ｇｙ剂量福照ＭＭ．ｌＳｌ??和ＣＡＧ细胞后，将细胞分为单独培养组和与Ｍ＜Ｄｓ共培养组。分别在ｌｈ，２ｈ，４ｈ，??８ｈ，２４ｈ和４８ｈ收取ＭＭＣｓ，同空白对照及辐照Ｏｈ?（阳性对照）一起行免疫荧光??检测（选择这两种细胞株的原因是这两株细胞可处于半贴壁状态，利于做细胞免??疫荧光）。我们采用高内涵细胞成像仪对免疫荧光片进行图像采集

【参考文献】：
期刊论文
[1]槲皮素对人急性B淋巴细胞白血病NOD/SCID小鼠细胞周期及黏附分子表达的影响[J]. 王黎,戴红卫,郑君,周娇,陈德森.  中国实验血液学杂志. 2018(06)
[2]PJ34对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞体外生长及其对马法兰敏感性的影响[J]. 熊婷,陈小琼,魏恒,肖晖.  现代肿瘤医学. 2014(03)



本文编号：3536110