复方龙星片对烟雾联合脂多糖诱导COPD大鼠的作用及机制研究

发布时间：2021-12-22 17:52

　　目的COPD是一种常见的、可以预防和治疗的疾病,其死亡率高,严重危害人类健康。复方龙星片为根据全国名老中医黄吉赓处方制备而来的曙光医院院内制剂,临床治疗COPD疗效显著,但其作用机制尚不明确。本研究对其机制进行了探讨。方法（1）将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、龙星片低、中、高剂量组、阳性沙丁胺醇和地塞米松组,烟熏4周后开始给药干预直至处死,烟熏12周后气管滴注脂多糖溶液,烟熏16周后全部处死,检测肺功能,取肺组织HE、Masson染色观察气道病理及形态,ELISA测血清炎症因子IL-8、TNF-α、LTB4水平,生化法测氧化应激相关蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG水平。（2）基于Illumina hiseq平台,对空白、模型、龙星片组大鼠肺组织在某个时期转录出来的所有m RNA进行测序,完成原始数据质控、转录组整体质量的评估后,分析表达量,对样本两两间比较,以FDR<0.05&|log2FC|≥1为标准,筛选显著差异表达基因,对其进行GO功能注释分类、富集分析、KEGG通路富集分析及剪切分析。（3）参考药效结果以“inflammatory response”... 

【文章来源】：上海中医药大学上海市

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
主要缩略词表
摘要
Abstract
引言
第一章 复方龙星片对COPD大鼠的药理作用
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验药物与试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 动物分组与处理
        2.2 动物造模
        2.3 肺功能检测
        2.4 收集血清及BALF
        2.5 肺组织病理切片与染色
        2.6 肺组织病理学观察及形态定量分析
        2.7 支气管形态学测量
        2.8 炎症因子IL-8、TNF-α、LTB4 水平的测定
        2.9 氧化应激水平蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG含量的测定
        2.10 统计分析
    3 结果
        3.1 状态观察
        3.2 肺功能指标
        3.3 气道病理变化观察
        3.4 肺组织病理学观察及分析结果
        3.5 支气管形态学测量结果
        3.6 炎症因子IL-8、TNF-α、LTB4 的测定结果
        3.7 氧化应激水平蛋白MDA、SOD、GSH/GSSG的测定结果
    4 讨论
第二章 复方龙星片防治COPD大鼠的转录组测序研究
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
    2 实验方法
        2.1 样本的选择
        2.2 测序实验流程
        2.3 信息分析流程
    3 结果
        3.1 原始测序数据说明
        3.2 原始测序数据质控
        3.3 测序数据质量剪切及统计
        3.4 与参考基因组比对
        3.5 转录组整体质量评估
        3.6 表达量分析
        3.7 样本间表达量评估
        3.8 表达差异分析
        3.9 差异基因表达模式聚类
        3.10 venn图
        3.11 差异基因GO分类统计及富集分析
        3.12 差异基因KEGG通路富集分析
        3.13 可变剪切分析
    4、讨论
第三章 复方龙星片防治COPD大鼠靶基因的预测及验证
    1 实验材料
        1.1 试剂及抗体
        1.2 主要仪器及耗材
    2 方法
        2.1 基因功能为主因素的筛选
        2.2 基因组间差异值为主因素的筛选
        2.3 Real-time PCR检测筛选基因m RNA的变化
        2.4 Western blot检测侯选靶基因蛋白的表达
    3 实验结果
        3.1 龙星片功能基因的主要参与过程及基因数量
        3.2 显著表达功能基因的文献检索结果
        3.3 功能为主因素预测靶基因的筛选结果
        3.4 表达差异为主因素预测靶基因的筛选结果
        3.5 筛选基因扩增结果
        3.6 筛选基因RT-PCR检测结果
        3.7 预测靶基因Western-blot检测结果
        3.8 龙星片防治COPD作用靶基因的分析及信号途径的预测
    4 讨论
第四章 以靶基因为导向的药效成分的筛选及定量
    1 材料
        1.1 仪器
        1.2 试药
    2 方法与结果
        2.1 复方龙星片处方药材所含化学成分的统计
        2.2 以靶基因为导向的药效成分的筛选
        2.3 复方龙星片药效成分的定量-指纹图谱研究
    3 结论
    4 讨论
创新点
全文小结
致谢
参考文献
附录一 文献综述 慢性阻塞性肺疾病发病机制研究概况
    参考文献
附录二 在读期间论文发表及专利申请情况
附录三 攻读博士学位期间成果


【参考文献】：
期刊论文
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[4]中药药效物质筛选与辨识的研究思路及进展[J]. 毕肖林,马世堂,狄留庆,陈志鹏,刘陶世.  中草药. 2018(22)
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博士论文
[1]载布洛芬防黏连膜的疗效和机制研究[D]. 陈华.苏州大学 2017
[2]基于比较基因组学和转录组学技术揭示单增李斯特菌毒力因子的研究[D]. 王旭.上海海洋大学 2016
[3]应用RNA-seq技术进行盆腔器官脱垂不同时期转录组研究[D]. 谢若云.福建医科大学 2015
[4]若干中药组分对香烟烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病炎症反应的作用及机制研究[D]. 李璐璐.复旦大学 2012

硕士论文
[1]甘蓝型油菜种子老化处理后发芽指数QTL定位及生理分析[D]. 侯林涛.西南大学 2017
[2]COPD肺气虚证大鼠肺组织结构变化及爱罗咳喘宁方干预研究[D]. 刘坦.河南中医药大学 2016



本文编号：3546824