甘草次酸修饰和pH敏感的姜黄素混合胶束构建与抗肝癌细胞研究

发布时间：2021-12-27 23:09

　　目的:原发性肝癌是一种严重威胁我国人民健康的恶性肿瘤。目前的治疗策略包括手术治疗、化学药物治疗、放射治疗、介入治疗。其中化学药物治疗对早中晚期肝癌均有一定的疗效,而且经常与其他治疗方法配合使用,是一种治疗肝癌的常用策略。然而化学药物原药由于存在非特异性药物递送、毒副作用等问题,临床使用效果不理想。因此,寻找一种安全有效的肝癌治疗药物是亟需解决的关键问题。根据古文献研究和现代药理研究结果,活血化瘀药姜黄中的姜黄素被认为是一种安全有效的广谱抗肿瘤药物,在体内外实验中姜黄素均表现良好的抗肿瘤药效,姜黄素抑制肿瘤细胞的药理作用包括抑制增殖、诱导凋亡、抑制转移和侵袭、逆转多药耐药性。此外,姜黄素具有保护肝细胞的作用,可以显著降低小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平,减轻小鼠急性肝细胞坏死的程度。然而姜黄素的临床应用受到其自身理化性质的限制,例如,水溶性差、生物利用度低、光稳定性差等。这些问题随着纳米技术的发展,得到了一定程度的改善,姜黄素载药胶束在提高抗肿瘤药效、利用EPR效应被动靶向至肿瘤组织等方面表现出一定的优势。但早期研制的胶束大多不具有功能性,所以在主动靶向、智能释放药物、载药量方面存在一...

【文章来源】： 中国中医科学院北京市

【文章页数】：143 页

【文章目录】：
全文摘要
Abstract
英文缩略词表
创新点
论文综述
    1 肝癌的流行病学概况及现有治疗策略
    2 活血化瘀药治疗肝癌的理念和姜黄素的抗肿瘤药理作用
        2.1 抑制增殖
        2.2 诱导凋亡
            2.2.1 上调Caspase
            2.2.2 调节Bcl-2家族基因表达水平
            2.2.3 上调P53蛋白表达
        2.3 抑制侵袭和转移
            2.3.1 抑制基质金属蛋白酶
            2.3.2 抑制血管生成
        2.4 逆转多药耐药性
            2.4.1 下调ABC跨膜转运蛋白表达水平
            2.4.2 上调DNA拓扑酶表达水平
    3 姜黄素临床应用面临的问题
        3.1 口服生物利用度低
        3.2 体内代谢迅速
        3.3 水溶性差
    4 抗肿瘤纳米制剂
        4.1 主动靶向胶束
            4.1.1 叶酸
            4.1.2 透明质酸
            4.1.3 甘草次酸
            4.1.4 转铁蛋白
            4.1.5 单克隆抗体
        4.2 环境响应胶束
            4.2.1 pH响应型
            4.2.2 还原响应型
            4.2.3 酶响应型
            4.2.4 温度响应胶束
            4.2.5 光响应胶束
            4.2.6 磁响应胶束
        4.3 多功能混合胶束
    5 设计思路
技术路线图
第一章 基于F68的衍生物合成和结构确认
    1 引言
    2 仪器与试剂
        2.1 试剂
        2.2 仪器
    3 实验方法
        3.1 FAP合成路径
        3.2 FBP合成路径
        3.3 FGA合成路径
        3.4 FAC合成路径
        3.5 FBC合成路径
        3.6 聚合物结构分析
            3.6.1 核磁共振氢谱
            3.6.2 傅里叶红外图谱
    4 结果
        4.1 核磁共振氢谱
        4.2 傅里叶红外图谱
    5 讨论
第二章 姜黄素油水分配系数测定和聚合物材料的HLB与包封率、载药量相关性研究
    1 引言
    2 仪器与试剂
        2.1 试剂
        2.2 仪器
    3 实验方法
        3.1 建立姜黄素含量测定方法
            3.1.1 供试品溶液制备方法
            3.1.2 色谱条件
            3.1.3 线性范围
            3.1.4 方法学研究和含量测定
        3.2 姜黄素油水分配系数测定
            3.2.1 水饱和正辛醇和正辛醇饱和水制备
            3.2.2 正辛醇中姜黄素饱和浓度测定
            3.2.3 水中姜黄素饱和浓度测定
        3.3 聚合物材料HLB计算
            3.3.1 建立表面活性剂亲水基团系数与HLB线性函数
            3.3.2 F68及其衍生物的HLB值计算
        3.4 聚合物HLB与包封率、载药量相关性研究
            3.4.1 制备不同材料的姜黄素载药胶束溶液
            3.4.2 检测各组胶束的包封率和载药量
    4 实验结果
        4.1 姜黄素含量测定方法
            4.1.1 色谱条件适用性
            4.1.2 线性范围
            4.1.3 精密度
            4.1.4 稳定性
            4.1.5 重复性
            4.1.6 加样回收率
        4.2 姜黄素油水分配系数计算
        4.3 聚合物HLB计算
        4.4 HLB与包封率、载药量的相关性
            4.4.1 不同聚合物材料制备胶束的载药量和包封率测定
            4.4.2 各组胶束的包封率和载药量与HLB的相关性
    5 讨论
第三章 FAP、FBP和MIX的姜黄素载药胶束制备工艺优化
    1 引言
    2 仪器与试剂
        2.1 试剂
        2.2 仪器
    3 实验方法
        3.1 考察FAP/姜黄素胶束制备方法
        3.2 考察制备FAP/姜黄素胶束的最佳溶剂
        3.3 考察制备FAP/姜黄素胶束的最佳投药量
        3.4 考察制备FAP/姜黄素胶束的最佳温度
        3.5 考察制备FAP/姜黄素胶束的最佳水相体积
        3.6 FAP/姜黄素胶束工艺条件验证
        3.7 考察最优工艺对FBP/姜黄素胶束制备的适用性
        3.8 考察制备MIX/姜黄素胶束的最佳材料比例
        3.9 MIX/姜黄素胶束工艺条件验证
    4 结果
        4.1 制备FAP/姜黄素胶束的最佳制剂方法
        4.2 制备FAP/姜黄素胶束的最佳有机溶剂
        4.3 制备FAP/姜黄素胶束的最佳投药量
        4.4 制备FAP/姜黄素胶束的最佳温度
        4.5 制备FAP/姜黄素胶束的最佳水相体积
        4.6 最佳工艺条件验证
        4.7 考察最优工艺对FBP/姜黄素胶束制备的适用性
        4.8 考察制备MIX/姜黄素胶束的最佳材料比例
        4.9 MIX/姜黄素胶束工艺条件验证
    5 讨论
第四章 疏水链段修饰后CMC下降和温度对胶束制备影响的热力学研究
    1 引言
    2 仪器与试剂
        2.1 试剂
        2.2 仪器
    3 实验方法
        3.1 疏水链段分子量对材料热力学函数的影响
            3.1.1 F68供试品溶液配制
            3.1.2 FAC供试品溶液配制
            3.1.3 FAP供试品溶液配制
            3.1.4 MIX供试品溶液配制
            3.1.5 不同材料量热曲线测定
        3.2 温度对混合胶束的热力学性质的影响
            3.2.1 MIX溶液配制
            3.2.2 不同温度对MIX胶束形成过程中的热力学函数影响
    4 实验结果
        4.1 疏水链段分子量对材料热力学函数的影响
        4.2 温度对混合胶束热力学函数的影响
    5 讨论
第五章 姜黄素载药胶束的制剂学评价
    1 引言
    2 仪器与试剂
        2.1 试剂
        2.2 仪器
    3 方法
        3.1 胶束外观形态评价
        3.2 稳定性
            3.2.1 储存稳定性
            3.2.2 在10% FBS的PBS中的稳定性
        3.3 pH敏感性
        3.4 CMC和丁达尔现象
            3.4.1 制备FAP、FBP、MIX和F68空白胶束溶液
            3.4.2 丁达尔现象观察
            3.4.3 CMC
        3.5 体外累积释放
            3.5.1 含量测定及其方法学研究
            3.5.2 体外累积释放实验供试品含量测定
        3.6 材料的溶血性实验
            3.6.1 MIX胶束溶液制备
            3.6.2 红细胞分离
            3.6.3 溶血实验
    4 结果
        4.1 MIX/姜黄素胶束的外观形态
        4.2 胶束的稳定性
        4.3 胶束的pH敏感性
        4.4 丁达尔现象和CMC
            4.4.1 丁达尔现象
            4.4.2 CMC
        4.5 体外累积释放率
            4.5.1 线性范围
            4.5.2 精密度
            4.5.3 稳定性
            4.5.4 重现性
            4.5.5 加样回收率
            4.5.6 体外释放实验供试品溶液检测
        4.6 溶血性实验
    5 讨论
第六章 MIX/姜黄素胶束细胞水平体外药效学评价
    1 引言
    2 仪器与试剂
        2.1 试剂
        2.2 仪器
    3 方法
        3.1 细胞培养
            3.1.1 细胞复苏
            3.1.2 细胞传代
        3.2 细胞活性实验
            3.2.1 MTT溶液配制
            3.2.2 MTT实验
        3.3 细胞凋亡实验
        3.4 不同胶束对细胞核形态的影响
            3.4.1 含4%多聚甲醛(w/v)的PBS配制
            3.4.2 Hoechst 33342溶液配制
            3.4.3 高内涵细胞成像系统观察细胞核形态变化
        3.5 不同胶束对细胞内ROS水平的影响
        3.6 尼罗红含量测定方法和载药胶束制备
            3.6.1 尼罗红载药胶束制备
            3.6.2 供试品溶液制备
            3.6.3 色谱条件
            3.6.4 方法学考察和含量测定
            3.6.5 配制尼罗红原药溶液
        3.7 肝癌细胞对不同胶束的摄取能力考察
            3.7.1 流式细胞仪检测不同胶束给药后细胞内红色荧光强度
            3.7.2 流式细胞仪检测MIX/NR给药不同时间细胞内红色荧光强度
            3.7.3 高内涵细胞成像仪比较不同胶束给药后细胞内红色荧光强度
            3.7.4 流式细胞仪检测MIX/NR给药不同时间细胞内红色荧光强度
    4 结果
        4.1 细胞活性实验
        4.2 细胞凋亡实验
        4.3 不同胶束对细胞核形态的影响
        4.4 不同胶束对胞内ROS水平的影响
        4.5 尼罗红含量测定方法和载药胶束制备
            4.5.1 色谱条件适用性
            4.5.2 线性范围
            4.5.3 精密度
            4.5.4 稳定性
            4.5.5 重复性
            4.5.6 加样回收率
            4.5.7 含量测定
        4.6 细胞摄取实验
    5 讨论
全文总结
    1 总结
    2 不足之处及展望
参考文献
致谢
个人简历
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]木香提取物中木香烃内酯和去氢木香内酯的平衡溶解度和油水分配系数的测定 [J]. 李慧敏,马具淼,王淑萍,石磊,张莉,张静泽.  药物评价研究. 2020(02)
[2]透明质酸修饰纳米胶束用于靶向肿瘤治疗及药物释放行为的研究进展 [J]. 孙晓峰,刘涛,凌芸,陈正炜,潘梓浩,徐子特,罗令.  中国药科大学学报. 2019(06)
[3]姜黄素纳米制剂在肿瘤治疗中的研究进展 [J]. 陈奋,杨月,张玲,贾连群,潘卫三.  中国现代应用药学. 2019(21)
[4]诺米林平衡溶解度和表观油水分配系数的测定 [J]. 郁林娜,程盛勇,付洋,鲁文琴,黄静,罗喜荣,杨军.  贵州医科大学学报. 2019(08)
[5]还原响应型透明质酸抗肿瘤胶束的构建及其体外性质研究 [J]. 李琦,刘丹丹,杨月,李云建,李金宇,潘卫三.  中南药学. 2019(07)
[6]姜黄素对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及相关机制 [J]. 崔琦,董延娥,霍云龙,刘勇.  解剖科学进展. 2019(04)
[7]马甲子总三萜中2种成分油水分配系数的测定 [J]. 任娟,孙兴,阮佳,谭镭,詹雁,徐超群.  中成药. 2019(05)
[8]pH敏感电荷反转型姜黄素纳米粒子的制备及体外评价 [J]. 郭庆发,虢英荣,曹慧,刘世武.  中草药. 2019(03)
[9]Liver cancer incidence and mortality in China: Temporal trends and projections to 2030 [J]. Rongshou Zheng,Chunfeng Qu,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Kexin Sun,Xiuying Gu,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Wenqiang Wei,Wanqing Chen,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(06)
[10]Bioavailable curcumin formulations:A review of pharmacokinetic studies in healthy volunteers [J]. Rohitash Jamwal.  Journal of Integrative Medicine. 2018(06)

博士论文
[1]肿瘤微环境调控的纳米载体用于药物递送的研究[D]. 刘晶.中国科学技术大学. 2019
[2]姜黄素载药胶束的制备及其抗肿瘤活性与逆转多药耐药的研究[D]. 朱雯婷.南方医科大学. 2018
[3]基于普朗尼克P123-聚（β-氨基酯）多功能纳米系统的研究[D]. 蔡晓青.山东大学. 2016

硕士论文
[1]pH敏感型姜黄素壳聚糖胶束制剂的研究[D]. 戴书畅.江苏大学. 2019
[2]姜黄素对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭和迁移的影响[D]. 孙丽静.华北理工大学. 2019
[3]肿瘤CD44受体靶向混合聚合物胶束的构建与评价[D]. 林静.佳木斯大学. 2018
[4]姜黄素联合生态动力素对CC14诱导的肝损伤的保护作用及机制[D]. 贾玉华.延边大学. 2018
[5]姜黄素对缺氧HepG2细胞诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究[D]. 杨传玉.福建医科大学. 2018
[6]优化姜黄素纳米脂质体的制备及其体内外特性研究[D]. 王雪婷.安徽医科大学. 2018
[7]二甲双胍和姜黄素合用抑制肝癌HepG2细胞侵袭转移作用及机制研究[D]. 张辉辉.山东大学. 2017
[8]氧化还原敏感型姜黄素聚合物胶束的制备及其性质研究[D]. 曹延武.天津大学. 2015
[9]环境响应性姜黄素纳米给药系统的制备及体外评价[D]. 张晓丽.浙江大学. 2014



本文编号：3552921