RBM8A介导上皮间质转化调控肝细胞癌对奥沙利铂耐药的分子机制研究
发布时间：2022-01-05 00:29
奥沙利铂（Oxaliplatin,OXA）耐药是肝癌治疗中的巨大障碍,上皮-间充质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）已被证实与奥沙利铂耐药密切相关。RNA结合基序蛋白8A（RNA binding motif protein 8a,RBM8A）是外显子连接复合物的核心组件,同时也是无义介导的m RNA衰变中所必需的蛋白之一,与RNA定位、转录、转运、翻译和降解等有关,同时还与细胞周期调控和细胞凋亡调控密切相关,现有研究证实RBM8A广泛参与肿瘤发展。我们前期研究发现:RBM8A在肝癌组织中高表达,与患者不良预后相关;RBM8A高表达可诱导体外细胞株的EMT,抑制肝细胞癌凋亡,促进其增殖、迁移和侵袭能力。但RBM8A能否通过所诱导的EMT参与奥沙利铂耐药尚不清楚。如果有两者有关系,其具体的分子机制如何?目前尚无相关研究报道。为进一步了解RBM8A在肝癌OXA耐药中发挥的作用,并阐明RBM8A在肝癌耐药网络中的分子机制,进而探索出逆转肝癌耐药的潜在药物靶点,本研究应用RBM8A低表达及过表达的肝细胞癌OXA耐药模型和裸鼠皮下耐药移植瘤模型,检测...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：166 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
过表达慢病毒载体Figure1-1Overexpressedlentivirusvector2)双酶切载体：把含有载体质粒的菌液培养过夜，并且取新鲜菌液
导上皮间质转化调控肝细胞癌对 奥沙利铂耐药的分子机制研究 2016 级博加入 2ug/ml 嘌呤霉素筛选，持续筛选 2 周；Day-21，收和蛋白印迹法检测 RBM8A的过表达情况。与包装 Human RBM8A-shRNA 慢病毒载体料、试剂及仪器-7404 细胞系及慢病毒载体 PHY-LV 均购自上海汉尹生PHY-LV-KD5.1慢病毒载体信息见图 2。
-3 采用逐步递增 OXA 浓度间歇作用体外诱导法建立 OXA 耐药体外肝细胞癌模型ure 1-3 The concentration-elevation and intermittent induction treatment with oxaliplatin selectstance-HCC cells.用于从亲本肝细胞癌株 (PCL)诱导获得 OXA 耐药肝细胞癌株 (DR)的详细方案示意图，OX步升高间歇诱导作用，每次剂量维持 15 天，6 个月后成功构建 OXA 耐药体外肝细胞癌株相差显微镜观察发现亲本株 BEL-7404、MHCC-97H 细胞呈上皮样细胞生长，表现为均一细胞株 BEL-7404/OXA、MHCC-97H/OXA 呈间质样表型，细胞变为长条形、梭形、多角则形态(Scale bar = 20 μm, 20× magnification) 。 构建 RBM8A 过表达和沉默的亲本/耐药肝细胞癌株模型，RBM8药肝细胞癌较亲本肝细胞癌中表达显著升高。含 有 RBM8A 干 扰 序 列 的 慢 病 毒 载 体 感 染 BEL-7404 、 B04/OXA，含有 RBM8A 序列的慢病毒载体感染 MHCC-97H、MHH/OXA，筛选后分别获得稳转细胞株：BEL-7404-RBM8A-KD、B
【参考文献】：
期刊论文
[1]奥沙利铂在消化系统肿瘤中的耐药机制研究[J]. 牟雪瑶,汤志明,柳丹,白磊,牛成群,李珊. 重庆医学. 2019(05)
[2]中国肝癌一级预防专家共识（2018）[J]. 陈万青,崔富强,樊春笋,李霓,曲春枫,舒为群,王宇婷,殷建华,邹怀宾. 中国肿瘤. 2018(09)
[3]microRNA与肝癌[J]. 张春艳,张富春,马纪,王莹,徐存拴. 基础医学与临床. 2016(10)
[4]肿瘤生物治疗进展[J]. 魏继武. 医学研究生学报. 2016(09)
[5]长链非编码RNA在肝癌中的研究进展[J]. 何运,陈攀,罗嘉,吴飞跃. 中国普通外科杂志. 2016(07)
[6]转化生长因子β信号通路在肝癌患者中的作用机制[J]. 郑涛,杨甲梅. 中华肝胆外科杂志. 2016 (06)
[7]lncRNA与miRNA相互作用对疾病的影响[J]. 易红,张政. 基础医学与临床. 2016(02)
[8]中国肝癌发病状况与趋势分析[J]. 左婷婷,郑荣寿,曾红梅,张思维,陈万青. 中华肿瘤杂志. 2015 (09)
[9]Advanced hepatocellular carcinoma and sorafenib: Diagnosis, indications, clinical and radiological follow-up[J]. Stefano Colagrande,Francesco Regini,Gian Giacomo Taliani,Cosimo Nardi,Andrea Lorenzo Inghilesi. World Journal of Hepatology. 2015(08)
本文编号：3569357
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：166 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
过表达慢病毒载体Figure1-1Overexpressedlentivirusvector2)双酶切载体：把含有载体质粒的菌液培养过夜，并且取新鲜菌液
导上皮间质转化调控肝细胞癌对 奥沙利铂耐药的分子机制研究 2016 级博加入 2ug/ml 嘌呤霉素筛选，持续筛选 2 周；Day-21，收和蛋白印迹法检测 RBM8A的过表达情况。与包装 Human RBM8A-shRNA 慢病毒载体料、试剂及仪器-7404 细胞系及慢病毒载体 PHY-LV 均购自上海汉尹生PHY-LV-KD5.1慢病毒载体信息见图 2。
-3 采用逐步递增 OXA 浓度间歇作用体外诱导法建立 OXA 耐药体外肝细胞癌模型ure 1-3 The concentration-elevation and intermittent induction treatment with oxaliplatin selectstance-HCC cells.用于从亲本肝细胞癌株 (PCL)诱导获得 OXA 耐药肝细胞癌株 (DR)的详细方案示意图，OX步升高间歇诱导作用，每次剂量维持 15 天，6 个月后成功构建 OXA 耐药体外肝细胞癌株相差显微镜观察发现亲本株 BEL-7404、MHCC-97H 细胞呈上皮样细胞生长，表现为均一细胞株 BEL-7404/OXA、MHCC-97H/OXA 呈间质样表型，细胞变为长条形、梭形、多角则形态(Scale bar = 20 μm, 20× magnification) 。 构建 RBM8A 过表达和沉默的亲本/耐药肝细胞癌株模型，RBM8药肝细胞癌较亲本肝细胞癌中表达显著升高。含 有 RBM8A 干 扰 序 列 的 慢 病 毒 载 体 感 染 BEL-7404 、 B04/OXA，含有 RBM8A 序列的慢病毒载体感染 MHCC-97H、MHH/OXA，筛选后分别获得稳转细胞株：BEL-7404-RBM8A-KD、B
【参考文献】：
期刊论文
[1]奥沙利铂在消化系统肿瘤中的耐药机制研究[J]. 牟雪瑶,汤志明,柳丹,白磊,牛成群,李珊. 重庆医学. 2019(05)
[2]中国肝癌一级预防专家共识（2018）[J]. 陈万青,崔富强,樊春笋,李霓,曲春枫,舒为群,王宇婷,殷建华,邹怀宾. 中国肿瘤. 2018(09)
[3]microRNA与肝癌[J]. 张春艳,张富春,马纪,王莹,徐存拴. 基础医学与临床. 2016(10)
[4]肿瘤生物治疗进展[J]. 魏继武. 医学研究生学报. 2016(09)
[5]长链非编码RNA在肝癌中的研究进展[J]. 何运,陈攀,罗嘉,吴飞跃. 中国普通外科杂志. 2016(07)
[6]转化生长因子β信号通路在肝癌患者中的作用机制[J]. 郑涛,杨甲梅. 中华肝胆外科杂志. 2016 (06)
[7]lncRNA与miRNA相互作用对疾病的影响[J]. 易红,张政. 基础医学与临床. 2016(02)
[8]中国肝癌发病状况与趋势分析[J]. 左婷婷,郑荣寿,曾红梅,张思维,陈万青. 中华肿瘤杂志. 2015 (09)
[9]Advanced hepatocellular carcinoma and sorafenib: Diagnosis, indications, clinical and radiological follow-up[J]. Stefano Colagrande,Francesco Regini,Gian Giacomo Taliani,Cosimo Nardi,Andrea Lorenzo Inghilesi. World Journal of Hepatology. 2015(08)
本文编号：3569357
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