胆固醇在BMSCs成骨分化中的双重作用及机制研究
发布时间：2022-01-08 00:50
第一部分 内源性胆固醇在BMSCs成骨分化中的作用及机制目的:研究内源性胆固醇在骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨分化中的作用;明确Hedgehog（Hh）信号通路在此过程中发挥的调控机制。方法:采用“体外细胞内胆固醇去除试验”去除BMSCs（包括ST2细胞和原代BMSCs）的内源性胆固醇:饥饿处理BMSCs 24小时,使用含1.5%环糊精的α-MEM完全培养基去除细胞内胆固醇,细胞孵育半小时,使用含40uM普伐他汀钠的α-MEM完全培养基阻断细胞内胆固醇的生物合成。使用“细胞内胆固醇荧光染色”法,分别在荧光显微镜放大4倍、10倍、20倍时检测ST2细胞内源性胆固醇的荧光量。同时,光学显微镜放大相同倍数观察去除内源性胆固醇前后ST2细胞的密度变化。向含有去除内源性胆固醇的ST2细胞和原代BMSCs的α-MEM完全培养基内加入5%Shh上清,以293T上清为对照。3天后使用ALP染色法检测ST2细胞和原代BMSCs的ALP染色阳性程度,使用实时定量聚合酶链反应（Quantitative real-time polyme...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１提取小鼠原代ＢＭＳＣｓ的方法??（２）使用台式离心机ｌＯＯＯＯｘ转速快速离心几秒，配平心机，关闭心，??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]植物甾醇降血脂作用的研究进展[J]. 薛延团,张晓凤,张得钧. 华西药学杂志. 2019(01)
[2]围绝经期女性预防骨质疏松症研究进展[J]. 赵丹,施丹,史晓. 辽宁中医药大学学报. 2019(02)
[3]胆固醇-25-羟化酶基因抗病毒功能研究进展[J]. 吕丽霞,赵贵民,王洪梅,侯佩莉,潘伟,何洪彬. 中国动物传染病学报. 2019(04)
[4]住院患者骨质疏松高危人群疾病因素与干预措施[J]. 颜晓东. 中国临床新医学. 2018(12)
[5]GDF15在肿瘤骨转移中的作用及机制的研究进展[J]. 段炼,庞海林,陈文娟,曹培培,张贺龙. 现代肿瘤医学. 2019(04)
[6]乳腺癌转移形成的分子机制及器官特异性[J]. 郭继雪,康欣梅,张清媛. 现代肿瘤医学. 2019(04)
[7]绝经后女性骨质疏松症与胰岛素样生长因子关系的临床研究[J]. 刘新娟,黎东梅,王静,张栋武. 中国计划生育和妇产科. 2018(12)
[8]血清前列腺干细胞抗原和前列腺特异性抗原联合检测在前列腺癌骨转移诊断中的意义[J]. 王深,沈亚勋,凌扬,欧阳骏. 广东医学. 2018(24)
[9]中老年人维生素D水平对骨质疏松的影响及相关性分析[J]. 滑丽美,薛苏娟,曹婧然,李绍建,雷敏,于建敏. 临床误诊误治. 2018(12)
[10]脊柱转移性肿瘤的研究进展[J]. 蒋炜骞,柯珍勇,汪洋,程思,敖剑. 中国肿瘤外科杂志. 2018(06)
博士论文
[1]HedgeHog信号通路和EMT相关LncRNAs在瘢痕疙瘩中的表达研究[D]. 黄和平.南昌大学 2018
[2]Sufu在皮肤创伤修复和皮肤纤维化中的作用及其机制研究[D]. 杨蓓蓓.浙江大学 2018
硕士论文
[1]Hedgehog信号通路配体Shh在肺鳞癌中发病的分子机制[D]. 熊欢婷.南昌大学 2018
[2]骨细胞Wnt/β-Catenin信号在BMSCs成骨分化中的作用研究[D]. 任磊.重庆医科大学 2018
本文编号：3575582
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：152 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１提取小鼠原代ＢＭＳＣｓ的方法??（２）使用台式离心机ｌＯＯＯＯｘ转速快速离心几秒，配平心机，关闭心，??
第－部分?胆固醇在ＢＭＳＣｓ成骨分化中的双重作用及机制研究??结?果??１．小鼠原代ＢＭＳＣｓ的形态??使用Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜观察小鼠原代ＢＭＳＣｓ的形态。细胞培养５天后，放大１０??倍视野时可见：ＢＭＳＣｓ形态为不规则的多角形，呈集落式生长（图２Ａ）；培养７－１０??天、放大２０倍时可见：ＢＭＳＣｓ増殖加速，各集落融合加快（图２Ｂ）。??ｍｍ??２〇ｘ??图２小鼠原代ＢＭＳＣｓ在放大１０倍（Ａ）和２０倍（Ｂ）视野时的形态。??２．明确ＳＴ２细胞中内源性胆固醇的去除情况及其去除效率??２．１明确ＳＴ２细胞中内源性胆固醇的去除情况??使用环糊精和普伐他汀去除ＳＴ２细胞的内源性胆固醇，检测胆固醇是否被去除。??使用含Ｆｉｌｉｐｉｎ?ＩＩ丨液的荧光染色试剂盒对ＳＴ２细胞进行染色。荧光显微镜分析显示：??在放大４倍、１０倍和２０倍时，内源性胆固醇去除组ＳＴ２细胞的荧光强度均明显弱于??对照组（图３）。实验证实：内源性胆固醇确实己被去除。??２６??
胆固醇在ＢＭＳＣｓ成骨分化中的双重作用及机制研究?第？部分??Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ?ｄｅｐｌｅｔｅｄ?（－）??■■■??？?１０Ｘ?２０Ｘ??Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ?ｄｅｐｉｃｔｅｄ?（■？■）??■■■??图３证实ＳＴ２细胞中的内源性肌固醇已被去除。Ａ－Ｆ．己被荧光化合物Ｆｉｌｉｐｉｎ?ＩＩ丨液??进行染色的ＳＴ２细胞在放大４倍（Ａ，?Ｄ）、１０倍（Ｂ，?Ｅ）和２０倍（Ｃ，?Ｆ）时，对??照组（Ａ－Ｃ）和内源性胆固醇去除组（Ｄ－Ｆ）的荧光强度变化比较。??２．２明确ＳＴ２细胞中内源性ＨＵＮ醇的去除效率??使用荧光定量法明确内源性Ｍ固醇的去除效率。选取１０倍视野下对照组和内源??性胆固醇去除组的代表性荧光（图４Ａ，Ｂ），采用Ｉｍａｇｅ?Ｊ软件获得总细胞的荧光量，??进－步对背景荧光进行标准化。结果显示：内源性胆固醇去除组中相对总细胞的荧光??量显著Ｆ降，ＳＴ２细胞中内源性丨ｊｌｌ固醇的去除率为７２％?（图４Ｃ），与对照纟丨Ｕ１丨比，??差异具打统丨１？学意义（ｐ＜〇．（）５）。??Ｄｅｐｌｅｔｅｄ?？?＋??■?（１２０??Ｉ．??Ｄｅｐｌｅｔｅｄ?？??图４明确ＳＴ２细胞中内源性胆固醇的去除率。１０倍视野下对照组（Ａ）和内源性职??固醇去除组（Ｂ）代表性荧光图；Ｃ．内源性肌固醇的上？除宇．。＊＾＜０．０５，?ｎ＝３。??２７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物甾醇降血脂作用的研究进展[J]. 薛延团,张晓凤,张得钧. 华西药学杂志. 2019(01)
[2]围绝经期女性预防骨质疏松症研究进展[J]. 赵丹,施丹,史晓. 辽宁中医药大学学报. 2019(02)
[3]胆固醇-25-羟化酶基因抗病毒功能研究进展[J]. 吕丽霞,赵贵民,王洪梅,侯佩莉,潘伟,何洪彬. 中国动物传染病学报. 2019(04)
[4]住院患者骨质疏松高危人群疾病因素与干预措施[J]. 颜晓东. 中国临床新医学. 2018(12)
[5]GDF15在肿瘤骨转移中的作用及机制的研究进展[J]. 段炼,庞海林,陈文娟,曹培培,张贺龙. 现代肿瘤医学. 2019(04)
[6]乳腺癌转移形成的分子机制及器官特异性[J]. 郭继雪,康欣梅,张清媛. 现代肿瘤医学. 2019(04)
[7]绝经后女性骨质疏松症与胰岛素样生长因子关系的临床研究[J]. 刘新娟,黎东梅,王静,张栋武. 中国计划生育和妇产科. 2018(12)
[8]血清前列腺干细胞抗原和前列腺特异性抗原联合检测在前列腺癌骨转移诊断中的意义[J]. 王深,沈亚勋,凌扬,欧阳骏. 广东医学. 2018(24)
[9]中老年人维生素D水平对骨质疏松的影响及相关性分析[J]. 滑丽美,薛苏娟,曹婧然,李绍建,雷敏,于建敏. 临床误诊误治. 2018(12)
[10]脊柱转移性肿瘤的研究进展[J]. 蒋炜骞,柯珍勇,汪洋,程思,敖剑. 中国肿瘤外科杂志. 2018(06)
博士论文
[1]HedgeHog信号通路和EMT相关LncRNAs在瘢痕疙瘩中的表达研究[D]. 黄和平.南昌大学 2018
[2]Sufu在皮肤创伤修复和皮肤纤维化中的作用及其机制研究[D]. 杨蓓蓓.浙江大学 2018
硕士论文
[1]Hedgehog信号通路配体Shh在肺鳞癌中发病的分子机制[D]. 熊欢婷.南昌大学 2018
[2]骨细胞Wnt/β-Catenin信号在BMSCs成骨分化中的作用研究[D]. 任磊.重庆医科大学 2018
本文编号：3575582
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