β 2 -肾上腺素受体色谱固定相制备新方法及三子养亲汤靶向活性成分筛选
发布时间：2022-01-08 06:21
呼吸系统疾病是重大慢性非传染性疾病,具有发病率高、药物依赖性大和反复发作等特点,迫切需要新技术和新方法,研发高效创新药物,以实现该类疾病的有效防治。中药作为呼吸系统疾病的主要防治手段,其活性成分筛选一直是中药创新药物研发的卡脖子瓶颈问题,已发展成为医药卫生领域正在新兴的难点和热点问题之一。本论文以三子养亲汤为例,针对其抗哮喘活性成分不明确和靶点不清晰等问题,重点开展活性成分固定化肾上腺素受体色谱筛选新方法的创建和应用研究。该研究有望实现三子养亲汤抗哮喘活性成分快速解析、解决药物活性成分筛选周期长和准确率低的瓶颈问题,能为其他中药活性成分筛选提供方法借鉴,对高效中药创新药物研发具有积极作用。全文共分四章,作者的主要贡献如下:1、建立了一步化β2-AR色谱固定相制备新方法。以β2-肾上腺素受体（β2-Adrenoceptor,β2-AR）为例,将O6-烷基鸟嘌呤DNA甲基转移酶融合至受体非活性碳末端,大肠杆菌表达获得融合受体,利用细胞裂解液中重组受体所含酶与苄基鸟嘌呤衍生物修饰微球...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
β2-AR的3D结构图
Tanon Fine-Do X6 化学发光成像系统采集图像。2.3.4 苄基鸟嘌呤衍生物的合成及结构分析参照文献制备方法[135,136]，以 2-氨基-6 氯嘌呤为合成反应底物，如图 2.1 所示合成路线制备获得苄基鸟嘌呤衍生物。除特有情况注释说明外，文中合成用所有试剂均为分析纯。合成产物采用硅胶柱色谱进行分离纯化，薄层层析法进行初步分析鉴定，所用硅胶（020131030，200-300 目，比表面积 300-400 m2/g）及硅胶薄层板（SGF 254，0.2±0.03mm, 10-40 μm）均来自烟台江友硅胶开发公司。核磁共振波谱和质谱测定结果分别通过美国瓦里安公司的 Bruker Avance 300 和美国安捷伦公司的 6520 型 Q-tof 质谱进行测定。西北大学博士学位论文
液（约 80 mmol, 4.0 eq），期间有大量白色固体析出，搅拌 10 分钟。静置一段时间后，抽滤，滤饼用适量水洗涤，干燥滤饼，得灰白色固体。将此固体加入到约 100 mL 的甲基叔丁基醚溶液中，搅拌或者超声均匀，抽滤，所得滤饼再放置于 50 mL 的甲基叔丁基醚中，搅拌或者超声均匀，抽滤，用适量甲基叔丁基醚洗涤滤饼，滤饼干燥后即得灰白色固体产物，即化合物 1。化合物 2 的合成：将化合物 1（3.2 g, 10.0 mmol, 1.0 eq）加入到无水 DMF（100 mL）中，冷却至 0 ℃，搅拌至溶解，分批加入 NaH（1.4 g, 60%/W, 36.0 mmol, 3.6 eq. ），氮气保护下0 ℃搅拌反应1小时。将对甲氧基苯甲基溴(PMB-Br，7.2 g, 36.0 mmol, 3.6 eq)的无水 DMF (20 mL)溶液慢慢滴加至上述溶液中，然后升至 25℃搅拌过夜。在搅拌下将反应液加入至 500 mL 冰水中，混匀后加入 300 mL 的乙酸乙酯。分出有机相，用食盐水洗涤（3 100 mL），无水 Na2SO4干燥，旋干，过柱（TLC：EA orDCM/MeOH=15/1）得白色固体产物 2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄酸抑制气道平滑肌收缩机制研究[J]. 张雯婧,于孟飞,刘贝贝,刘庆华. 江汉大学学报(自然科学版). 2019(02)
[2]罗氟司特和齐留通对哮喘大鼠气道平滑肌收缩功能的影响[J]. 郑绪阳,宋顺德,洪燕云,梅思斌,张兴,黄浩杰,宋斌,魏臻元,景易彪,汤慧芳. 中国现代应用药学. 2019(03)
[3]三子养亲汤加味治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的系统评价[J]. 郑文江,彭紫荆,陈淑婉,洪榆,黄慧婷,廖慧丽,刘小虹. 中国中药杂志. 2019(10)
[4]细胞膜色谱研究进展及其在中药活性成分筛选中的应用[J]. 王晓宇,陈啸飞,顾妍秋,曹岩,原永芳,洪战英,柴逸峰. 分析化学. 2018(11)
[5]受体色谱:中药靶向活性成分高效筛选技术[J]. 刘嘉君,贾晓妮,王静,曾凯竹,李倩,赵新锋. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(08)
[6]细胞膜色谱技术应用于中药活性成分筛选的研究进展[J]. 徐硕,姜文清,邝咏梅,徐文峰,金鹏飞. 西北药学杂志. 2018(02)
[7]羚贝止咳糖浆对豚鼠离体气管螺旋条平滑肌收缩的抑制作用[J]. 李秀丽,刘同彦,李苹,张翠艳,陈志国,徐殿达,王雅萌,王玉莹,杨静娴. 现代药物与临床. 2018(02)
[8]苏子降气汤结合三子养亲汤治疗痰浊型慢性阻塞性肺疾病疗效观察[J]. 周日文,黄桂琼. 四川中医. 2017(12)
[9]细胞膜色谱法在中药应用中的研究进展[J]. 吴斌,原永芳. 医学综述. 2017(18)
[10]阿司匹林对在体及离体气管平滑肌的影响[J]. 吴树君. 海峡药学. 2017(09)
博士论文
[1]“三子养亲汤”通过抑制CysLTs介导的炎症通路改善哮喘症状的机制研究[D]. 曹栀.成都中医药大学 2015
本文编号：3576049
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
β2-AR的3D结构图
Tanon Fine-Do X6 化学发光成像系统采集图像。2.3.4 苄基鸟嘌呤衍生物的合成及结构分析参照文献制备方法[135,136]，以 2-氨基-6 氯嘌呤为合成反应底物，如图 2.1 所示合成路线制备获得苄基鸟嘌呤衍生物。除特有情况注释说明外，文中合成用所有试剂均为分析纯。合成产物采用硅胶柱色谱进行分离纯化，薄层层析法进行初步分析鉴定，所用硅胶（020131030，200-300 目，比表面积 300-400 m2/g）及硅胶薄层板（SGF 254，0.2±0.03mm, 10-40 μm）均来自烟台江友硅胶开发公司。核磁共振波谱和质谱测定结果分别通过美国瓦里安公司的 Bruker Avance 300 和美国安捷伦公司的 6520 型 Q-tof 质谱进行测定。西北大学博士学位论文
液（约 80 mmol, 4.0 eq），期间有大量白色固体析出，搅拌 10 分钟。静置一段时间后，抽滤，滤饼用适量水洗涤，干燥滤饼，得灰白色固体。将此固体加入到约 100 mL 的甲基叔丁基醚溶液中，搅拌或者超声均匀，抽滤，所得滤饼再放置于 50 mL 的甲基叔丁基醚中，搅拌或者超声均匀，抽滤，用适量甲基叔丁基醚洗涤滤饼，滤饼干燥后即得灰白色固体产物，即化合物 1。化合物 2 的合成：将化合物 1（3.2 g, 10.0 mmol, 1.0 eq）加入到无水 DMF（100 mL）中，冷却至 0 ℃，搅拌至溶解，分批加入 NaH（1.4 g, 60%/W, 36.0 mmol, 3.6 eq. ），氮气保护下0 ℃搅拌反应1小时。将对甲氧基苯甲基溴(PMB-Br，7.2 g, 36.0 mmol, 3.6 eq)的无水 DMF (20 mL)溶液慢慢滴加至上述溶液中，然后升至 25℃搅拌过夜。在搅拌下将反应液加入至 500 mL 冰水中，混匀后加入 300 mL 的乙酸乙酯。分出有机相，用食盐水洗涤（3 100 mL），无水 Na2SO4干燥，旋干，过柱（TLC：EA orDCM/MeOH=15/1）得白色固体产物 2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄酸抑制气道平滑肌收缩机制研究[J]. 张雯婧,于孟飞,刘贝贝,刘庆华. 江汉大学学报(自然科学版). 2019(02)
[2]罗氟司特和齐留通对哮喘大鼠气道平滑肌收缩功能的影响[J]. 郑绪阳,宋顺德,洪燕云,梅思斌,张兴,黄浩杰,宋斌,魏臻元,景易彪,汤慧芳. 中国现代应用药学. 2019(03)
[3]三子养亲汤加味治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的系统评价[J]. 郑文江,彭紫荆,陈淑婉,洪榆,黄慧婷,廖慧丽,刘小虹. 中国中药杂志. 2019(10)
[4]细胞膜色谱研究进展及其在中药活性成分筛选中的应用[J]. 王晓宇,陈啸飞,顾妍秋,曹岩,原永芳,洪战英,柴逸峰. 分析化学. 2018(11)
[5]受体色谱:中药靶向活性成分高效筛选技术[J]. 刘嘉君,贾晓妮,王静,曾凯竹,李倩,赵新锋. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(08)
[6]细胞膜色谱技术应用于中药活性成分筛选的研究进展[J]. 徐硕,姜文清,邝咏梅,徐文峰,金鹏飞. 西北药学杂志. 2018(02)
[7]羚贝止咳糖浆对豚鼠离体气管螺旋条平滑肌收缩的抑制作用[J]. 李秀丽,刘同彦,李苹,张翠艳,陈志国,徐殿达,王雅萌,王玉莹,杨静娴. 现代药物与临床. 2018(02)
[8]苏子降气汤结合三子养亲汤治疗痰浊型慢性阻塞性肺疾病疗效观察[J]. 周日文,黄桂琼. 四川中医. 2017(12)
[9]细胞膜色谱法在中药应用中的研究进展[J]. 吴斌,原永芳. 医学综述. 2017(18)
[10]阿司匹林对在体及离体气管平滑肌的影响[J]. 吴树君. 海峡药学. 2017(09)
博士论文
[1]“三子养亲汤”通过抑制CysLTs介导的炎症通路改善哮喘症状的机制研究[D]. 曹栀.成都中医药大学 2015
本文编号：3576049
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