IGF2通过下调AQP9调控肝癌干细胞特性的作用和机制研究
发布时间：2022-01-11 10:16
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球最常见的恶性肿瘤之一,约占所有原发性肝癌的90%,在男性和女性恶性肿瘤最常见致死病因中分别位于第二和第六位。我国是全球HCC发生率和死亡率最高的国家,其高度的异质性是其较其他实体肿瘤更容易发生转移、复发及耐药的主要原因。肝癌干细胞（Liver cancer stem cells,LCSCs）是存在于肝癌组织中一亚群具有启动和维持肿瘤生长能力的细胞,其具有正常干细胞特性。由于LCSCs侵袭性行为特性及其与预后的关联性,其在HCC发生发展中起到了关键作用。水通道蛋白9（Aquaporin-9,AQP9）是位于细胞膜上转运水分子跨膜运动的一种固有蛋白,据报道它还可以转运过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2）。本课题组前期实验发现AQP9的表达通过抑制上皮间质转化（Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）从而对肝癌侵袭和转移发挥负性调控作用。另外,有研究发现胰岛素样生长因子2（Insulin-like growth f...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：89 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
AQP9在干细胞球中表达明显下调
重庆医科大学博士研究生学位论文35图1-2.AQP9在CD133+肝癌干细胞中表达明显下调。Fig.1-2AQP9expressionisdownregulatedinCD133+LCSCs.AResultsfromtheflowcytometryanalysisforthepositivityrateofCD133inCD133-andCD133+cellssortedfromHuh7cellsusingsterileflowcytometry.BSpheroidformationofCD133+andCD133-cellsisolatedfromHuh7HCCcells.Scalebars,100μm.CCD133+/-cellsweresubcutaneouslyinjectedinto6-week-oldathymicBALB/Cnudemice,andtumorigenicitywasevaluatedatweekfive.DLevelsofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inCD133+andCD133-cellsweredetectedbyWesternblotting.Allexperimentswereperformedintriplicate(n=3).*P<0.05,**P<0.01,and***P<0.0012.3AQP9过表达抑制肝癌干细胞干性基因表达为了深入探讨AQP9对LCSCs的调控作用，将过表达AQP9(LV-AQP9)或阴性对照(LV-CON)的慢病毒载体分别转染MHCC97H、Huh7和CD133+Huh7细胞。AQP9过表达组中LCSCs相关干性基因CD133、CD90、CD44、Epcam、Oct4、Nanog和Bmi-1的mRNA表达水平显著低于对照组(图2-1.A)。另外，在Huh7-CD133+细胞中，AQP9的过表达使CD133、CD90、CD44、Oct4、Nanog和Bmi-1的mRNA表达明显下降(图2-1.B)。在MHCC97H和Huh7细胞中，AQP9的过表达抑制CD133、Oct4、Nanog和Bmi-1的蛋白表达水平(图2-1.C)。另外，在Huh7-CD133+LCSCs中，过表达AQP9对上述LCSCs干性基因蛋白的表达也表现出同样的抑制趋势(图2-1.D)。
重庆医科大学博士研究生学位论文36图2-1.AQP9过表达抑制肝癌干细胞干性基因的表达。Fig.2-1AQP9overexpressionsuppressesexpressionofLCSCsgenes.ARelativemRNAexpressionoftheLCSCs-relatedmarkersCD133,CD90,CD44,Epcam,Nanog,Oct4,andBmi-1inHuh7cellsstablyoverexpressingAQP9(LV-AQP9)orcontrol(LV-CON).β-Actinwasusedasaninternalcontrol.BRelativemRNAexpressionoftheLCSCs-relatedmarkersCD133,CD90,CD44,Nanog,Oct4,andBmi-1inHuh7-CD133+cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrol.CExpressionofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inMHCC97HandHuh7cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrolwereanalysedbyWesternblotting.DProteinexpressionofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inHuh7-CD133+cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrol.**P<0.012.4AQP9过表达抑制肝癌细胞成球能力肿瘤细胞自我更新能力是指单个肿瘤细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力，一般用肿瘤细胞成球能力来表示。本实验在低黏附培养板中加入无血清、添加生长因子的培养基，在MHCC97H和Huh7细胞系中均发现：过表达AQP9后，肿瘤细胞成球数量明显降低，提示AQP9可抑制肿瘤细胞自我更新能力(图2-2)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Fusion of bone marrow-derived cells with cancer cells: metastasis as a secondary disease in cancer[J]. John M.Pawelek. Chinese Journal of Cancer. 2014(03)
本文编号：3582609
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：89 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
AQP9在干细胞球中表达明显下调
重庆医科大学博士研究生学位论文35图1-2.AQP9在CD133+肝癌干细胞中表达明显下调。Fig.1-2AQP9expressionisdownregulatedinCD133+LCSCs.AResultsfromtheflowcytometryanalysisforthepositivityrateofCD133inCD133-andCD133+cellssortedfromHuh7cellsusingsterileflowcytometry.BSpheroidformationofCD133+andCD133-cellsisolatedfromHuh7HCCcells.Scalebars,100μm.CCD133+/-cellsweresubcutaneouslyinjectedinto6-week-oldathymicBALB/Cnudemice,andtumorigenicitywasevaluatedatweekfive.DLevelsofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inCD133+andCD133-cellsweredetectedbyWesternblotting.Allexperimentswereperformedintriplicate(n=3).*P<0.05,**P<0.01,and***P<0.0012.3AQP9过表达抑制肝癌干细胞干性基因表达为了深入探讨AQP9对LCSCs的调控作用，将过表达AQP9(LV-AQP9)或阴性对照(LV-CON)的慢病毒载体分别转染MHCC97H、Huh7和CD133+Huh7细胞。AQP9过表达组中LCSCs相关干性基因CD133、CD90、CD44、Epcam、Oct4、Nanog和Bmi-1的mRNA表达水平显著低于对照组(图2-1.A)。另外，在Huh7-CD133+细胞中，AQP9的过表达使CD133、CD90、CD44、Oct4、Nanog和Bmi-1的mRNA表达明显下降(图2-1.B)。在MHCC97H和Huh7细胞中，AQP9的过表达抑制CD133、Oct4、Nanog和Bmi-1的蛋白表达水平(图2-1.C)。另外，在Huh7-CD133+LCSCs中，过表达AQP9对上述LCSCs干性基因蛋白的表达也表现出同样的抑制趋势(图2-1.D)。
重庆医科大学博士研究生学位论文36图2-1.AQP9过表达抑制肝癌干细胞干性基因的表达。Fig.2-1AQP9overexpressionsuppressesexpressionofLCSCsgenes.ARelativemRNAexpressionoftheLCSCs-relatedmarkersCD133,CD90,CD44,Epcam,Nanog,Oct4,andBmi-1inHuh7cellsstablyoverexpressingAQP9(LV-AQP9)orcontrol(LV-CON).β-Actinwasusedasaninternalcontrol.BRelativemRNAexpressionoftheLCSCs-relatedmarkersCD133,CD90,CD44,Nanog,Oct4,andBmi-1inHuh7-CD133+cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrol.CExpressionofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inMHCC97HandHuh7cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrolwereanalysedbyWesternblotting.DProteinexpressionofCD133,Nanog,Oct4,Bmi-1andAQP9inHuh7-CD133+cellsstablyoverexpressingAQP9orthecontrol.**P<0.012.4AQP9过表达抑制肝癌细胞成球能力肿瘤细胞自我更新能力是指单个肿瘤细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力，一般用肿瘤细胞成球能力来表示。本实验在低黏附培养板中加入无血清、添加生长因子的培养基，在MHCC97H和Huh7细胞系中均发现：过表达AQP9后，肿瘤细胞成球数量明显降低，提示AQP9可抑制肿瘤细胞自我更新能力(图2-2)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Fusion of bone marrow-derived cells with cancer cells: metastasis as a secondary disease in cancer[J]. John M.Pawelek. Chinese Journal of Cancer. 2014(03)
本文编号：3582609
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