miR-362-5p通过RIG1调控PI3K/AKT通路影响肝癌细胞侵袭转移的机制研究
发布时间：2022-01-11 20:38
【目的】通过研究维甲酸诱导基因1（RIG1）与肝癌发生发展的关系,并分析miR-362-5p和RIG1之间的结合关系,研究miR-362-5p结合RIG1后,调控PI3K/AKT信号通路,调节微环境的细胞免疫反应,对肝癌细胞侵袭转移的影响。【方法】（1）免疫组织化学方法检测RIG1在肝癌组织和癌旁组织中的表达,分析其与肝癌的临床病理特征的关系;（2）通过生物信息学方法预测能与RIG1基因相互作用的miRNA分子—miR-362-5p;（3）在肝癌组织和癌旁组织中分别用q RT-PCR检测miR-362-5p的表达以及western blot检测RIG1的表达,分析miR-362-5p和RIG1之间的关系;（4）在不同转移潜能的肝癌细胞株中用q RT-PCR技术检测miR-362-5p以及western blot方法检测RIG1、PI3K/AKT相关蛋白的表达,分析肝癌细胞株中miR-362-5p表达与RIG1、PI3K/AKT相关蛋白表达之间的关系;（5）采用双荧光素酶方法证实RIG1是miR-362-5p下游调控的靶基因;（6）研究miR-362-5p结合RIG1后,对PI3K/AK...
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RIG1在肝癌与癌旁组织中的表达A,癌旁组织HE染色；B,肝癌HE染色；
暨南大学博士学位论文miR-362-5p通过RIG1调控PI3K/AKT通路影响肝癌细胞侵袭转移的机制研究-20-图2miR-362-5p与RIG1在肝癌及癌旁组织中的表达A,miR-362-5p相对表达水平；B,RIG1表达水平；C,RIG1相对灰度值。*P＜0.01，**P＜0.01肝癌与癌旁组织比较。
暨南大学博士学位论文miR-362-5p通过RIG1调控PI3K/AKT通路影响肝癌细胞侵袭转移的机制研究-29-图3肝癌细胞中miR-362-5p、RIG1、PI3K、Akt表达关系A,miR-362-5p相对表达水平；B,RIG1、PI3K、Akt检测结果；C,RIG1、PI3K、Akt相对灰度值。*P＜0.01；**P＜0.01,MHCC97-H与MHCC97-L比较。3.2证实RIG1是miR-362-5p下游的靶基因通过miRanda在线软件（http://www.microrna.org/microrna/）预测miR-362-5p和RIG1（DDX58）的结合位点，结果发现miR-362-5p与RIG1（DDX58）3"-UTR存在结合位点（图4），说明RIG1（DDX58）是miR-362-5p下游的调控靶基因。图4miRanda在线软件预测的miR-362-5p和RIG1（DDX58）结合位点为进一步验证miR-362-5p与RIG1（DDX58）结合，通过双荧光素酶报告基因系统检测（实验委托广州锐博生物科技有限公司完成），结果发现：miR-362-5pmimic能够抑制RIG1野生型（RIG1-WT）表达，而对RIG1突变型（RIG1-Mut）表达无显著抑制作用(图5),说明miR-362-5p能够结合到野生型RIG1上相应的3"-UTR位点，而无法结合到突变型RIG1上的3"-UTR位点。因此RIG1是miR-362-5p的下游靶基因，miR-362-5p可结合RIG1上的3"-UTR位点，并抑制其表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌根治术治疗原发性肝癌患者的术后生存率及预后影响因素分析[J]. 谭妮,郑海平,欧超. 现代肿瘤医学. 2019(05)
[2]miR-362-5p在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 魏小丽,Ahmed Yaser,赵奇红,王华,顾康生. 安徽医科大学学报. 2018(12)
[3]长链非编码RNACASC2在肿瘤中的研究进展[J]. 曹金玉,刘繁荣. 临床与实验病理学杂志. 2018(07)
[4]基于癌症基因信息数据库分析载脂蛋白F在肿瘤中生物学意义[J]. 熊志勇,吴珏堃,梁豪. 中华实验外科杂志. 2018 (03)
[5]miR-362-5p靶向DKK1促进舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭[J]. 周媛,唐海阔,胡飚. 中华口腔医学研究杂志(电子版). 2017(02)
[6]自然杀伤细胞在原发性肝细胞肝癌中的浸润及其与预后的关系[J]. 朱玲燕,周嘉,刘彦章,潘卫东. 癌症. 2009(11)
[7]PI3K/AKT信号转导通路在肝癌细胞生长和黏附中的作用[J]. 富翠芹,王沁,尹蓉,武令启. 世界华人消化杂志. 2008(14)
本文编号：3583426
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RIG1在肝癌与癌旁组织中的表达A,癌旁组织HE染色；B,肝癌HE染色；
暨南大学博士学位论文miR-362-5p通过RIG1调控PI3K/AKT通路影响肝癌细胞侵袭转移的机制研究-20-图2miR-362-5p与RIG1在肝癌及癌旁组织中的表达A,miR-362-5p相对表达水平；B,RIG1表达水平；C,RIG1相对灰度值。*P＜0.01，**P＜0.01肝癌与癌旁组织比较。
暨南大学博士学位论文miR-362-5p通过RIG1调控PI3K/AKT通路影响肝癌细胞侵袭转移的机制研究-29-图3肝癌细胞中miR-362-5p、RIG1、PI3K、Akt表达关系A,miR-362-5p相对表达水平；B,RIG1、PI3K、Akt检测结果；C,RIG1、PI3K、Akt相对灰度值。*P＜0.01；**P＜0.01,MHCC97-H与MHCC97-L比较。3.2证实RIG1是miR-362-5p下游的靶基因通过miRanda在线软件（http://www.microrna.org/microrna/）预测miR-362-5p和RIG1（DDX58）的结合位点，结果发现miR-362-5p与RIG1（DDX58）3"-UTR存在结合位点（图4），说明RIG1（DDX58）是miR-362-5p下游的调控靶基因。图4miRanda在线软件预测的miR-362-5p和RIG1（DDX58）结合位点为进一步验证miR-362-5p与RIG1（DDX58）结合，通过双荧光素酶报告基因系统检测（实验委托广州锐博生物科技有限公司完成），结果发现：miR-362-5pmimic能够抑制RIG1野生型（RIG1-WT）表达，而对RIG1突变型（RIG1-Mut）表达无显著抑制作用(图5),说明miR-362-5p能够结合到野生型RIG1上相应的3"-UTR位点，而无法结合到突变型RIG1上的3"-UTR位点。因此RIG1是miR-362-5p的下游靶基因，miR-362-5p可结合RIG1上的3"-UTR位点，并抑制其表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌根治术治疗原发性肝癌患者的术后生存率及预后影响因素分析[J]. 谭妮,郑海平,欧超. 现代肿瘤医学. 2019(05)
[2]miR-362-5p在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 魏小丽,Ahmed Yaser,赵奇红,王华,顾康生. 安徽医科大学学报. 2018(12)
[3]长链非编码RNACASC2在肿瘤中的研究进展[J]. 曹金玉,刘繁荣. 临床与实验病理学杂志. 2018(07)
[4]基于癌症基因信息数据库分析载脂蛋白F在肿瘤中生物学意义[J]. 熊志勇,吴珏堃,梁豪. 中华实验外科杂志. 2018 (03)
[5]miR-362-5p靶向DKK1促进舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭[J]. 周媛,唐海阔,胡飚. 中华口腔医学研究杂志(电子版). 2017(02)
[6]自然杀伤细胞在原发性肝细胞肝癌中的浸润及其与预后的关系[J]. 朱玲燕,周嘉,刘彦章,潘卫东. 癌症. 2009(11)
[7]PI3K/AKT信号转导通路在肝癌细胞生长和黏附中的作用[J]. 富翠芹,王沁,尹蓉,武令启. 世界华人消化杂志. 2008(14)
本文编号：3583426
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