骨钙素和NAD在神经退行性疾病中的作用

发布时间：2022-01-20 05:34

　　目的探讨骨特异性来源的骨钙素（OCN）对阿尔茨海默病（AD）小鼠认知功能障碍的影响和机制以及骨代谢重要因子β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）对帕金森病（PD）小鼠运动功能障碍的作用和机制。方法在探索OCN对AD小鼠作用的实验中,我们采用7月龄APP/PS1雄性小鼠作为AD模型小鼠,采用外周和中枢注射非羧化骨钙素（ucOCN,骨钙素的活性形式）两种方式进行干预。外周注射采用腹腔注射ucOCN 4周,每日固定时间点注射一次,剂量为1 ug/kg和10 ug/kg;中枢注射采用背部皮下埋入微量渗透压泵并连接导管和脑部注射装置、侧脑室持续注射2周,剂量为20 ng/h;两种方式干预结束后分别依次进行开放场、高架十字迷宫和明暗穿梭实验检测小鼠焦虑样行为,水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力;行为学检测完成后取材,石蜡切片免疫组化染海马和皮质淀粉纤维状斑块、冰冻切片免疫荧光染海马星形胶质细胞和小胶质细胞,Western Blot检测Aβ相关蛋白和AKT/mTOR通路蛋白表达。体外采用老化Aβ1-42损伤PC12细胞24 h,并提前2 h采用不同浓度ucOCN干预,观察ucOCN对细胞的保护作用和AKT/... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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骨钙素对阿尔茨海默病小鼠模型保护作用的实验流程图

上海交通大学医学院博士学位论文 32 图1.2阿尔茨海默病小鼠建模成功。APP/PS1小鼠连锁表达APP和PS1两个基因（A），7月龄时高表达APP蛋白（B）、海马和皮质存在淀粉样斑块沉积（C）和激活的炎症反应（D）、相对于WT小鼠存在明显的空间学习记忆能力障碍（E）。HC:hippocampus;C:cortex。Figure1.2ThesuccessfulestablishmentofanAlzheimer’sdiseasemousemodel.2腹腔注射ucOCN可改善APP/PS1小鼠的焦虑样行为和空间学习记忆能力鉴于ucOCN可通过血脑屏障进入中枢、结合于海马CA3区，因此我们首先采用腹腔注射的方式观察ucOCN干预是否可改善AD小鼠的焦虑相关行为以及学习记忆能力障碍。5只小鼠于行为学测试前死亡。焦虑相关行为通过开放尝高架十字迷宫和明暗穿梭3个实验相互印证反映。在开放场实验的5min内，相对于WT小鼠，AD小鼠在开放场中心区域所处时间有降低趋势（F(4,65)=1.880,P=0.125,posthoc:WTvsAD,P=0.078,图1.3A），而腹腔注射ucOCN28天的AD小鼠在开放场中心区域时间有增加趋势，尤其是1ug/kgucOCN干预组，但均未达到统计学差异（P>0.05,图1.3A）；而AD小鼠进入中心区域的次数较WT小鼠明显减

上海交通大学医学院博士学位论文 34 图1.3腹腔注射骨钙素可改善AD小鼠的焦虑样行为。AD小鼠进入开放场的时间（A）和次数（B）减少，进入明箱的时间减少（E），而在高架十字迷宫开臂的时间（C）和次数（D）以及明箱的次数（F）和WT小鼠无明显差别；腹腔注射骨钙素可增加AD小鼠进入开放场中心区域（B）和高架十字迷宫开臂的次数（D）以及进入明暗箱明箱的时间（E）。OFT、EPMT:N=13-15；LDTT:N=7-8.Figure1.3Osteocalcininjectedintraperitoneallyreducedtheincreasedanxiety-likebehaviorofADmice.表1.1腹腔注射OCN小鼠焦虑样行为测试结果Table1.1Resultsofanxiety-likebehavioraltestsinmicewithintraperitonealosteocalcininjection(mean±SEM).BehavioralTestsWT+NSWT+10ug/kgOCNAD+NSAD+1ug/kgOCNAD+10ug/kgOCNOpenFieldTestN=14N=14N=13N=14N=15TimespentinCenter(s)35.143±6.48047.950±15.78314.546±2.57942.150±13.33121.753±5.267EntryintoCenter19.21±1.953**15.79±1.502*9.85±0.953#25.86±3.561**19.20±2.256*


本文编号：3598265