基于“筋骨平衡”理论探讨鹿筋健骨功效的生物学机制

发布时间：2022-01-21 05:39

　　目的:探究鹿筋胶原健骨的生物学机制。方法:采用酸酶结合方法建立鹿筋胶原的提取制备工艺;采用CCK-8方法观察鹿筋胶原对成骨细胞的增殖影响;通过转录组测序技术观察鹿筋胶原对成骨细胞的基因表达变化;在细胞和分子水平上揭示鹿筋胶原健骨功效的生物学机制。通过细胞增殖法和转录组测序技术对人参和鹿筋的协同作用进行了相关研究。结果:1.通过单因素分析及正交试验,建立了鹿筋胶原提取制备工艺,具体工艺为应用5%醋酸体积溶液浸泡鹿筋颗粒48h,煎煮1.5h后按照酶底比1:1000加入胃蛋白酶,继续酶解6h,收率可达58.56%,纯度可达48.4%;2.采用CCK-8法,阐明了鹿筋胶原在4mg/ml至10mg/ml浓度范围内对MC-3T3细胞具有促增殖作用,且呈一定的量效关系,在浓度为8mg/ml时促增殖作用最明显。3.通过RNA-seq测序技术和手段,建立了鹿筋胶原的转录组数据库,通过生物信息学分析方法,共鉴定出到852个差异表达基因,与空白组比较,鹿筋胶原处理组显著上调的差异表达基因502个,这些基因主要参与调控成骨的细胞代谢、增殖调节;显著下调的差异表达基因350个,这些基因主要参与调控成骨生物进程。... 

【文章来源】：长春中医药大学吉林省

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

不同醋酸体积分数对鹿筋回收率的影响

不同煎煮时间对鹿筋回收率的影响

长春中医药大学2020届博士学位论文36图1-3不同浸提时间对鹿筋回收率的影响注：图中横坐标为不同浸提时间，纵坐标为DSC的回收率。3.1.4酶种类的确定对于加入消化酶的种类的判定，我们选取了最常用的两种消化酶，即胃蛋白酶及胰蛋白酶。实验过程中发现，加入胰蛋白酶与未加酶的相比较回收率基本一样，且加入胰蛋白酶会引入大量的盐，但加入胃蛋白酶回收率会显著增加，因此加入胃蛋白酶效果更佳。结果如图1-4所示。图1-4不同酶的种类对鹿筋回收率的影响3.1.5不同酶底比的确定以不加酶处理的组别做为空白对照组，加入胃蛋白酶处理的鹿筋收率明显高于空


本文编号：3599760