TFEB对胰腺癌生物学行为影响及机制的研究

发布时间：2022-01-26 09:32

　　第一部分胰腺癌中TFEB与肿瘤生物学行为关系的研究背景胰腺癌是一种高致死的疾病,多项研究表明自噬参与了胰腺癌的多种恶性生物学行为,并与其侵袭转移能力密切相关。目前TFEB被认为是调控自噬溶酶体通路的关键因子。因此,进一步明确TFEB与胰腺癌恶性生物学行为的关系有望成为改善胰腺癌治疗现状的关键。方法采用免疫组化、实时PCR和蛋白印迹等方式检测TFEB在临床胰腺导管腺癌组织中水平,探究其与胰腺癌病理分级、临床分期和预后的关系。采用慢病毒技术干预胰腺癌细胞中TFEB的表达,利用体内外实验模型检测其与胰腺癌恶性生物学行为的关系。结果通过免疫组化、实时PCR和蛋白印迹实验,我们发现TFEB在胰腺癌肿瘤组织中表达水平高于正常胰腺组织。免疫组化中胰腺癌TFEB的表达情况与胰腺癌的分化程度密切相关,病理分化越差,TFEB反而表达量高。通过Kaplan-Meier分析癌组织中TFEB表达与胰腺癌患者总体存活之间的相关性,发现高表达组TFEB患者预后更差。利用CCK8、平板克隆和皮下成瘤实验,我们发现在胰腺癌细胞中抑制TFEB能抑制胰腺癌细胞的增殖能力。利用划痕实验、Transwell和小鼠脾包膜注射胰腺... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

TFEB在胰腺癌组织芯片中结果及其与临床资料的相关分析

estern Blot 检测胰腺癌细胞系 MIA PaCa-2 和 PANC-1 中稳定转的表达。IA PaCa-2 和 PANC-1 细胞中，转染 shCtrl 和 shTFEB 后，我们在不同时间点两组细胞活力，发现 MIAPaCa-2-shTFEB 在 72 小68±0.08191) 明 显 低 于 MIA PaCa-2-shCtrl 在 72 小 时 的 平091 ； t=3.774, p=0.0092) ，在 96 小时这 差距进 步增 ； PANC-1-shTFEB 在 72 小时的平均吸光度 (1.278±0.06636hCtrl 在 72 小时的平均吸光度(1.647±0.04840；t=4.490, p=0.004 差距进 步加大(t=6.518, p=0.0006)；表明下调 TFEB 减弱胰-4A)。在 PANC-1 细胞中，稳定转染 shCtrl 和 shTFEB 后，我们验来检测两组细胞的增殖能力，发现下调 TFEB 组和对照组相比均有减少，统计结果显示 shTFEB 组的克隆形成的平均数量为(1

27图 1-4 体外实验研究 TFEB 对胰腺癌肿瘤生物学特性的影响。ACCK8 实验检测下调TFEB 后不同时间点胰腺癌细胞 MIA PaCa-2 和 PANC-1 的活力。B 平板克隆实验检测下调TFEB后胰腺癌细胞PANC-1克隆形成的能力。C Transwell实验检测下调TFEB后胰腺癌细胞 MIA PaCa-2 和 PANC-1 的迁移能力。D 划痕实验检测下调 TFEB 后胰腺癌细胞 PANC-1 的爬行迁移能力。1.3.4 动物实验研究 TFEB 对胰腺癌肿瘤生物学特性的影响利用稳定转染的细胞株(PANC-1-shCtrl 和 PANC-1-shTFEB)在 Balb/c 裸鼠体内建立裸鼠皮下移植瘤模型。接种肿瘤细胞以后，继续培育裸鼠 个半月，每星期记录老鼠体重和瘤体大小。结果显示，PANC-1-shTFEB 组中皮下瘤的生长速度慢于


本文编号：3610256