人羊水间充质干细胞通过外泌体改善顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤
发布时间：2022-02-10 17:32
研究背景恶性肿瘤一直是威胁人类健康的重要原因之一。随着检测方法的日益改进,癌症早期诊断率逐渐增加。同时,随着治疗手段的提升和药品研发的飞速发展,女性恶性肿瘤患者的生存期逐渐延长,使得化疗对卵巢功能所造成的影响日益显现出来。卵泡储备对化疗十分敏感,化疗后短期可造成卵巢功能受损,长期可致生育率降低,早绝经风险明显增加,如潮热、失眠、骨钙流失等,这些严重影响了患者的生活质量,为此与卵巢功能保护相关的研究越来越多。现有的卵巢保护措施包括:卵巢组织冻存、胚胎或卵母细胞冻存、促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）以及干细胞治疗等。其中,干细胞治疗被认为是目前最有前景的治疗方法。干细胞能够不断进行自我更新,并且具有多向分化潜能。生理情况下能够替代衰老和凋亡的细胞,保证了机体组织结构的完整以及正常生理功能的发挥。病理情况下,能够抑制炎症反应,促进组织修复,有助于受损组织结构和功能的恢复。然而,干细胞治疗也存在一定潜在风险,例如,移植的细胞可能会引起血管栓塞、遗传物质发生突变、或造成机体肿瘤的发生,同时,干细胞的应用还存在伦理上的争议等。随着干细胞旁分泌物质外泌体的发现,人们逐渐将研究重心转向了干细胞分...
【文章来源】：吉林大学吉林省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
外泌体的生物发生与作用途径：早期的内体是由内膜内陷形成的
215.次日将混合液取出，切勿震荡或搅动混合液，1500×g离心30min。6.仔细将上清液去除干净，勿使沉淀再次溶解。向沉淀中加入100ulPBS重悬，-80℃保存。7.图2.1可见以上三种实验方法流程图。2.3.6.5透射电子显微镜hAFSc-EXO形态由三种不同提取方法得到的外泌体样品中分别取10ul滴在铜网上，室温静置1min。在铜网上滴加20ml/L磷钨酸溶液约10μL，室温负染1min。用滤纸将磷钨酸溶液吸干，铜网放置于白炽灯下烤10min，于透射电镜下观察三种分离方法所获得的外泌体情况并采集图像。图2.1常规超速离心法、浓缩后超速离心法以及SBI外泌体提取试剂分离提取hAFSc-EXO的流程示意图2.3.7hAFSc-EXO的鉴定2.3.7.1用BCA法定量外泌体蛋白浓度1.蛋白标准品的制备：用BCA试剂盒内的蛋白标准配制液和BSA粉末配制成浓度为25mg/ml的蛋白标准溶液，-20℃保存。取适量25mg/ml的蛋白标准溶液，用PBS稀释至浓度为0.5mg/ml的蛋白标准品，分装后于-20℃保存。2.BCA工作液的配制：根据待测样品的数量，按50：1（BCA试剂A：BCA试剂B）的比例配置适量工作液，充分混匀，室温待用。BCA工作液室温24h内稳定。3.蛋白浓度的测定：向96孔板内分别加入0、1、2、4、8、12、16、20μL电白标准品，并用PBS定容到20μL。选取由常规超速离心法获得的外泌体悬液作为待
23图2.2hAFSc细胞形态（光学显微镜，100×）注：A：为首次换液后的成纤维样细胞集落；B：为首次换液后的上皮样细胞集落；C：为P3代hAFSc。2.4.2hAFSc表面蛋白标志物的表达情况应用流式细胞术对P3代hAFS表面分子标志物进行鉴定，结果发现通过分离培养获得的hAFSc能够表达干细胞特有的蛋白分子标志物CD29和CD90，并表达多能干细胞表面分子标志物SSEA和Oct3/4。表达MHC（主要组织相容性复合体）I类分子蛋白HLA-ABC，不表达MHCII类分子蛋白HLA-DR。不表达血管内皮细胞标志物CD34（也是造血干细胞抗原）和白细胞共同抗原CD45，两者与造血干细胞相关，是其表面的分子标志物（图2.3）。这些结果表明分离获得的hAFSc具有多能干细胞特性，不含有造血干细胞成分，且不存在MHCII类分子蛋白，免疫原性较低，输入机体内不易诱发免疫排斥反应，以上结果与以往研究相同，说明我们分离培养得到的细胞为hAFSc。ABC
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mesenchymal stem cell-derived exosomes promote neurogenesis and cognitive function recovery in a mouse model of Alzheimer’s disease[J]. Edwin E.Reza-Zaldivar,Mercedes A.Hernández-Sapiéns,Yanet K.Gutiérrez-Mercado,Sergio Sandoval-ávila,Ulises Gomez-Pinedo,Ana L.Márquez-Aguirre,Estefanía Vázquez-Méndez,Eduardo Padilla-Camberos,Alejandro A.Canales-Aguirre. Neural Regeneration Research. 2019(09)
本文编号：3619244
【文章来源】：吉林大学吉林省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
外泌体的生物发生与作用途径：早期的内体是由内膜内陷形成的
215.次日将混合液取出，切勿震荡或搅动混合液，1500×g离心30min。6.仔细将上清液去除干净，勿使沉淀再次溶解。向沉淀中加入100ulPBS重悬，-80℃保存。7.图2.1可见以上三种实验方法流程图。2.3.6.5透射电子显微镜hAFSc-EXO形态由三种不同提取方法得到的外泌体样品中分别取10ul滴在铜网上，室温静置1min。在铜网上滴加20ml/L磷钨酸溶液约10μL，室温负染1min。用滤纸将磷钨酸溶液吸干，铜网放置于白炽灯下烤10min，于透射电镜下观察三种分离方法所获得的外泌体情况并采集图像。图2.1常规超速离心法、浓缩后超速离心法以及SBI外泌体提取试剂分离提取hAFSc-EXO的流程示意图2.3.7hAFSc-EXO的鉴定2.3.7.1用BCA法定量外泌体蛋白浓度1.蛋白标准品的制备：用BCA试剂盒内的蛋白标准配制液和BSA粉末配制成浓度为25mg/ml的蛋白标准溶液，-20℃保存。取适量25mg/ml的蛋白标准溶液，用PBS稀释至浓度为0.5mg/ml的蛋白标准品，分装后于-20℃保存。2.BCA工作液的配制：根据待测样品的数量，按50：1（BCA试剂A：BCA试剂B）的比例配置适量工作液，充分混匀，室温待用。BCA工作液室温24h内稳定。3.蛋白浓度的测定：向96孔板内分别加入0、1、2、4、8、12、16、20μL电白标准品，并用PBS定容到20μL。选取由常规超速离心法获得的外泌体悬液作为待
23图2.2hAFSc细胞形态（光学显微镜，100×）注：A：为首次换液后的成纤维样细胞集落；B：为首次换液后的上皮样细胞集落；C：为P3代hAFSc。2.4.2hAFSc表面蛋白标志物的表达情况应用流式细胞术对P3代hAFS表面分子标志物进行鉴定，结果发现通过分离培养获得的hAFSc能够表达干细胞特有的蛋白分子标志物CD29和CD90，并表达多能干细胞表面分子标志物SSEA和Oct3/4。表达MHC（主要组织相容性复合体）I类分子蛋白HLA-ABC，不表达MHCII类分子蛋白HLA-DR。不表达血管内皮细胞标志物CD34（也是造血干细胞抗原）和白细胞共同抗原CD45，两者与造血干细胞相关，是其表面的分子标志物（图2.3）。这些结果表明分离获得的hAFSc具有多能干细胞特性，不含有造血干细胞成分，且不存在MHCII类分子蛋白，免疫原性较低，输入机体内不易诱发免疫排斥反应，以上结果与以往研究相同，说明我们分离培养得到的细胞为hAFSc。ABC
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mesenchymal stem cell-derived exosomes promote neurogenesis and cognitive function recovery in a mouse model of Alzheimer’s disease[J]. Edwin E.Reza-Zaldivar,Mercedes A.Hernández-Sapiéns,Yanet K.Gutiérrez-Mercado,Sergio Sandoval-ávila,Ulises Gomez-Pinedo,Ana L.Márquez-Aguirre,Estefanía Vázquez-Méndez,Eduardo Padilla-Camberos,Alejandro A.Canales-Aguirre. Neural Regeneration Research. 2019(09)
本文编号：3619244
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教材专著
