金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究
发布时间：2022-02-17 17:52
动脉粥样硬化是一个慢性炎症过程,炎症反应参与其发生发展。金雀异黄素（GEN）具有抗炎活性,但作用机制尚未完全阐释。课题组前期研究显示GEN抑制活化炎症细胞的转录因子NF-κB,下调miR-21和TLR4表达,生物信息学分析发现miR-21与TIPE2 CDS区存在特异性结合位点。据此我们推测:NF-κB/miR-21/TIPE2信号轴在炎症细胞反应中扮演重要角色,GEN通过抑制NF-κB,下调miR-21表达,进而活化TIPE2,阻断TLR4信号转导,最终发挥抗炎作用。为验证上述科学假说,本研究用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞和THP-1细胞构建炎症细胞反应模型,LPS诱导C57小鼠血管慢性炎症反应构建动物模型。RT-qPCR检测LPS对炎症细胞miR-21、miR-155、miR-125a表达的影响。利用慢病毒构建稳定过表达和敲降miR-21细胞系,NF-κB抑制剂PDTC和GEN单独或联合处理细胞后再用LPS刺激,RT-qPCR、Western Blot、IF分别检测TNF-α、IL-6、MCP-1、i NOS、COX-2、NF-κB p65、miR-21表达,分析miR...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省211工程院校
【文章页数】：145 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言与文献综述
1.1 炎症细胞反应与动脉粥样硬化
1.2 金雀异黄素的结构特征与生物学活性
1.3 金雀异黄素的抗炎作用及分子机制
1.4 炎症细胞反应的表观遗传调控
1.5 miRNA与炎症细胞反应
1.6 雌激素调控miR-21影响炎症细胞反应
1.7 免疫负调控因子TIPE2
1.8 炎症信号受体TLR4
1.9 立题依据和意义
第二章 NF-κB/miR-21 调控LPS诱导的炎症细胞反应
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 材料
2.2.2 方法
2.3 结果
2.3.1 构建LPS诱导的炎症细胞反应模型
2.3.2 LPS上调炎症细胞miR-21 表达
2.3.3 miR-21促进炎症细胞反应
2.3.4 活化炎症细胞miR-21 表达依赖于转录因子NF-κB
2.3.5 NF-κB/miR-21 调控炎症细胞反应
2.3.6 LPS依赖NF-κB增强miR-21 宿主基因启动子活性
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 金雀异黄素调控NF-κB/miR-21 抑制炎症细胞反应
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 材料
3.2.2 方法
3.3 结果
3.3.1 GEN对巨噬细胞活力的影响
3.3.2 GEN以剂量、时间依赖的方式抑制活化巨噬细胞miR-21表达
3.3.3 GEN抑制miR-21 表达发挥抗炎作用
3.3.4 GEN对炎症细胞反应的抑制作用依赖于NF-κB
3.3.5 GEN抑制NF-κB,下调miR-21 表达
3.3.6 GEN对活化巨噬细胞miR-21 宿主基因启动子活性的抑制作用依赖于NF-κB
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 金雀异黄素调控miR-21/TIPE2/TLR4 抑制炎症细胞反应的分子机制
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 材料
4.2.2 方法
4.3 结果
4.3.1 GEN促进免疫负调控因子TIPE2 表达
4.3.2 GEN通过调控TIPE2 发挥抗炎作用
4.3.3 GEN抑制炎症信号受体TLR4 介导的信号转导
4.3.4 GEN上调TIPE2,抑制TLR4 信号通路
4.3.5 GEN通过抑制miR-21 调控TIPE2/TLR4 信号通路
4.3.6 TIPE2是miR-21 的直接靶标
4.4 讨论
4.5 小结
研究结论与展望
参考文献
缩略词表(中英文对照)
攻读博士学位期间撰写和发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]金雀异黄素调控miR-21表达促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡[J]. 向丽萍,丛丽,张勇,刘素娟,谢小林,柏萍娟,向雪萍,符晓华. 药学学报. 2019(02)
博士论文
[1]microRNA相关的生物信息学与进化分析[D]. 杨桢.复旦大学 2011
本文编号：3629852
【文章来源】：湖南师范大学湖南省211工程院校
【文章页数】：145 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言与文献综述
1.1 炎症细胞反应与动脉粥样硬化
1.2 金雀异黄素的结构特征与生物学活性
1.3 金雀异黄素的抗炎作用及分子机制
1.4 炎症细胞反应的表观遗传调控
1.5 miRNA与炎症细胞反应
1.6 雌激素调控miR-21影响炎症细胞反应
1.7 免疫负调控因子TIPE2
1.8 炎症信号受体TLR4
1.9 立题依据和意义
第二章 NF-κB/miR-21 调控LPS诱导的炎症细胞反应
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 材料
2.2.2 方法
2.3 结果
2.3.1 构建LPS诱导的炎症细胞反应模型
2.3.2 LPS上调炎症细胞miR-21 表达
2.3.3 miR-21促进炎症细胞反应
2.3.4 活化炎症细胞miR-21 表达依赖于转录因子NF-κB
2.3.5 NF-κB/miR-21 调控炎症细胞反应
2.3.6 LPS依赖NF-κB增强miR-21 宿主基因启动子活性
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 金雀异黄素调控NF-κB/miR-21 抑制炎症细胞反应
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 材料
3.2.2 方法
3.3 结果
3.3.1 GEN对巨噬细胞活力的影响
3.3.2 GEN以剂量、时间依赖的方式抑制活化巨噬细胞miR-21表达
3.3.3 GEN抑制miR-21 表达发挥抗炎作用
3.3.4 GEN对炎症细胞反应的抑制作用依赖于NF-κB
3.3.5 GEN抑制NF-κB,下调miR-21 表达
3.3.6 GEN对活化巨噬细胞miR-21 宿主基因启动子活性的抑制作用依赖于NF-κB
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 金雀异黄素调控miR-21/TIPE2/TLR4 抑制炎症细胞反应的分子机制
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 材料
4.2.2 方法
4.3 结果
4.3.1 GEN促进免疫负调控因子TIPE2 表达
4.3.2 GEN通过调控TIPE2 发挥抗炎作用
4.3.3 GEN抑制炎症信号受体TLR4 介导的信号转导
4.3.4 GEN上调TIPE2,抑制TLR4 信号通路
4.3.5 GEN通过抑制miR-21 调控TIPE2/TLR4 信号通路
4.3.6 TIPE2是miR-21 的直接靶标
4.4 讨论
4.5 小结
研究结论与展望
参考文献
缩略词表(中英文对照)
攻读博士学位期间撰写和发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]金雀异黄素调控miR-21表达促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡[J]. 向丽萍,丛丽,张勇,刘素娟,谢小林,柏萍娟,向雪萍,符晓华. 药学学报. 2019(02)
博士论文
[1]microRNA相关的生物信息学与进化分析[D]. 杨桢.复旦大学 2011
本文编号：3629852
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3629852.html
