脊髓小胶质细胞P2Y12受体在神经病理性疼痛中的作用及其机制研究
发布时间：2022-02-19 04:46
第一部分研究神经病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12受体的表达情况及其对疼痛行为学的影响目的检测脊神经根结扎模型（SNL）神经病理性疼痛大鼠脊髓P2Y12受体蛋白的表达情况及其抑制剂对大鼠疼痛行为学的影响变化。方法（1）通过进行L5脊神经根结扎建立SNL神经病理性疼痛大鼠模型;（2）通过western blot法检测SNL模型大鼠术后脊髓P2Y12蛋白的表达时程变化情况;（3）通过共聚焦免疫荧光组织化学定量法检测SNL模型大鼠脊髓P2Y12蛋白表达时程变化情况;（4）通过共聚焦免疫荧光组织化学双标法检测SNL模型大鼠脊髓背角的P2Y12蛋白与神经元、小胶质细胞、星型胶质细胞以及少突胶质细胞的细胞共定位情况;（5）构建大鼠鞘内置管模型,以方便鞘内给药;（6）用von Frey纤维丝检测大鼠的机械痛阈变化情况,比较假手术组,SNL手术组,SNL+鞘内注射P2Y12抑制剂MRS2395组,SNL+口服P2Y12抑制剂氯吡格雷组大鼠的机械痛阈变化情况;（7）用Hargreaves’热辐射刺激法检测大鼠的热痛阈变化情况,比较假手术组,SNL手术组,SNL+鞘内注射P2Y12抑制剂MRS2395组,SN...
【文章来源】：上海交通大学上海市211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
英文缩略词表
绪论
第一部分 神经病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12受体表达变化情况及其对疼痛行为学的影响研究
1.1 研究背景
1.2 材料与方法
1.2.1 实验动物
1.2.2 制备动物模型
1.2.3 动物的药物处理
1.2.4 动物的疼痛行为学测定
1.2.5 主要实验仪器
1.2.6 主要实验试剂
1.2.7 主要实验抗体
1.2.8 分子生物学主要研究方法
1.2.9 统计学分析
1.3 结果
1.3.1 SNL大鼠出现触诱发痛和热痛觉过敏
1.3.2 SNL大鼠患侧脊髓的P2Y12 蛋白表达增加
1.3.3 SNL大鼠脊髓的P2Y12 蛋白与小胶质细胞明显共标
1.3.4 口服或鞘内注射P2Y12 抑制剂可部分缓解SNL大鼠机械痛和热痛
1.3.5 口服或鞘内注射P2Y12 抑制剂可显著抑制SNL大鼠术后小胶质细胞的激活
1.4 讨论
1.5 小结
第二部分 神经病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12 受体与p38MAPK和 RhoA/ROCK2 信号通路蛋白表达的关系研究
2.1 研究背景
2.2 材料与方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 动物模型制备
2.2.3 动物的药物处理
2.2.4 动物的疼痛行为学测定
2.2.5 主要实验仪器
2.2.6 主要实验试剂
2.2.7 主要实验抗体
2.2.8 分子生物学主要研究方法
2.2.9 统计学分析
2.3 结果
2.3.1 SNL大鼠患侧脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表达增加
2.3.2 SNL大鼠患侧脊髓的小胶质细胞与磷酸化p38MAPK明显共标
2.3.3 P2Y12 抑制剂显著抑制术后脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表达
2.3.4 p38MAPK抑制剂可显著缓解手术引起的大鼠机械痛和热痛
2.3.5 术后,GTP-RhoA和 ROCK2 蛋白在SNL大鼠脊髓中表达显著增加
2.3.6 P2Y12 抑制剂使SNL术后第7 天大鼠患侧脊髓中ROCK2 蛋白的表达显著减少
2.3.7 ROCK抑制剂使SNL术后大鼠脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表达显著减少
2.3.8 ROCK抑制剂可显著缓解SNL大鼠术后的触诱发痛和热痛觉过敏
2.4 讨论
2.5 小结
第三部分 P2Y12 基因敲除对神经病理性疼痛小鼠疼痛行为学及其脊髓背角Ⅱ层神经元兴奋性突触传递的影响
3.1 研究背景
3.2 材料与方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 小鼠基因型鉴定
3.2.3 制备动物模型
3.2.4 动物的疼痛行为学测定
3.2.5 主要实验仪器
3.2.6 主要实验试剂
3.2.7 电生理主要研究方法
3.2.8 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 小鼠基因型鉴定结果
3.3.2 不同基因型的PSNL小鼠出现不同程度的触诱发痛和热痛觉过敏
3.3.3 不同基因型小鼠脊髓神经元mEPSC的变化
3.3.4 不同基因型小鼠脊髓背角神经元静息膜电位的差异
3.3.5 不同基因型小鼠脊髓神经元注入电流诱发单个动作电位的差异
3.4 讨论
3.5 小结
全文总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间已发表或待发表的论文
本文编号：3632245
【文章来源】：上海交通大学上海市211工程院校985工程院校教育部直属院校
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【学位级别】：博士
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英文摘要
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绪论
第一部分 神经病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12受体表达变化情况及其对疼痛行为学的影响研究
1.1 研究背景
1.2 材料与方法
1.2.1 实验动物
1.2.2 制备动物模型
1.2.3 动物的药物处理
1.2.4 动物的疼痛行为学测定
1.2.5 主要实验仪器
1.2.6 主要实验试剂
1.2.7 主要实验抗体
1.2.8 分子生物学主要研究方法
1.2.9 统计学分析
1.3 结果
1.3.1 SNL大鼠出现触诱发痛和热痛觉过敏
1.3.2 SNL大鼠患侧脊髓的P2Y12 蛋白表达增加
1.3.3 SNL大鼠脊髓的P2Y12 蛋白与小胶质细胞明显共标
1.3.4 口服或鞘内注射P2Y12 抑制剂可部分缓解SNL大鼠机械痛和热痛
1.3.5 口服或鞘内注射P2Y12 抑制剂可显著抑制SNL大鼠术后小胶质细胞的激活
1.4 讨论
1.5 小结
第二部分 神经病理性疼痛大鼠脊髓中P2Y12 受体与p38MAPK和 RhoA/ROCK2 信号通路蛋白表达的关系研究
2.1 研究背景
2.2 材料与方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 动物模型制备
2.2.3 动物的药物处理
2.2.4 动物的疼痛行为学测定
2.2.5 主要实验仪器
2.2.6 主要实验试剂
2.2.7 主要实验抗体
2.2.8 分子生物学主要研究方法
2.2.9 统计学分析
2.3 结果
2.3.1 SNL大鼠患侧脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表达增加
2.3.2 SNL大鼠患侧脊髓的小胶质细胞与磷酸化p38MAPK明显共标
2.3.3 P2Y12 抑制剂显著抑制术后脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表达
2.3.4 p38MAPK抑制剂可显著缓解手术引起的大鼠机械痛和热痛
2.3.5 术后,GTP-RhoA和 ROCK2 蛋白在SNL大鼠脊髓中表达显著增加
2.3.6 P2Y12 抑制剂使SNL术后第7 天大鼠患侧脊髓中ROCK2 蛋白的表达显著减少
2.3.7 ROCK抑制剂使SNL术后大鼠脊髓中磷酸化p38MAPK蛋白的表达显著减少
2.3.8 ROCK抑制剂可显著缓解SNL大鼠术后的触诱发痛和热痛觉过敏
2.4 讨论
2.5 小结
第三部分 P2Y12 基因敲除对神经病理性疼痛小鼠疼痛行为学及其脊髓背角Ⅱ层神经元兴奋性突触传递的影响
3.1 研究背景
3.2 材料与方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 小鼠基因型鉴定
3.2.3 制备动物模型
3.2.4 动物的疼痛行为学测定
3.2.5 主要实验仪器
3.2.6 主要实验试剂
3.2.7 电生理主要研究方法
3.2.8 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 小鼠基因型鉴定结果
3.3.2 不同基因型的PSNL小鼠出现不同程度的触诱发痛和热痛觉过敏
3.3.3 不同基因型小鼠脊髓神经元mEPSC的变化
3.3.4 不同基因型小鼠脊髓背角神经元静息膜电位的差异
3.3.5 不同基因型小鼠脊髓神经元注入电流诱发单个动作电位的差异
3.4 讨论
3.5 小结
全文总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间已发表或待发表的论文
本文编号：3632245
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3632245.html
