丹参酮ⅡA通过β-arrestin1介导的GSK-3β/β-catenin信号通路抑制大肠癌EMT和侵袭转移的机制研究
发布时间：2022-04-26 19:08
目的本研究探讨β-arrestin1通过GSK-3β/β-catenin信号通路调控大肠癌上皮-间质转化及侵袭转移的作用,并深入研究丹参酮ⅡA抑制大肠癌EMT及转移的作用机制,为丹参酮ⅡA抗大肠癌转移的靶向治疗提供理论依据。方法（1）利用GSE41258数据库分析大肠癌患者原发灶及肝肺转移灶中β-arrestin1的表达和大肠癌预后之间的关系。（2）利用生物信息学分析β-arrestin1的作用靶点和作用途径,构建“β-arrestin1-作用靶点”的生物网络。（3）通过免疫组化分析β-arrestin1蛋白在大肠癌原发灶和转移灶中的表达情况,探讨β-arrestin1表达与大肠癌临床病理特征之间的相关性。（4）构建β-arrestin1基因干扰和过表达的重组慢病毒载体,感染并筛选获得β-arrestin1基因稳定干扰和过表达的大肠癌细胞株。（5）采用Transwell、细胞划痕、Western blot和免疫荧光等方法,研究β-arrestin1对大肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭转移的影响;包括Western blot检测β-arrestin1对Wnt/β-catenin信号通路及下游...
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
英文缩略词
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 人大肠癌组织标本中β-arrestin1 的差异性表达及临床意义
1 材料与方法
1.1 β-arrestin1 生物信息学分析
1.2 临床大肠癌手术标本的生物信息学分析
1.3 统计学处理
2.结果
2.1 β-arrestin1 生物学信息分析
2.2 β-arrestin1 对患者生存期的影响
2.3 β-arrestin1 作用靶点分析
2.4 β-arrestin1 在大肠癌组织中的表达分析
3.分析与讨论
第二部分 β-arrestin1 对大肠癌细胞EMT及侵袭转移的影响
1.材料
1.1 细胞株
1.2 试剂
1.3 仪器设备
1.4 主要实验试剂的配制
2.方法
2.1 人大肠癌细胞株 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116及 Lo Vo 的培养
2.2 慢病毒感染及筛选
2.3 RT-PCR 检测 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1 m RNA 的表达
2.4 Western blot 检测人肠癌细胞 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及 Lo Vo 中β-arrestin1 蛋白的表达
2.5 RT-PCR 检测干扰及过表达 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1mRNA 的表达
2.6 Western blot 检测干扰及过表达 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1蛋白的表达
2.7 免疫荧光检测干扰及过表达 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1 蛋白的表达和定位
2.8 Western blot检测中β-arrestin1对人大肠癌细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snai及 Vimentin蛋白表达的影响
2.9 免疫荧光检测β-arrestin1 对人大肠癌细胞中E-cadherin和Vimentin表达和定位的影响
2.10 Transwell 检测β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
2.11 细胞划痕检测β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
2.12 Western blot检测β-arrestin1 对人大肠癌细胞中MMP2、MMP9蛋白表达的影响
2.13 β-arrestin1 对裸鼠大肠癌肺转移及EMT的影响
2.14 统计学处理
3.结果
3.1 人大肠癌 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及Lo Vo 细胞中β-arrestin1 mRNA 的表达
3.2 人大肠癌 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及Lo Vo 细胞中β-arrestin1 蛋白的表达水平
3.3 干扰和过表达β-arrestin1 对 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1mRNA 表达的影响
3.4 干扰和过表达β-arrestin1 对 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1 蛋白表达的影响
3.5 干扰和过表达各组中β-arrestin1 蛋白的表达和定位
3.6 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞 EMT 关键基因表达的影响
3.7 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中 E-cadherin 及Vimentin 表达和定位的影响
3.8 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.9 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.10 β-arrestin1 对人大肠癌细胞中MMP2及MMP9 蛋白表达的影响
3.11 β-arrestin1 对裸鼠大肠癌肺转移及EMT的影响
4 分析与讨论
第三部分 β-arrestin1 通过GSK-3β/β-catenin信号通路调控大肠癌EMT的机制
1.材料
1.1 药物与试剂
1.2 主要仪器设备
1.3 主要实验试剂的配制
2 方法
2.1 Western blot检测β-arrestin1对GSK-3β/β-catenin信号通路及下游蛋白表达的影响
2.2 Western blot检测β-arrestin1 对胞内、胞浆及胞核β-catenin蛋白表达的影响
2.3 免疫荧光检测β-arrestin1 对癌细胞β-catenin 表达和定位的影响
2.4 Western blot检测ICG001对GSK-3β/β-catenin信号通路及下游蛋白表达的影响
2.5 Western blot检测ICG001对E-cadherin、N-cadherin、Snai及Vimentin蛋白表达的影响
2.6 统计学处理
3 结果
3.1 β-arrestin1对GSK-3β/β-catenin信号通路及下游蛋白表达的影响
3.2 β-arrestin1 对胞内、胞浆及胞核β-catenin 蛋白表达的影响
3.3 β-arrestin1 对大肠癌细胞中β-catenin 表达和定位的影响
3.4 ICG001 对 GSK-3β/β-catenin 信号通路及下游蛋白表达的影响
3.5 ICG001对E-cadherin、N-cadherin、Snai及 Vimentin蛋白表达的影响
4 分析与讨论
第四部分 丹参酮ⅡA通过β-arrestin1介导的GSK-3β/β-catenin通路调控大肠癌EMT和侵袭转移
1.材料
1.1 药物与试剂
1.2 主要仪器设备
1.3 主要实验试剂的配制
2 方法
2.1 CCK-8 检测Tan IIA对 HCT-116及Lo Vo细胞增殖的影响
2.2 Transwell检测丹参酮ⅡA对人大肠癌细胞的迁移能力
2.3 细胞划痕检测丹参酮ⅡA对人大肠癌细胞的迁移能力
2.4 Wertern blot 检测丹参酮 IIA 对 EMT 关键基因表达的影响
2.5 Wertern blot 检测丹参酮 IIA 对 MMP2 和 MMP9 表达的影响
2.6 Wertern blot检测丹参酮IIA对对β-arrestin1/β-catenin信号通路的影响
2.7 丹参酮IIA对裸鼠大肠癌肺转移的作用
2.8 统计学处理
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞增殖抑制作用
3.2 丹参酮ⅡA 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.3 丹参酮ⅡA 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.4 丹参酮IIA对 EMT关键基因表达的影响
3.5 丹参酮IIA对 MMP2、MMP9 蛋白表达的影响
3.6 丹参酮IIA对β-arrestin1/β-catenin信号通路的影响
3.7 丹参酮IIA对裸鼠大肠癌肺转移的作用
4 分析与讨论
第五部分 创新点
第六部分 结论
致谢
参考文献
附录一 文献综述 The role and mechanisms of β-arrestins in cancer invasion and metastasis
References
附录二
附录三
博士在读期间发表论文、参与课题等
【参考文献】：
期刊论文
[1]上皮间质转化介导肿瘤转移的分子机制[J]. 张青云,傅俊江,陈汉春. 生命科学研究. 2018(06)
[2]MMPs和TIMPs与肿瘤关系的研究进展[J]. 杨锡彤,秦燕,王光明. 广东医学. 2018(16)
[3]大肠癌的中医药研究进展[J]. 刘佳丽,杨坤,孙平良. 湖南中医杂志. 2018(07)
[4]丹参活性成分及药理作用研究进展[J]. 姜雪,史磊. 药学研究. 2017(03)
[5]大肠癌现阶段治疗进展[J]. 朱正杰,李猛,余昌俊,欧阳欢,龙滕云. 安徽医学. 2015(04)
[6]消化道肿瘤血瘀证研究进展[J]. 成汇. 现代肿瘤医学. 2014(05)
[7]恶性肿瘤高凝状态——血瘀证——活血化瘀的思考[J]. 钱丽燕,郭勇. 中华中医药学刊. 2013(04)
[8]丹参酮ⅡA对COX-2激活Wnt/β-catenin信号通路介导的人肠癌细胞VEGF表达的调控作用[J]. 刘宣,王炎,李丹光,周利红,殷佩浩,隋华,范忠泽,李琦. 中华中医药杂志. 2013(01)
[9]β-arrestin对恶性肿瘤侵袭和转移过程的影响[J]. 常玓,张晨,赵虹,李庆昌. 医学综述. 2011(09)
[10]β-arrestin信号转导通路在炎症性肠病发生过程中的作用机制[J]. 范恒,廖奕,唐庆,梁丽,陈小艳. 世界华人消化杂志. 2010(29)
硕士论文
[1]血瘀证辩证与大肠癌转移相关性的临床研究[D]. 孙笕.浙江中医药大学 2014
本文编号：3648566
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【学位级别】：博士
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英文缩略词
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 人大肠癌组织标本中β-arrestin1 的差异性表达及临床意义
1 材料与方法
1.1 β-arrestin1 生物信息学分析
1.2 临床大肠癌手术标本的生物信息学分析
1.3 统计学处理
2.结果
2.1 β-arrestin1 生物学信息分析
2.2 β-arrestin1 对患者生存期的影响
2.3 β-arrestin1 作用靶点分析
2.4 β-arrestin1 在大肠癌组织中的表达分析
3.分析与讨论
第二部分 β-arrestin1 对大肠癌细胞EMT及侵袭转移的影响
1.材料
1.1 细胞株
1.2 试剂
1.3 仪器设备
1.4 主要实验试剂的配制
2.方法
2.1 人大肠癌细胞株 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116及 Lo Vo 的培养
2.2 慢病毒感染及筛选
2.3 RT-PCR 检测 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1 m RNA 的表达
2.4 Western blot 检测人肠癌细胞 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及 Lo Vo 中β-arrestin1 蛋白的表达
2.5 RT-PCR 检测干扰及过表达 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1mRNA 的表达
2.6 Western blot 检测干扰及过表达 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1蛋白的表达
2.7 免疫荧光检测干扰及过表达 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1 蛋白的表达和定位
2.8 Western blot检测中β-arrestin1对人大肠癌细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snai及 Vimentin蛋白表达的影响
2.9 免疫荧光检测β-arrestin1 对人大肠癌细胞中E-cadherin和Vimentin表达和定位的影响
2.10 Transwell 检测β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
2.11 细胞划痕检测β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
2.12 Western blot检测β-arrestin1 对人大肠癌细胞中MMP2、MMP9蛋白表达的影响
2.13 β-arrestin1 对裸鼠大肠癌肺转移及EMT的影响
2.14 统计学处理
3.结果
3.1 人大肠癌 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及Lo Vo 细胞中β-arrestin1 mRNA 的表达
3.2 人大肠癌 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及Lo Vo 细胞中β-arrestin1 蛋白的表达水平
3.3 干扰和过表达β-arrestin1 对 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1mRNA 表达的影响
3.4 干扰和过表达β-arrestin1 对 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中β-arrestin1 蛋白表达的影响
3.5 干扰和过表达各组中β-arrestin1 蛋白的表达和定位
3.6 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞 EMT 关键基因表达的影响
3.7 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞中 E-cadherin 及Vimentin 表达和定位的影响
3.8 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.9 β-arrestin1 对人大肠癌 HCT-116 及 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.10 β-arrestin1 对人大肠癌细胞中MMP2及MMP9 蛋白表达的影响
3.11 β-arrestin1 对裸鼠大肠癌肺转移及EMT的影响
4 分析与讨论
第三部分 β-arrestin1 通过GSK-3β/β-catenin信号通路调控大肠癌EMT的机制
1.材料
1.1 药物与试剂
1.2 主要仪器设备
1.3 主要实验试剂的配制
2 方法
2.1 Western blot检测β-arrestin1对GSK-3β/β-catenin信号通路及下游蛋白表达的影响
2.2 Western blot检测β-arrestin1 对胞内、胞浆及胞核β-catenin蛋白表达的影响
2.3 免疫荧光检测β-arrestin1 对癌细胞β-catenin 表达和定位的影响
2.4 Western blot检测ICG001对GSK-3β/β-catenin信号通路及下游蛋白表达的影响
2.5 Western blot检测ICG001对E-cadherin、N-cadherin、Snai及Vimentin蛋白表达的影响
2.6 统计学处理
3 结果
3.1 β-arrestin1对GSK-3β/β-catenin信号通路及下游蛋白表达的影响
3.2 β-arrestin1 对胞内、胞浆及胞核β-catenin 蛋白表达的影响
3.3 β-arrestin1 对大肠癌细胞中β-catenin 表达和定位的影响
3.4 ICG001 对 GSK-3β/β-catenin 信号通路及下游蛋白表达的影响
3.5 ICG001对E-cadherin、N-cadherin、Snai及 Vimentin蛋白表达的影响
4 分析与讨论
第四部分 丹参酮ⅡA通过β-arrestin1介导的GSK-3β/β-catenin通路调控大肠癌EMT和侵袭转移
1.材料
1.1 药物与试剂
1.2 主要仪器设备
1.3 主要实验试剂的配制
2 方法
2.1 CCK-8 检测Tan IIA对 HCT-116及Lo Vo细胞增殖的影响
2.2 Transwell检测丹参酮ⅡA对人大肠癌细胞的迁移能力
2.3 细胞划痕检测丹参酮ⅡA对人大肠癌细胞的迁移能力
2.4 Wertern blot 检测丹参酮 IIA 对 EMT 关键基因表达的影响
2.5 Wertern blot 检测丹参酮 IIA 对 MMP2 和 MMP9 表达的影响
2.6 Wertern blot检测丹参酮IIA对对β-arrestin1/β-catenin信号通路的影响
2.7 丹参酮IIA对裸鼠大肠癌肺转移的作用
2.8 统计学处理
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞增殖抑制作用
3.2 丹参酮ⅡA 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.3 丹参酮ⅡA 对人大肠癌 HCT-116 和 Lo Vo 细胞迁移能力的影响
3.4 丹参酮IIA对 EMT关键基因表达的影响
3.5 丹参酮IIA对 MMP2、MMP9 蛋白表达的影响
3.6 丹参酮IIA对β-arrestin1/β-catenin信号通路的影响
3.7 丹参酮IIA对裸鼠大肠癌肺转移的作用
4 分析与讨论
第五部分 创新点
第六部分 结论
致谢
参考文献
附录一 文献综述 The role and mechanisms of β-arrestins in cancer invasion and metastasis
References
附录二
附录三
博士在读期间发表论文、参与课题等
【参考文献】：
期刊论文
[1]上皮间质转化介导肿瘤转移的分子机制[J]. 张青云,傅俊江,陈汉春. 生命科学研究. 2018(06)
[2]MMPs和TIMPs与肿瘤关系的研究进展[J]. 杨锡彤,秦燕,王光明. 广东医学. 2018(16)
[3]大肠癌的中医药研究进展[J]. 刘佳丽,杨坤,孙平良. 湖南中医杂志. 2018(07)
[4]丹参活性成分及药理作用研究进展[J]. 姜雪,史磊. 药学研究. 2017(03)
[5]大肠癌现阶段治疗进展[J]. 朱正杰,李猛,余昌俊,欧阳欢,龙滕云. 安徽医学. 2015(04)
[6]消化道肿瘤血瘀证研究进展[J]. 成汇. 现代肿瘤医学. 2014(05)
[7]恶性肿瘤高凝状态——血瘀证——活血化瘀的思考[J]. 钱丽燕,郭勇. 中华中医药学刊. 2013(04)
[8]丹参酮ⅡA对COX-2激活Wnt/β-catenin信号通路介导的人肠癌细胞VEGF表达的调控作用[J]. 刘宣,王炎,李丹光,周利红,殷佩浩,隋华,范忠泽,李琦. 中华中医药杂志. 2013(01)
[9]β-arrestin对恶性肿瘤侵袭和转移过程的影响[J]. 常玓,张晨,赵虹,李庆昌. 医学综述. 2011(09)
[10]β-arrestin信号转导通路在炎症性肠病发生过程中的作用机制[J]. 范恒,廖奕,唐庆,梁丽,陈小艳. 世界华人消化杂志. 2010(29)
硕士论文
[1]血瘀证辩证与大肠癌转移相关性的临床研究[D]. 孙笕.浙江中医药大学 2014
本文编号：3648566
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3648566.html
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