宫颈癌特异性结合肽的筛选及AuNPs-PEG-（CSP-GD）的靶向放射增敏研究

发布时间：2022-07-04 20:23

　　宫颈癌是女性常见恶性肿瘤,放疗是其主要治疗手段之一,临床上约有80%子宫颈癌患者曾接受放疗,而其中30%～50%的晚期患者出现了放疗抵抗。因此,提高放射敏感性对晚期宫颈癌患者十分重要。靶向放射增敏剂将极大地提高肿瘤对放疗的敏感性,是改善放疗疗效的有效途径。但目前尚无理想的靶向放射增敏剂应用于临床。纳米科技的发展为研发新的靶向放射增敏剂提供了大量的理论依据及技术支持。金纳米颗粒（Gold nanoparticles,AuNPs or GNPs）具有独特理化性能、强光电吸收、表面等离子共振等效应,易制备且粒径与形态可控,与肿瘤组织具有高渗透性和滞留效应,同时易于修饰、生物相容性好等优点,是一种比较理想的放射增敏剂。本项目拟用体内噬菌体展示技术筛选的宫颈癌特异性结合肽（cervical cancer specific binding peptides,CSPs）修饰 AuNPs,以实现其对宫颈癌的主动靶向目的,增强其肿瘤放射增敏疗效,降低毒副作用,为宫颈癌的靶向放射增敏治疗提供崭新思路和有益探索。本实验分三部分研发这种新型宫颈癌靶向放射增敏剂,并探讨其对宫颈癌细胞的靶向性及体外放射增敏作用。... 

【文章页数】：175 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要缩略词中英文索引
前言
第一部分 宫颈癌特异性结合肽的筛选
    第1章 绪论
    第2章 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂及耗材
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 肿瘤细胞株
            2.1.4 菌株
            2.1.5 噬菌体展示肽库试剂盒
            2.1.6 实验动物
            2.1.7 组织芯片
            2.1.8 主要试剂的配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞的冻存与复苏
            2.2.3 荷瘤裸鼠动物模型的建立
            2.2.4 ER2738菌的活化及培养
            2.2.5 ER2738菌生长曲线绘制
            2.2.6 噬菌体滴度测定
            2.2.7 噬菌体展示肽库荷瘤裸鼠体内筛选
            2.2.8 免疫组化对噬菌体富集效果的分析
            2.2.9 阳性噬菌体的单克隆化
            2.2.10 噬菌斑的扩增及纯化(用于ELISA鉴定与DNA测序)
            2.2.11 细胞ELISA检测噬菌体单克隆对人宫颈癌细胞的亲和性
            2.2.12 噬菌体DNA提取
            2.2.13 噬菌体DNA测序及结果分析
            2.2.14 体内回输验证CSPs噬菌体对宫颈癌移植瘤的特异靶向能力
            2.2.15 细胞免疫荧光检测CSPs对宫颈癌细胞的体外靶向能力
            2.2.16 组织免疫荧光检测CSPs对人宫颈癌组织的体外靶向能力
            2.2.17 特异性结合肽的基本理化性质及同源性分析
            2.2.18 统计学分析
    第3章 结果
        3.1 人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤模型的建立及观察
        3.2 宿主菌E.coli ER2738的生长曲线绘制
        3.3 噬菌体展示环七肽库和十二肽库原库滴度测定结果
        3.4 靶向宫颈癌移植瘤的噬菌体体内筛选
            3.4.1 肿瘤组织中回收的噬菌体滴度测定及数据分析
            3.4.2 免疫组化实验对噬菌体在肿瘤组织中富集效果分析
        3.5 ELISA鉴定筛选所得噬菌体单克隆对宫颈癌细胞的亲和力
        3.6 噬菌体单克隆DNA测序及结果分析
        3.7 体内回输验证CSPs噬菌体对宫颈癌的特异靶向能力
        3.8 特异性结合短肽基本理化性质及同源性分析
            3.8.1 CSP-KQ
            3.8.2 CSP-SI
            3.8.3 CSP-GD
            3.8.4 CSP-FT
            3.8.5 CSP-TL
        3.9 CSPs对人宫颈癌细胞的体外靶向能力
        3.10 CSPs对人宫颈癌组织的特异性结合能力
    第4章 讨论
    第5章 结论
第二部分 金纳米颗粒靶向载体体系AuNPs-PEG-(CSP-GD)的制备及表征
    第1章 绪论
    第2章 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 CSP多肽修饰金纳米颗粒的制备
            2.2.2 AuNPs-PEG-(CSP-GD)纳米颗粒制备的处方工艺优化
            2 2.3 AuNPs-PEG-(CSP-GD)的表征及检测
    第3章 结果
        3.1 AuNPs-PEG-(CSP-GD)纳米颗粒制备的处方工艺优化
            3.1.1 AuNPs-PEG与CSP-GD反应质量比的优化
            3.1.2 AuNPs-PEG与CSP-GD反应时长的优化
            3.1.3 AuNPs-PEG与CSP-GD反应温度的优化
            3.1.4 AuNPs-PEG与CSP-GD反应体系pH值的优化
        3.2 透射电子显微镜表征
        3.3 马尔文激光粒度仪表征
        3.4 X射线光电子能谱表征
        3.5 紫外可见吸收光谱表征
        3.6 荧光分光光度法检测
        3.7 AuNPs-PEG-(CSP-GD)表面偶联的CSP-GD浓度测定
        3.8 AuNPs-PEG-(CSP-GD)溶液的金质量浓度测定
        3.9 AuNPs-PEG-(CSP-GD)体外稳定性检测
    第4章 讨论
    第5章 结论
第三部分 AuNPs-PEG-(CSP-GD)的靶向性及体外放射增敏研究
    第1章 绪论
    第2章 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 肿瘤细胞株
            2.1.4 实验动物
            2.1.5 主要试剂的配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 金纳米颗粒的制备
            2.2.2 细胞培养、冻存与复苏
            2.2.3 荷瘤裸鼠动物模型的建立
            2.2.4 香豆素-6标记的金纳米颗粒制备
            2.2.5 Cy5.5荧光标记的金纳米颗粒制备
            2.2.6 CCK-8实验
            2.2.7 细胞免疫荧光检测宫颈癌细胞靶向内吞金纳米颗粒能力
            2.2.8 流式细胞仪检测AuNPs-PEG-(CSP-GD)对宫颈癌细胞的体外靶向性
            2.2.9 小动物活体成像观察AuNPs-PEG-(CSP-GD)对宫颈癌组织的体内靶向性
            2.2.10 细胞克隆形成实验
            2.2.11 流式细胞仪检测细胞凋亡
            2.2.12 统计学分析
    第3章 结果
        3.1 AuNPs-PEG-(CSP-GD)对宫颈癌细胞的体外靶向性
            3.1.1 细胞免疫荧光检测
            3.1.2 流式细胞仪检测
        3.2 AuNPs-PEG-(CSP-GD)对宫颈癌组织的体内靶向性
        3.3 CSP-GD对宫颈癌SiHa、C-33A细胞的生长抑制作用
        3.4 金纳米颗粒对宫颈癌SiHa、C-33A细胞的毒性研究
        3.5 AuNPs-PEG-(CSP-GD)对宫颈癌细胞放射增敏的体外研究
            3.5.1 细胞克隆形成实验分析细胞增殖活性
            3.5.2 流式细胞仪检测细胞凋亡
    第4章 讨论
    第5章 结论
全文结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读博士期间取得的科研成果
基金资助
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]聚乙二醇和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子对人宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响[J]. 马洪鸽,林温文,史盼影,张保国.  中华放射医学与防护杂志. 2015 (11)
[2]纳米金对SPC-A1肺癌细胞体外放射增敏作用的研究[J]. 徐国平,姚志峰,杨航,刘永彪.  临床肿瘤学杂志. 2015(06)
[3]胃癌SGC7901细胞特异性结合肽的筛选及鉴定[J]. 郭彩霞,梁晓秋,何晓娟.  实用癌症杂志. 2012(04)
[4]肿瘤放疗增敏研究进展[J]. 董济民,冯关力.  陕西医学杂志. 2011(04)
[5]肿瘤放射治疗学新进展与发展设想[J]. 石梅.  解放军医学杂志. 2010(05)
[6]复发宫颈癌发病因素及其不同治疗方式对预后的影响[J]. 王忠民,姜继勇,乔新民.  中国实用妇科与产科杂志. 2010(03)

博士论文
[1]肝癌靶向多肽的筛选及X1/MePEG-PLA-CS纳米粒的靶向性研究[D]. 杨璞.中南大学 2010



本文编号：3655865