LKB1在非小细胞肺癌PD-1阻断治疗中的作用研究

发布时间：2022-08-10 13:33

　　PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂的应用显著改善了非小细胞肺癌（NSCLC）患者的治疗,已成为NSCLC患者治疗不可或缺的一部分,改变了NSCLC的治疗格局。然而,大多数患者仍不能从中获益,尤其是某些驱动基因突变阳性的患者。已有临床研究证实,肿瘤PD-L1表达水平越高,NSCLC患者越可能从PD-1/PD-L1抑制剂中获益。故肿瘤PD-L1表达可作为评估PD-1/PD-L1抑制剂疗效的预测因子,用于筛选敏感患者。肝激酶B1（LKB1）亦称丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11（STK11）,可磷酸化激活14种AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）超家族成员。15%-35%的NSCLC患者存在LKB1突变,后者常与鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）突变共同发生,是NSCLC中常见的驱动基因突变。先前的临床观察发现,KRAS/LKB1共突变的NSCLC患者中PD-L1表达水平低,PD-1/PD-L1抑制剂在该类患者中的疗效差。然而,LKB1是否可直接调控NSCLC中PD-L1的表达及LKB1突变/缺失肿瘤内PD-L1低表达在其抵抗PD-1/PD-L1阻断治疗中的作用尚不清楚。在本研究中,我们通过癌症基因组数据... 

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

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英文缩略词表
引言
第1章 文献综述
    1.1 非小细胞肺癌及其治疗
    1.2 免疫检查点治疗
        1.2.1 肿瘤免疫逃逸
            1.2.1.1 肿瘤免疫循环
            1.2.1.2 肿瘤免疫监视
        1.2.2 免疫检查点分子与肿瘤免疫逃逸
            1.2.2.1 CTLA-4
            1.2.2.2 PD-1
        1.2.3 免疫检查点抑制剂
            1.2.3.1 抗CTLA-4单克隆抗体
            1.2.3.2 抗PD-1/PD-L1单克隆抗体
            1.2.3.3 抗PD-1/PD-L1单克隆抗体的适应症
    1.3 非小细胞肺癌与免疫检查点治疗
        1.3.1 PD-1/PD-L1阻断治疗在非小细胞肺癌治疗中的应用
            1.3.1.1 Pembrolizumab
            1.3.1.2 Nivolumab
            1.3.1.3 Atezolizumab
            1.3.1.4 Durvalumab
            1.3.1.5 Avelumab
        1.3.2 非小细胞肺癌中PD-1/PD-L1阻断治疗的影响因素
            1.3.2.1 PD-L1
                1.3.2.1.1 PD-L1 表达对PD-1/PD-L1 阻断治疗的影响
                1.3.2.1.2 PD-L1表达检测及其局限性
                1.3.2.1.3 PD-L1表达的调节
            1.3.2.2 肿瘤免疫微环境
            1.3.2.3 驱动基因突变
    1.4 肝激酶B1(LKB1)与非小细胞肺癌
        1.4.1 LKB1的上下游信号
        1.4.2 LKB1在非小细胞肺癌中的作用
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 非小细胞肺癌组织样本
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 主要试剂及耗材
        2.1.6 主要溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞复苏与培养
        2.2.2 细胞传代
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 细胞计数及药物处理
            2.2.4.1 细胞计数
            2.2.4.2 药物处理
        2.2.5 蛋白提取
        2.2.6 蛋白免疫印迹(western blot)
        2.2.7 RNA提取
        2.2.8 逆转录
        2.2.9 实时荧光定量PCR(q RT-PCR)
        2.2.10 PD-L1 启动子DNA甲基化分析
        2.2.11 皮下肿瘤模型的建立及药物治疗
        2.2.12 石蜡切片及染色
            2.2.12.1 HE染色
            2.2.12.2 免疫组织化学染色
    2.3 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 NSCLC患者中PD-L1 表达与LKB1 正相关
    3.2 LKB1 上调NSCLC细胞中PD-L1 的表达
    3.3 AMPK信号参与NSCLC细胞中LKB1对PD-L1 表达的调节
        3.3.1 AMPK激活逆转LKB1 沉默所致的PD-L1 表达下调
        3.3.2 抑制AMPK减少LKB1 诱导的PD-L1 表达上调
    3.4 LKB1 沉默对PD-L1 启动子甲基化的影响
    3.5 LKB1 通过KEAP1/NRF2 信号上调PD-L1 的转录
        3.5.1 LKB1对KEAP1/NRF2 信号的影响
        3.5.2 KEAP1/NRF2 信号在LKB1对PD-L1 转录调节中的作用
    3.6 AMPK激活剂二甲双胍与抗PD-1 单克隆抗体的联合抗肿瘤作用
    3.7 LKB1沉默致抑制性肿瘤免疫微环境
        3.7.1 二甲双胍对LKB1 沉默肿瘤中PD-L1 表达的影响
        3.7.2 LKB1沉默对肿瘤内免疫细胞趋化因子表达的影响
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]2014年中国肺癌发病和死亡分析[J]. 孙可欣,郑荣寿,曾红梅,张思维,邹小农,顾秀瑛,夏昌发,杨之洵,李贺,陈万青,赫捷.  中华肿瘤杂志. 2018 (11)
[2]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



本文编号：3673727