MicroRNA-103在H 2 O 2 介导的人冠状动脉内皮细胞氧化应激模型中对终末期自噬与细胞焦亡的调控

发布时间：2022-09-27 16:48

　　研究背景冠状动脉粥样硬化是一种伴随多种严重并发症与后果的慢性炎症性反应,是影响全球死亡率与残疾率的重要原因。氧化应激损伤产生活性氧物质,从而造成的内皮细胞损伤被普遍认为是冠状动脉粥样硬化发生的起始因素。细胞自噬是一种真核细胞依赖溶酶体分解代谢受损细胞器及错误蛋白的生命过程,可通过抑制炎症通路,减少细胞凋亡与坏死,抑制内质网应激等方式逆转氧化应激反应带来的不良后果。以自噬溶酶体的形成为界限,分为早期自噬与终末期自噬。尽管,近年来在氧化应激反应中细胞自噬被广泛研究,但其发挥的保护作用仍存在争议,尤其是对于终末期自噬研究尚少。细胞焦亡作为一种新型程序性细胞死亡方式与心血管系统疾病密切相关。研究发现,抑制终末期自噬后,自噬溶酶体无法正常行使功能,细胞内自噬小体与相关蛋白累积,直接导致难以降解的NLRP3炎症小体增加与聚集,最终加重细胞炎症反应。由此,在氧化应激反应介导的冠状动脉粥样硬化疾病中,内皮细胞终末期自噬是否对细胞焦亡产生影响仍需要进一步的研究。MicroRNAs是由20-40个核苷酸组成的,具有高度保守序列的单链非编码RNA,调控众多生命过程的基因表达。其中,microRNA-103（... 

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【学位级别】：博士

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第一章 综述
    1 冠状动脉粥样硬化与氧化应激损伤
        1.1 冠状动脉粥样硬化疾病现状
        1.2 冠状动脉粥样硬化发病机制
            1.2.1 血管细胞功能障碍
            1.2.2 糖类与脂质代谢紊乱
            1.2.3 免疫炎症反应
        1.3 冠状动脉粥样硬化与氧化应激损伤
            1.3.1 线粒体氧化应激
            1.3.2 高血糖氧化应激
            1.3.3 氮氧化物氧化应激
            1.3.4 脂质氧化应激
    2 自噬
        2.1 自噬与心血管疾病
            2.1.1 自噬与心肌肥大
            2.1.2 自噬与心律失常
            2.1.3 自噬与心脏缺血再灌注损伤
            2.1.4 自噬与心力衰竭
            2.1.5 自噬与冠状动脉粥样硬化
            2.1.6 自噬与心脏衰老
        2.2 自噬与氧化应激反应
        2.3 自噬与细胞焦亡
    3 MicroRNA-103
        3.1 MicroRNA
        3.2 MicroRNA-103
            3.2.1 MicroRNA-103 与心血管疾病相关疾病
            3.2.2 MicroRNA-103 与其他代谢疾病
        3.3 MicroRNA-103 与细胞自噬
        3.4 前景与展望
    4 BNIP3
        4.1 BNIP3 与细胞自噬
        4.2 BNIP3 与细胞焦亡
        4.3 BNIP3 与心血管系统疾病
第二章 实验研究
    1 氧化应激损伤对HCAECs与细胞自噬的影响
        1.1 实验仪器
        1.2 实验试剂
        1.3 实验方法
            1.3.1 细胞培养、传代、冻存与复苏
            1.3.2 MTS检测细胞生存率
            1.3.3 细胞内ROS检测
            1.3.4 Western blot蛋白定量
        1.4 实验结果
            1.4.1 氧化应激反应对HCAECs的损伤作用
        1.5 讨论
    2 抑制终末期细胞自噬加剧氧化应激反应对HCAECs的损伤作用
        2.1 实验仪器
        2.2 实验试剂
        2.3 实验方法
            2.3.1 细胞自噬抑制剂刺激
            2.3.2 免疫荧光染色
            2.3.3 透射电子显微镜
        2.4 实验结果
            2.4.1 自噬对氧化应激内皮细胞的影响
            2.4.2 终末期自噬对氧化应激内皮细胞的影响
        2.5 讨论
    3 MicroRNA-103 对自噬的调控及氧化应激反应中HCAECs的影响
        3.1 实验仪器
        3.2 实验试剂
        3.3 实验方法
            3.3.1 慢病毒转染
            3.3.2 细胞总RNA提取
            3.3.3 miRNA逆转录
            3.3.4 实时定量PCR
        3.4 实验结果
            3.4.1 检测mi R-103 在氧化应激反应中的表达
            3.4.2 高表达miR-103 在内皮氧化应激中的作用
            3.4.3 低表达miR-103 在内皮氧化应激中的作用
        3.5 讨论
    4 MicroRNA-103 下游基因BNIP3 在内皮氧化应激损伤模型中作用
        4.1 实验仪器
        4.2 实验试剂
        4.3 实验方法
            4.3.1 siBNIP3 瞬时转染
        4.4 实验结果
            4.4.1 氧化应激与细胞自噬对BNIP3 表达水平的影响
            4.4.2 Micro RNA-103对BNIP3 的调控作用
            4.4.3 siBNIP3 在内皮细胞氧化应激模型中发挥的作用
        4.5 讨论
第三章 结论
创新点及研究意义
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Expression of miR-15/107 Family MicroRNAs in Human Tissues and Cultured Rat Brain Cells[J]. Wang-Xia Wang,Robert J.Danaher,Craig S.Miller,Joseph R.Berger,Vega G.Nubia,Bernard S.Wilfred,Janna H.Neltner,Christopher M.Norris,Peter T.Nelson.  Genomics,Proteomics ＆ Bioinformatics. 2014(01)



本文编号：3681236