星形胶质细胞GPR30参与神经保护及其机制研究

发布时间：2022-09-28 14:50

　　【背景和目的】中枢神经系统疾病发病率逐年上升,难以治愈,影响生命质量。就脑卒中而言,我国每年新发脑卒中人数200余万人,呈现高发病率、高致残率和高死亡率的特点。幸存者中75%以上都会因为不同程度的神经损伤而留下后遗症。此外,我国已经进入老龄化社会,经济和医疗水平的提升大大延长了寿命,但随之而来的是神经退行性疾病发病率呈上升趋势。这些疾病严重影响患者及其家庭生活质量,也给社会带来了沉重的经济负担。神经元损伤是脑卒中和神经退行性疾病常见的病理特征;随着神经损伤的加重,患者的病情也随之恶化,面临着永久残疾甚至是死亡的威胁。因此,探究神经损伤分子机制,寻找具有神经保护作用的药物靶点意义重大。雌激素是一种类固醇激素,除了在发育、生长、生殖功能方面的作用外,还具有神经保护作用。雌激素的作用由经典的核受体（ERα、ERβ）和膜性受体（GPR30、Gaq-ER、ER-X）所介导。G蛋白偶联受体30（G protein-coupled receptor 30,GPR30）是上世纪90年代发现的一种新型雌激素膜受体。与经典的雌激素核受体不同,GPR30能够介导雌激素的快速反应和转录调节。我们前期的研究发现... 

【文章页数】：135 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
    一、神经元受损的常见中枢神经系统疾病
        1.脑卒中
            1.1 .缺血性脑卒中
            1.2 .缺血性脑卒中的神经损伤机制
        2.中枢神经系统退行性疾病
            2.1 .阿尔茨海默病
            2.2 .帕金森病
            2.3 .肌萎缩侧索硬化症和亨廷顿舞蹈病
        3.神经保护药物
            3.1 .钙通道阻滞剂
            3.2 .Glu受体拮抗剂
            3.3 .神经营养生长因子
            3.4 .自由基清除剂
            3.5 .炎症反应抑制剂
    二、胶质细胞参与神经元损伤和保护
        1.小胶质细胞
            1.1 .小胶质细胞的生理作用
            1.2 .小胶质细胞的活化
            1.3 .小胶质细胞在神经损伤和神经保护中的作用
        2.星形胶质细胞
            2.1 .AS的生理作用
            2.2 .AS的活化
            2.3 .AS在神经损伤和神经保护中的作用
    三、自噬在CNS疾病和神经保护中的重要作用
        1.自噬的概况
        2.神经元自噬与神经保护
        3.AS自噬与神经保护
        4.自噬的信号调节通路
    四、GPR30 介导了雌激素的快速神经保护作用
        1.GPR30 在大脑中的分布
        2.GPR30 调控的信号通路
        3.GPR30 参与神经保护作用
第一部分 星形胶质细胞GPR30 参与神经保护作用
    引言
    1.材料
        1.1 .实验动物
        1.2 .主要化学试剂
        1.3 .试剂的配制
        1.4 .仪器和耗材
    2.方法
        2.1 .小鼠鼠尾DNA提取及基因鉴定
        2.2 .基因组测序
        2.3 .逆转录PCR(RT-PCR)
        2.4 .雌性小鼠卵巢切除术
        2.5 .实验分组和给药方法
        2.6 .MCAO和侧脑室再灌注
        2.7 .神经缺陷评分
        2.8 .TTC染色
        2.9 .尼氏染色
        2.10 .统计学分析
    3.结果
        3.1 .GPR30 转基因小鼠的构建和鉴定
        3.2 .星形胶质细胞GPR30 的激活对缺血再灌注损伤模型小鼠具有保护作用
    4.讨论
    小结
第二部分 星形胶质细胞GPR30 调控自噬参与神经保护作用
    引言
    1.材料
        1.1 .实验动物
        1.2 .主要试剂
        1.3 .试剂的配制
        1.4 .仪器和耗材
    2.方法
        2.1 .AS原代培养、纯化及鉴定
        2.2 .神经元原代培养
        2.3 .给药方案
        2.4 .ACM培养神经元
        2.5 .MTT实验
        2.6 .BrdU掺入实验
        2.7 .免疫荧光染色
        2.8 .Western blot
        2.9 .ELISA
        2.10 .MDC染色
        2.11 .统计学分析
    3.结果
        3.1 .GPR30 激动剂能够抑制Glu引起的AS反应性增生和活化
        3.2 .激活星形胶质细胞GPR30 能够抑制Glu诱导的AS炎症因子释放和ACM引起的神经元损伤
        3.3 .兴奋性毒性引起的AS反应性增生与自噬的抑制相关
        3.4 .激动GPR30 能够逆转Glu引起的AS自噬失衡,抑制AS活化
        3.5 .GPR30对AS自噬的调节不是通过AKT/mTOR信号通路
        3.6 .GPR30对AS自噬的调节不是通过ERK和 JNK信号通路
        3.7 .GPR30 通过p38 MAPK信号通路调控AS自噬
    4.讨论
    小结
结论
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]p38α MAPK pathway:A key factor in colorectal cancer therapy and chemoresistance[J]. Valentina Grossi,Alessia Peserico,Tugsan Tezil,Cristiano Simone.  World Journal of Gastroenterology. 2014(29)



本文编号：3681861