基于NNMT介导的表观遗传通路研究潜阳育阴颗粒对高血压肾损伤的影响及机制

发布时间：2022-10-10 17:34

　　一、研究目的高血压肾损伤机制复杂,现有治疗方案疗效有限,需要寻找新的治疗靶点及治疗方案。表观遗传学是高血压肾损伤的潜在病机,而潜阳育阴颗粒早期的临床及实验研究已证实有高血压肾损伤的保护作用。本课题研究目的是结合体内、体外模型,证实潜阳育阴颗粒可以通过表观遗传通路干预高血压肾损伤。二.研究方法1.体内基础实验--潜阳育阴颗粒通过NNMT介导的表观遗传通路改善SHR大鼠肾功能体外实验SHR大鼠分组为正常组、模型组、潜阳育阴颗粒低剂量组（2.1 g/kg/d）、高剂量组（8.4 g/kg/d）、缬沙坦组,血管紧张素Ⅱ造模2周,潜阳育阴颗粒治疗8周后,观察各组血、尿肌酐、尿微量白蛋白等肾功能指标的改变。应用Western-blot检测目的蛋白NNMT、H3K4甲基化、皮层蛋白乙酰化的表达。应用液质联用方法检测NNMT的活性指标MNA。2.体外基础实验（1）潜阳育阴颗粒抑制HEK293T细胞增殖。细胞实验分为正常组、模型组、潜阳育阴颗粒组及缬沙坦组。应用MTT方法观察不同时间（6 h、12 h、24 h、48 h、72 h）、不同浓度（10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,1 0-9... 

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【学位级别】：博士

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主要缩略语
前言
第一部分 理论研究
    1. 高血压肾损伤流行病学调查
    2. 高血压肾损伤组织以及血管改变
    3. 高血压肾损伤的机制研究
    4. 表观遗传学在高血压肾损伤中的研究
    5. NNMT与表观遗传学
    6. 高血压肾损伤的现代医学治疗
    7. 潜阳育阴颗粒对高血压肾损伤干预效应
第二部分 实验研究
    实验一 潜阳育阴颗粒通过NNMT介导表观遗传通路改善SHR大鼠肾损伤
        1. 实验材料
        2. 实验方法
            2.1 实验动物分组及给药
            2.2 大鼠标本采集
            2.3 Western-Blot法检测目标蛋白的表达
            2.4 LC-MS/MS测定大鼠血清中MNA浓度
            2.5 统计处理
        3. 实验结果
        4. 实验讨论
    实验二 潜阳育阴颗粒抑制HEK293T细胞增殖
        1. 实验材料
        2. 实验方法
            2.1 HEK293T细胞培养
            2.2 潜阳育阴颗粒培养液制备
            2.3 MTT细胞增殖检测实验
            2.4 Edu检测细胞增殖
            2.5 细胞周期测定
            2.6 统计处理
        3. 实验结果
        4. 实验讨论
    实验三 潜阳育阴颗粒通过表观遗传机制抑制HEK293T细胞增殖
        1. 实验材料
        2. 实验方法
            2.1 细胞蛋白提取
            2.2 Western-blot检测蛋白表达
            2.3 组蛋白提取
            2.4 免疫沉淀实验
            2.5 DNA提取
            2.6 DNA甲基化检测(ELISA)
            2.7 DNA甲基化检测(全基因组甲基化捕获测序)
            2.8 统计处理
        3. 实验结果
        4. 实验讨论
    实验四 NNMT影响表观遗传因素的体外实验
        1. 实验材料
        2. 实验方法
            2.1 慢病毒转染
            2.2 Real-time PCR检测NNMT表达
            2.3 Western-blot检测NNMT对表观遗传因素的作用
            2.4 统计处理
        3. 实验结果
        4. 实验讨论
    实验五 潜阳育阴颗粒对NNMT相关酶作用的体外实验
        1. 实验材料
        2. 实验方法
            2.1 细胞蛋白提取
            2.2 Western-blot
            2.3 Real-time PCR
            2.4 统计处理
        3. 实验结果
        4. 实验讨论
总结
参考文献
攻读博士学位期间取得的学术成果
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白赖氨酸甲基转移酶在糖尿病中的研究进展[J]. 包志伟,杨天竹,刘洋,王志刚.  中国医药导报. 2019(25)
[2]氧化应激及炎症对糖尿病肾病的影响[J]. 阎婷婷,赵英政,易宪文,徐光翠.  新乡医学院学报. 2019(08)
[3]促肾上腺激素、肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、皮质醇联合检测在高血压诊治中的临床应用研究[J]. 陈明星,张婉琳,张力球,黄远.  现代诊断与治疗. 2019(11)
[4]哺乳动物DNA甲基化修饰的动态调控机制[J]. 徐彦辉.  生命科学. 2017(10)
[5]慢性肾脏病研究进展[J]. 孟令栋,刘昌华,伍刚.  山西医药杂志. 2017(10)
[6]表观遗传学的提出者——沃丁顿[J]. 王华峰,孙瑞娴.  中学生物教学. 2017(06)
[7]潜阳育阴颗粒对SHR大鼠肾脏CTGF的影响[J]. 严士海,方祝元,王欣彤,张思奇,高峰,赵宁伟.  中华中医药学刊. 2017(02)
[8]《中国居民营养与慢性病状况报告（2015）》解读[J]. 顾景范.  营养学报. 2016(06)
[9]中医药治疗高血压肾损害机制研究进展[J]. 丁康,方祝元.  河南中医. 2016(11)
[10]高血压肾损害的临床病理特点及预后分析[J]. 郭雷,廖煜.  中国继续医学教育. 2016(08)

硕士论文
[1]基于二维斑点追踪成像技术评价潜阳育阴颗粒改善高血压左室功能早期损害的临床研究[D]. 陈怡.南京中医药大学 2017
[2]基于SPECT技术评价潜阳育阴颗粒改善高血压患者早期肾脏损害作用的研究[D]. 杜金玲.南京中医药大学 2017
[3]潜阳育阴颗粒对老年高血压患者血压变异性的影响[D]. 赵菁.南京中医药大学 2014
[4]潜阳育阴颗粒对高血压患者血压短时变异性的影响[D]. 马诺莎.南京中医药大学 2013
[5]潜阳育阴颗粒对高血压肾损害保护作用的研究[D]. 黄洋.南京中医药大学 2012



本文编号：3690059