不同样本中诺如病毒核酸检测方法的研究

发布时间：2022-10-20 10:52

　　诺如病毒（Norovirus,NoV）是引起全球急性胃肠炎的主要致病原,全年均可感染,主要感染儿童、老人和免疫力低下人群。诺如病毒可以食物和水源为载体导致人类患病,又被称作食源性病毒（Foodborne Virus）和水源性病毒（Waterborne Virus）。食源性病毒和水源性病毒主要通过粪-口途径传播,因其传染性强和传播速度快等特征,成为严重威胁人民群众的健康和生命安全,甚至影响社会稳定的重大因素。在食源性病毒和水源性病毒引起的食品安全事故或突发公共卫生事件中,诺如病毒占据了重要地位。由于食品种和水源的种类繁多,成分复杂,污染的病毒含量低,病毒分布不均一,且含有各种抑制病毒检测的因子等因素,使得食源性病毒和水源性病毒检测成为全球公共卫生面临的重点和难点。我国已建立了全国病毒性腹泻监测网络,具备了完整的引起腹泻病毒病相关病毒的检测技术体系。但我国建立食源性病毒和水源性病毒检测体系起步晚,体系还不完善。目前我国仅发布了食品（硬质表面食品、软质水果、生食蔬菜和贝类消化腺）中诺如病毒检测的食品安全国家标准（GB 4789.42-2016）,该标准是在欧盟的ISO/TS 15216-2的... 

【文章页数】：156 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    1. 诺如病毒
        1.1.介绍
        1.2. 基因和病毒结构
        1.3. GII4基因型诺如病毒
    2. 食源性病毒和水源性病毒
        2.1. 介绍
        2.2. 根据临床特点分类
        2.3. 食源性和水源性诺如病毒
        2.4. 诺如病毒的传播途径
    3. 不同样本中诺如病毒检测
        3.1. 临床样本、食品样本和水样本
        3.2. 诺如病毒检测策略
        3.3. 病毒分离
    3. 本文关注的科学问题
第一部分 腹泻样本中诺如病毒检测方法实验室评价与应用
    1. 实验材料
        1.1. 实验仪器
        1.2. 常用试剂
        1.3. 常用耗材
        1.4. 实验病毒株
    2. 实验方法
        2.1. 核酸提取
        2.2. 病毒检测方法实验室评价
        2.3. 诺如病毒检测方法在临床样本中的应用
    3. 实验结果
        3.1. 病毒Realtime RT-PCR检测方法评估
        3.2. 呼和浩特市诺如病毒分子流行情况
    4. 讨论
第二部分 水中诺如病毒检测方法建立与应用
    1. 实验材料
        1.1. 实验仪器
        1.2. 常用试剂
        1.3. 常用耗材
        1.4. 实验病毒株
        1.5. 常用溶剂的配置方法
    2. 实验方法
        2.1. 细胞复苏、传代培养和冻存
        2.2. MNV-1病毒培养和病毒滴定测定
        2.3. 核酸提取
        2.4. 病毒检测方法研究
        2.5. 瓶装或桶装水中病毒浓缩
        2.6. 大量水中病毒浓缩
        2.7. 高通量测序
    3. 结果
        3.1. MNV-1 Realtime RT-PCR标准曲线建立
        3.2. 瓶装和桶装水中病毒回收效果
        3.3. Biotroy半自动微生物采集系统回收MNV-1效果评价
        3.4. 饮用水中病毒回收
    4. 讨论
第三部分 食品中诺如病毒检测方法优化与评估
    1. 实验材料
        1.1. 实验仪器
        1.2. 常用试剂
        1.3. 常用耗材
        1.4. 病毒毒株
    2. 实验方法
        2.1. 模拟样本制备
        2.2. 病毒洗脱
        2.3. 二次浓缩
        2.4. 直接RNA提取
        2.5. 病毒检测
        2.6. ISC-RT-qPCR检测NoVs
    3. 实验结果
        3.1. 碳水化合物类食品中MNV-1回收效果
        3.2. 脂肪、蛋白类食品中MNV-1回收效果
        3.3. 食品中诺如病毒的回收效果
        3.4. 基于受体捕获诺如病毒检测草莓中诺如病毒
    4. 实验讨论
第四部分 贝类中病毒检测
    1. 实验材料
        1.1. 实验仪器
        1.2. 常用试剂
        1.3. 常用耗材
        1.4. 过程对照病毒MNV-1毒株制备
    2. 实验方法
        2.1. 贝类样本收集
        2.2. 贝类样本处理
        2.3. 贝类病毒的分离
        2.4. 高通量测序
    3. 实验结果
        3.1. 比较不同贝类中诺如病毒检测方法
        3.2. 贝类中病毒宏基因组分析结果
        3.3. 贝类中动物病毒基因组的分析结果
        3.4. 贝类中胃肠炎疾病相关的病毒基因组分析
    4. 讨论
全文结论
参考文献
个人简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Genetic Analysis of an Emerging GII.P2–GII.2 Norovirus Associated with a 2016 Outbreak of Acute Gastroenteritis in China[J]. Yuanyun Ao,Xiaolu Xie,Xiaogen Dong,Miao Jin,Zhaojun Duan.  Virologica Sinica. 2019(01)
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[5]一起疑似食源性诺如病毒胃肠炎事件病原分子生物学特征分析[J]. 王坤明,柯明月,施红,林英华.  中国食品卫生杂志. 2017(01)
[6]一起急性胃肠炎暴发疫情中诺如病毒的分子流行病学分析[J]. 张爽,荆红波,马红梅,李颖,靳淼.  实用预防医学. 2017(01)
[7]Clinical and epidemiological characteristics of norovirus gastroenteritis among hospitalized children in Lebanon[J]. Nada M Melhem,Hassan Zaraket,Khalil Kreidieh,Zeinab Ali,Moza Hammadi,Soha Ghanem,Farah Hajar,Amjad Haidar,Adlette Inati,Mariam Rajab,Hassan Fakhouri,Bassam Ghanem,Ghassan Baasiri,Ghassan Dbaibo.  World Journal of Gastroenterology. 2016(48)
[8]一起水源性诺如病毒引起的急性胃肠炎疫情的调查分析[J]. 汪金生,孙琴,曹孟婵,李贤相,史永林,金爱武.  安徽预防医学杂志. 2016(02)
[9]一起水源性诺如病毒感染性腹泻暴发疫情流行病学分析[J]. 韩会强,黄志刚,李国维,麻春雷,陈卫东,徐晓清.  医学动物防制. 2013(02)
[10]水源性诺如病毒[J]. 寇晓霞,吴清平,薛亮.  微生物学通报. 2012(04)

博士论文
[1]水体和贝类中食源性病毒分子检测研究及污染调查[D]. 寇晓霞.中国科学院研究生院（武汉病毒研究所） 2007



本文编号：3694353