巨噬细胞在皮肤伤口愈合过程中的调控作用及其机制研究

发布时间：2022-10-29 11:39

　　研究背景及意义:皮肤是机体最大的外部器官,极易遭受各类创伤。因此,皮肤的损伤修复一直是医学领域研究的热点与难点问题。皮肤创面的愈合是一个复杂的过程,包括了止血期、炎症期、增殖期和重塑期在内有序发生并且相继重叠的四个阶段。除了传统的皮片/皮瓣移植外,组织工程皮肤、生长因子、光治疗等新型手段也被应用于皮肤创伤的修复治疗。但由于治疗费用昂贵,材料储存条件苛刻,治疗效果因人而异,涉及医学伦理问题,存在潜在致癌风险等一系列缺陷以及患者与日俱增的需求,研究并开发新的皮肤缺损治疗方法具有重要的意义。巨噬细胞作为免疫系统的重要组成部分,不仅能够快速应答、抵御外界物质对机体的入侵,同时在多种组织器官的损伤后修复和再生过程中发挥关键的调控作用。巨噬细胞除了能够在外周神经、脑、肾脏、肌肉及骨骼损伤过程中分泌生长因子,激活信号通路并促进其修复过程,还通过发挥其吞噬作用,清除受损的坏死组织,防止损伤进一步扩大。缺乏巨噬细胞会直接干扰有尾两栖类脊椎动物附肢再生过程中芽基组织的生成,进而影响整个修复过程,使受损部位不能够再生出正常附肢。但在皮肤组织损伤修复过程中,巨噬细胞发挥的作用尚不明确。基于这些背景,本研究首先... 

【文章页数】：143 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
    1.1 皮肤组织的基本结构与损伤修复
        1.1.1 皮肤的生理和解剖学结构
        1.1.2 皮肤损伤修复过程
    1.2 巨噬细胞
        1.2.1 巨噬细胞的发育
        1.2.2 巨噬细胞的分类
        1.2.3 皮肤组织内的巨噬细胞
    1.3 巨噬细胞与组织修复及再生
        1.3.1 巨噬细胞与神经及血管再生
        1.3.2 巨噬细胞与骨损伤愈合
        1.3.3 巨噬细胞与脏器损伤修复
        1.3.4 巨噬细胞与肌肉损伤修复
        1.3.5 巨噬细胞与附肢再生
    1.4 皮肤损伤修复的治疗手段及优缺点
        1.4.1 移植及组织工程皮肤
        1.4.2 生长因子局部给药治疗
        1.4.3 细胞疗法
        1.4.4 其他治疗方式
    1.5 本实验的研究意义与技术路线
第二章 巨噬细胞在皮肤伤口愈合过程中的分布情况观察
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验主要仪器
        2.2.2 实验试剂及耗材
        2.2.3 实验主要溶液配制方法
        2.2.4 数据采集及分析软件
    2.3 实验方法
        2.3.1 皮肤缺损及皮肤组织样品的收集
        2.3.2 皮肤组织样品的石蜡包埋与切片
        2.3.3 免疫组织化学染色
        2.3.4 组织切片的H&E染色
        2.3.5 大体照片的拍摄及修复面积数据统计方式
    2.4 实验结果
        2.4.1 小鼠背部皮肤缺损后的愈合情况观察
        2.4.2 小鼠背部皮肤缺损的再上皮化过程观察
        2.4.3 小鼠皮肤修复过程中的巨噬细胞分布情况
    2.5 本章小结与讨论
第三章 巨噬细胞在皮肤伤口愈合过程中的作用及其机理
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验主要仪器
        3.2.2 实验试剂及耗材
        3.2.3 实验主要溶液配制方法
        3.2.4 数据采集及分析软件
    3.3 实验方法
        3.3.1 巨噬细胞剔除小鼠皮肤缺损模型的建立
        3.3.2 皮肤组织样品的收集
        3.3.3 皮肤组织样品的石蜡包埋与切片
        3.3.4 免疫组织化学染色(HRP显色)
        3.3.5 组织切片的H&E染色
        3.3.6 组织切片的Masson三色染色
        3.3.7 组织切片的天狼星红染色
        3.3.8 组织总RNA的提取及c DNA的合成
        3.3.9 引物设计及相关基因表达水平的RT-qPCR检测
        3.3.10 组织总蛋白的提取及处理
        3.3.11 ELISA法检测相关蛋白水平表达量
    3.4 实验结果
        3.4.1 剔除巨噬细胞组小鼠的皮肤缺损修复率统计结果
        3.4.2 剔除巨噬细胞组小鼠的再上皮化情况
        3.4.3 剔除巨噬细胞组小鼠的胶原沉积分析
        3.4.4 剔除巨噬细胞组小鼠的白细胞分布情况
        3.4.5 剔除巨噬细胞组小鼠修复过程中相关基因的表达分析
        3.4.6 剔除巨噬细胞组小鼠修复相关因子蛋白水平表达分析
    3.5 本章小结与讨论
第四章 注射 GM-CSF 对小鼠皮肤缺损修复的影响
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验主要仪器
        4.2.2 实验试剂及耗材
        4.2.3 实验溶液配制方法
        4.2.4 数据采集及分析软件
    4.3 实验方法
        4.3.1 巨噬细胞升高小鼠皮肤缺损模型的建立
        4.3.2 皮肤组织样品的收集
        4.3.3 皮肤组织样品的石蜡包埋与切片
        4.3.4 免疫组织化学染色
        4.3.5 组织切片的H&E染色
        4.3.6 组织切片的Masson染色
        4.3.7 组织总RNA的提取及c DNA的合成
        4.3.8 引物设计及相关基因表达水平的RT-qPCR检测
        4.3.9 外周血流式细胞样品的处理
    4.4 实验结果
        4.4.1 注射GM-CSF后小鼠外周血单核-巨噬细胞数目变化情况
        4.4.2 GM-CSF注射组小鼠皮肤缺损修复率统计
        4.4.3 GM-CSF注射组小鼠再上皮化情况
        4.4.4 GM-CSF注射组小鼠胶原沉积情况
        4.4.5 GM-CSF注射组小鼠白细胞分布情况
        4.4.6 GM-CSF注射组小鼠修复相关因子的基因水平表达分析
    4.5 本章小结与讨论
第五章 GM-CSF作用下小鼠修复过程中的蛋白组学研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料
        5.2.1 实验主要仪器
        5.2.2 实验试剂及耗材
        5.2.3 实验溶液配制方法
        5.2.4 数据采集及分析软件
    5.3 实验方法
        5.3.1 组织样品的收集
        5.3.2 组织总蛋白的提取
        5.3.3 蛋白BCA定量
        5.3.4 多肽段样品的准备
    5.4 实验结果
        5.4.1 GO注释及基因功能富集分析
        5.4.2 KEGG通路分析
        5.4.3 蛋白-蛋白互作分析
    5.5 本章小结与讨论
全文总结与展望
参考文献
附录
攻读博士学位期间取得科研成果
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]皮肤创面修复治疗的研究进展[J]. 孙桂芳,张晓芬,陈亚峰,奉典旭.  医学综述. 2015(18)
[2]大面积烧伤微粒皮移植应用脱细胞猪皮与异体皮作为覆盖物的对比研究[J]. 李武全,邱啸臣,刘军,魏迪南,陈宗华,刘文军,黄斌,付晋凤,夏照帆.  第二军医大学学报. 2012(11)
[3]Meek植皮法治疗特大面积烧伤[J]. 徐庆连,蔡晨,余又新,唐益忠,胡德林,刘晟,戚伟伟,时婕.  中国修复重建外科杂志. 2010(06)
[4]皮片和皮瓣移植在面部、颈部、手部及其他功能部位烧伤瘢痕修复中的应用[J]. 张会生.  中国组织工程研究与临床康复. 2007(25)



本文编号：3697621