联合应用g-PPT与EGFR-TKI通过抑制肺腺癌细胞内异常的脂质代谢逆转TKI耐药

发布时间：2023-01-29 20:24

　　背景:具有敏感表皮生长因子受体（EGFR）突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者应用EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗效果显著;然而在治疗后期不可避免地会发生耐药。以往大量研究证实脂质代谢重编程是癌症的标志并且与EGFR信号依赖的肿瘤生长作用密切相关。EGFR信号通路的激活可以增加单不饱和脂肪酸（MUFA）的合成和脂质代谢关键酶硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）的表达。但是EGFR-TKI耐药产生和脂质代谢之间的相关性仍有待确定。本研究旨在探讨EGFR-TKIs耐药产生过程中脂质代谢作用并分析其可能的机制,为EGFR-TKI耐药的治疗提供新的方向。方法:在本研究中,我们使用免疫组化（IHC）、Nile red（尼罗红）染色、油红O染色等方法,探讨了配对的TKI治疗前后组织标本及不同突变状态的NSCLC细胞系之间脂质代谢的差异及TKI处理时间差异背景下脂质代谢的程度异同。利用生物信息学分析耐药前后细胞内脂质代谢相关基因表达。使用油酸（OA）模拟细胞内高脂质代谢环境,并检测在高脂质代谢环境下TKIs（gefitinib和osimertinib）对敏感细胞系的效应变化。在耐药细... 

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
引言
材料和方法
    1.1 主要材料与试剂
    1.2 主要仪器
    1.3 细胞培养及观察
    1.4 油红O染色
    1.5 Nile red染色及定量
    1.6 免疫组织化学
    1.7 蛋白免疫印迹试验(Western blot)
    1.8 CCK8 检测试验
    1.9 免疫荧光(Immunofluorescence)
    1.10 流式细胞凋亡检测
    1.11 BODIPY493/503染色与定量
    1.12 Edu细胞增殖检测试验
    1.13 克隆形成试验
    1.14 临床标本来源与类型
    1.15 动物实验
    1.16 生物信息学与公共数据库分析
    1.17 统计检验方法
结果
    2.1 肿瘤细胞内SCD1 及脂滴蓄积情况随着TKI用药时间及耐药情况而改变
        2.1.1.长时间TKI治疗后肿瘤组织内脂滴蓄积、脂质代谢相关基因表达增高
        2.1.2.耐药细胞因长时间受TKI处理细胞内脂滴蓄积、脂质代谢相关基因表达增高
        2.1.3.不同的TKI处理时间,对于肿瘤细胞内脂质代谢的作用不同
    2.2 油酸减弱TKIs对敏感突变细胞的增殖抑制作用
    2.3 油酸减弱TKIs对敏感突变细胞的杀伤作用
    2.4 体内实验证实异常高油酸环境减弱gefitinib对敏感突变细胞的杀伤作用
    2.5 联合抑制异常脂质代谢与EGFR信号可以抑制耐药细胞的增殖作用
    2.6 联合g-PPT与 gefitinib通过抑制EGFR-ERK信号通路导致耐药细胞凋亡
    2.7 体内实验验证联合g-PPT与 gefitinib可以逆转TKI耐药
讨论
参考文献
综述:脂肪酸代谢异常在肿瘤治疗耐药中的研究现状
    参考文献
附录1 攻读学位期间发表论文目录
附录2 个人参与的课题与项目
附录3 (英文缩略词表)
致谢



本文编号：3732846