Tcf7l1在肝癌干细胞自我更新中的作用和分子机制研究
发布时间：2023-02-16 18:45
肝癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,我国肝癌发病率居全球之首,每年新发病例和死亡患者约占全球总数的一半。目前肝癌患者的5年生存率仅为15%,因此迫切需要加强肝癌的发病和演进机制研究,为肝癌的早期诊断、有效治疗靶点寻找、新治疗策略制定提供理论基础。肿瘤干细胞是肿瘤中一小群干细胞样的肿瘤细胞亚群,具有起始肿瘤、多向分化、放化疗抵抗、免疫耐受和高度的侵袭转移能力。肿瘤干细胞的存在被认为是肿瘤发生发展、复发转移的根源,因此破译肿瘤干细胞干性维持的分子机制,是实现肿瘤治疗突破的一个重要方向。近年来,科学家已利用CD133、EpCAM、CD13、CD90、CD24、Nanog等标志物分子证明了肝癌干细胞的存在,但肝癌干细胞复杂的自我更新调控网络仍不完全清晰,有待更深入地研究。Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育,以及肿瘤发生和演进中发挥重要作用。Tcf7l1作为Wnt信号通路下游的重要效应分子,不但参与胚胎干细胞和成体干细胞的自我更新调控,也参与多种恶性肿瘤的发生发展。Tcf7l1在我国高发肝癌中的表达和功能仍缺乏较为系统的研究。本课题组在前期肝癌干细胞的相关研究中发现,Tcf7l1是m...
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
英文缩略词
1 绪论
1.1 问题提出及研究意义
1.2 国内外研究现状
1.2.1 TCF/LEF蛋白的结构
1.2.2 TCF/LEF的 β-catenin依赖与非依赖的转录调控作用
1.2.3 Tcf7l1是胚胎发育过程中的重要分子
1.2.4 Tcf7l1在多种恶性肿瘤中促进肿瘤的生长
1.2.5 Tcf7l1与肿瘤干细胞相关
1.2.6 Tcf7l1对下游分子的转录调控
1.2.7 Tcf7l1表达的上游调控信号
1.3 主要研究内容
1.4 本文的创新点
2 Tcf7l1在肝癌中的表达及临床意义的研究
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验仪器和材料
2.2.2 组织蛋白的提取
2.2.3 BCA法测定蛋白浓度
2.2.4 蛋白免疫印迹实验
2.2.5 免疫组化与评分标准
2.3 结果
2.3.1 Tcf7l1在肝癌组织中低表达
2.3.2 Tcf7l1在肝癌组织中的表达与肝癌患者的不良预后相关
2.4 讨论
2.5 小结
3 Tcf7l1在肝癌干细胞自我更新中的作用及机制研究
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验仪器和材料
3.2.2 细胞培养和冻存
3.2.3 流式细胞分选
3.2.4 细胞蛋白的提取
3.2.5 细胞核/浆蛋白的提取
3.2.6 蛋白免疫印迹实验
3.2.7 免疫荧光
3.2.8 Tcf7l1干扰/过表达慢病毒载体构建、质粒抽提
3.2.9 慢病毒包装和细胞感染
3.2.10 荧光定量PCR
3.2.11 细胞增殖实验
3.2.12 克隆形成实验
3.2.13 细胞球形成实验
3.2.14 药物敏感性实验
3.2.15 动物成瘤实验
3.2.16 ChIP实验
3.2.17 荧光素酶报告实验
3.3 结果
3.3.1 Tcf7l1在肝癌干细胞中低表达
3.3.2 Tcf7l1过表达病毒效果验证
3.3.3 Tcf7l1过表达降低肝癌干细胞的自我更新能力,但不影响细胞的增殖
3.3.4 Tcf7l1过表达改变干性和分化相关基因的表达
3.3.5 Tcf7l1过表达增加肝癌干细胞对药物的敏感性
3.3.6 Tcf7l1过表达抑制肝癌干细胞的致瘤性
3.3.7 Tcf7l1 抑制Nanog基因的转录
3.3.8 干扰Tcf7l1慢病毒载体构建,干扰效率验证
3.3.9 Nanog参与Tcf7l1 调控的自我更新作用
3.3.10 构建β-catenin结合缺陷的Tcf7l1载体
3.3.11 Tcf7l1 调控的自我更新作用不依赖于β-catenin
3.4 讨论
3.5 小结
4 Tcf7l1在肝癌干细胞低表达的上游调控机制研究
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验仪器和材料
4.2.2 细胞因子或抑制剂处理肝癌细胞
4.2.3 纳米流体蛋白质组学免疫分析(NIA)
4.2.4 免疫共沉淀实验
4.2.5 β-catenin敲除细胞株
4.2.6 Tcf7l1蛋白降解实验
4.3 结果
4.3.1 IGF信号抑制Tcf7l1 的表达
4.3.2 Tcf7l1 参与IGF对肝癌干细胞的自我更新调控
4.3.3 IGF调控Tcf7l1 的蛋白降解
4.3.4 MEK/ERK信号通路参与Tcf7l1 的降解
4.3.5 利用CRISPR/Cas9 系统敲除β-catenin
4.3.6 IGF调控Tcf7l1 的降解不依赖于β-catenin
4.4 讨论
4.5 小结
5 主要结论和后续建议
5.1 主要结论
5.2 后续工作建议
参考文献
附录
A 作者在攻读学位期间发表的论文目录
B 作者在攻读学位期间参加的科研项目
C 学位论文数据集
致谢
本文编号：3744301
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
英文缩略词
1 绪论
1.1 问题提出及研究意义
1.2 国内外研究现状
1.2.1 TCF/LEF蛋白的结构
1.2.2 TCF/LEF的 β-catenin依赖与非依赖的转录调控作用
1.2.3 Tcf7l1是胚胎发育过程中的重要分子
1.2.4 Tcf7l1在多种恶性肿瘤中促进肿瘤的生长
1.2.5 Tcf7l1与肿瘤干细胞相关
1.2.6 Tcf7l1对下游分子的转录调控
1.2.7 Tcf7l1表达的上游调控信号
1.3 主要研究内容
1.4 本文的创新点
2 Tcf7l1在肝癌中的表达及临床意义的研究
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验仪器和材料
2.2.2 组织蛋白的提取
2.2.3 BCA法测定蛋白浓度
2.2.4 蛋白免疫印迹实验
2.2.5 免疫组化与评分标准
2.3 结果
2.3.1 Tcf7l1在肝癌组织中低表达
2.3.2 Tcf7l1在肝癌组织中的表达与肝癌患者的不良预后相关
2.4 讨论
2.5 小结
3 Tcf7l1在肝癌干细胞自我更新中的作用及机制研究
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验仪器和材料
3.2.2 细胞培养和冻存
3.2.3 流式细胞分选
3.2.4 细胞蛋白的提取
3.2.5 细胞核/浆蛋白的提取
3.2.6 蛋白免疫印迹实验
3.2.7 免疫荧光
3.2.8 Tcf7l1干扰/过表达慢病毒载体构建、质粒抽提
3.2.9 慢病毒包装和细胞感染
3.2.10 荧光定量PCR
3.2.11 细胞增殖实验
3.2.12 克隆形成实验
3.2.13 细胞球形成实验
3.2.14 药物敏感性实验
3.2.15 动物成瘤实验
3.2.16 ChIP实验
3.2.17 荧光素酶报告实验
3.3 结果
3.3.1 Tcf7l1在肝癌干细胞中低表达
3.3.2 Tcf7l1过表达病毒效果验证
3.3.3 Tcf7l1过表达降低肝癌干细胞的自我更新能力,但不影响细胞的增殖
3.3.4 Tcf7l1过表达改变干性和分化相关基因的表达
3.3.5 Tcf7l1过表达增加肝癌干细胞对药物的敏感性
3.3.6 Tcf7l1过表达抑制肝癌干细胞的致瘤性
3.3.7 Tcf7l1 抑制Nanog基因的转录
3.3.8 干扰Tcf7l1慢病毒载体构建,干扰效率验证
3.3.9 Nanog参与Tcf7l1 调控的自我更新作用
3.3.10 构建β-catenin结合缺陷的Tcf7l1载体
3.3.11 Tcf7l1 调控的自我更新作用不依赖于β-catenin
3.4 讨论
3.5 小结
4 Tcf7l1在肝癌干细胞低表达的上游调控机制研究
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验仪器和材料
4.2.2 细胞因子或抑制剂处理肝癌细胞
4.2.3 纳米流体蛋白质组学免疫分析(NIA)
4.2.4 免疫共沉淀实验
4.2.5 β-catenin敲除细胞株
4.2.6 Tcf7l1蛋白降解实验
4.3 结果
4.3.1 IGF信号抑制Tcf7l1 的表达
4.3.2 Tcf7l1 参与IGF对肝癌干细胞的自我更新调控
4.3.3 IGF调控Tcf7l1 的蛋白降解
4.3.4 MEK/ERK信号通路参与Tcf7l1 的降解
4.3.5 利用CRISPR/Cas9 系统敲除β-catenin
4.3.6 IGF调控Tcf7l1 的降解不依赖于β-catenin
4.4 讨论
4.5 小结
5 主要结论和后续建议
5.1 主要结论
5.2 后续工作建议
参考文献
附录
A 作者在攻读学位期间发表的论文目录
B 作者在攻读学位期间参加的科研项目
C 学位论文数据集
致谢
本文编号：3744301
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3744301.html
