凉血潜阳法对银屑

发布时间：2023-04-08 18:43

　　目的:临床研究验证凉血潜阳法治疗寻常型银屑病“血热证”临床疗效、安全性及对Wnt信号通路的影响。基础研究从DNA甲基化修饰WIF-1调控Wnt信号通路角度,研究表观遗传修饰Wnt通路在寻常型银屑病“血热证”中的作用,并进一步阐释凉血潜阳法作用机制。方法:第一部分采用随机对照试验设计,将80例患者随机分为凉血潜阳法辨证加减组和固定方组,分别予8周口服药物治疗,采用银屑病面积及严重度指数评分法(Psoriasis Area Severity Index,PASI)评价其临床疗效和安全性;同时以正常组织为对照,选取银屑病血热证、凉血潜阳治疗愈显和无效患者,采用免疫组化法检测WIF-1、STAT3、Wnt-5a、β-Catenin蛋白表达与分布。第二、第三部分为在体和离体实验相结合,在体实验以银屑病患者皮损和正常受试者皮肤为研究对象,运用亚硫酸盐扩增子测序、q PCR、Western blot、免疫组化技术检测WIF-1甲基化状态、相关基因和蛋白表达;离体实验以Ha Ca T细胞为研究对象,采用WIF-1 sh RNA转染和去甲基化方法,通过功能学研究评价WIF-1表达沉默对Wnt信号通路调控...

【文章页数】：142 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
引言
第一部分 凉血潜阳法治疗银屑病血热证临床疗效及Wnt信号通路表达研究
    1 临床资料与方法
        1.1 病例资料来源
        1.2 诊断标准
        1.3 入选标准
        1.4 干预方式
        1.5 随机方法
        1.6 分配隐藏
        1.7 观察时间
        1.8 观察指标
        1.9 疗效标准
        1.10 主要试剂
        1.11 数据录入及统计方法
        1.12 伦理审批
    2 结果
        2.1 年龄、病程及性别基线比较
        2.2 PASI评分、DLQI、SDS、SAS指数基线比较
        2.3 治疗前后PASI评分比较
        2.4 治疗前后DLQI指数评分比较
        2.5 治疗前后SDS指数评分比较
        2.6 治疗前后SAS指数评分比较
        2.7 疗效比较
        2.8 不良反应
        2.9 凉血潜阳法治疗寻常型银屑病血热证典型病例
        2.10 寻常型银屑病血热证患者皮损与正常皮肤WIF-1、STAT3、Wnt-5a、β-Catenin蛋白的差异表达
        2.11 IFN-γ、IL-17、IL-23、TNF-α、IL-8、TGF-β1 基因在寻常型银屑病血热证患者皮损组织与正常皮肤mRNA表达
    3 讨论
        3.1 中医学对寻常型银屑病血热证的认识
        3.2 寻常型银屑病血热证中医药临床研究现状
        3.3 凉血潜阳法临床疗效分析
第二部分 寻常型银屑病血热证WIF-1表达及其启动子甲基化研究
    1 在体实验
        1.1 资料与方法
            1.1.1 实验资料
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器设备
            1.1.4 实验方法
            1.1.5 指标检测
            1.1.6 统计方法
        1.2 结果
            1.2.1 EMBOSS Cpgplot和 Methprimer软件进行WIF-1启动子CpG岛预测
            1.2.2 亚硫酸盐扩增子测序检测银屑病血热证WIF-1启动子甲基化状态
            1.2.3 银屑病血热证WIF-1 m RNA、蛋白表达
    2 离体实验
        2.1 资料与方法
            2.1.1 实验资料
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器及设备
            2.1.4 实验方法
            2.1.5 统计方法
        2.2 结果
            2.2.1 Western Blot 检测 5-Aza-d C 药物作用浓度和 WIF-1 sh RNA 转染效率
            2.2.2 MSP检测WIF-1 基因调控区甲基化程度
            2.2.3 流式细胞仪检测HaCaT细胞凋亡率
            2.2.4 免疫荧光检测HaCaT细胞增殖
    3 讨论
        3.1 DNA甲基化与银屑病
        3.2 Wnt信号通路与银屑病
第三部分 凉血潜阳法调控WIF-1甲基化缓解银屑病血热证研究
    1 在体实验
        1.1 资料与方法
            1.1.1 实验资料
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器设备
            1.1.4 实验方法
            1.1.5 指标检测
            1.1.6 统计方法
        1.2 结果
            1.2.1 亚硫酸盐扩增子测序检测银屑病血热证WIF-1启动子甲基化状态
            1.2.2 银屑病血热证WIF-1 m RNA、蛋白表达
    2 离体实验
        2.1 资料与方法
            2.1.1 实验资料
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器及设备
            2.1.4 实验方法
            2.1.5 统计方法
        2.2 结果
            2.2.1 Western Blot检测5-Aza-d C药物作用浓度和WIF-1shRNA转染效率
            2.2.2 MSP检测WIF-1 基因调控区甲基化程度
            2.2.3 流式细胞仪检测HaCaT细胞凋亡率
            2.2.4 免疫荧光检测HaCaT细胞增殖
    3 讨论
        3.1 清热凉血法治疗银屑病的作用机制研究现状
            3.1.1 清热凉血法作用于免疫系统
            3.1.2 清热凉血法作用与KC增殖、凋亡相关
            3.1.3 清热凉血法作用与血液流变学相关
        3.2 凉血潜阳法通过调控WIF-1甲基化缓解银屑病血热证
创新点
结论
致谢
参考文献
附录一 :文献综述 A MOOSE-compliant meta-analysis on the immune status of patients suffering from psoriasis vulgaris of blood-stasis and blood-dryness syndrome
    References
附录二 :在校期间发表学术论文
附录三 :在校期间发表其他学术论文
附录四 :参加学术会议情况
附录五 :参编专著
附录六 :伦理审查批件



本文编号：3786281