高迁移率家族蛋白新成员HMGXB4对小鼠全身性炎症的影响及机制研究
发布时间：2023-04-12 05:33
研究背景与研究目的:败血症,又称脓毒症,是一种严重的可能危及生命的全身性炎症反应,其致病原因主要由感染或者组织损伤引起的全身性炎症应答综合征,可导致多器官组织损伤,甚至可因器官衰竭而导致死亡。败血症目前仍然是医院重症监护病房中最常见的死亡原因,败血症的预防与治疗依然是当前社会的巨大公共卫生负担。高迁移率(HMG-Box)蛋白家族是一类细胞核蛋白,具有独特的DNA结合域HMG-Box,与非B型DNA结构的亲和力高,通过弯曲,扭结和展开来扭曲DNA,具有维持染色质结构,DNA修复,转录调控,或者促进核糖体的生物合成等作用。然而,1999年研究者意外的发现HMGB1在全身性炎症反应中可以从细胞核中分泌到细胞外,并作为一种促炎细胞因子介导炎症反应。在败血症期间,阻止HMGB1的分泌或者用HMGB1特异性抗体靶向血液中HMGB1,可以显著提高致死性败血症的生存率。现有文献表明,高迁移率蛋白家族中的多个成员参与多种因素介导的炎症反应。HMGXB4是我们首次在哺乳动物中克隆的该家族的新成员,其是否参与炎症反应尚不清楚。本文旨在探讨Hmgxb4基因在全身性炎症诱导的败血症中的作用及其分子机制,从而为寻...
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩写一览表
第1章 引言
第2章 LPS刺激对小鼠腹腔巨噬细胞HMGXB4 表达的影响
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验小鼠
2.1.2 试剂耗材
2.1.3 试剂配制
2.1.4 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离
2.2.2 实时荧光定量PCR
2.2.3 Western blot免疫印迹检测
2.2.4 巨噬细胞的免疫荧光
2.3 统计学分析
2.4 实验结果
2.4.1 LPS刺激可诱导小鼠巨噬细胞HMGXB4 的表达
2.4.2 证实HMGXB4是一细胞核蛋白
2.5 讨论
2.5.1 LPS刺激引起的先天性固有免疫应答反应
2.5.2 HMGB1蛋白与先天性固有免疫应答
第3章 Hmgxb4基因敲除小鼠的构建及其特征
3.1 实验材料与方法
3.1.1 Hmgxb4基因缺失小鼠的构建
3.1.2 试剂耗材
3.1.3 试剂配制
3.1.4 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 小鼠基因型鉴定
3.2.2 小鼠体重监测
3.3 统计学分析
3.4 实验结果
3.4.1 Hmgxb4neo/neo敲除小鼠的鉴定及特征
3.4.2 Hmgxb4-CMV-Cre敲除小鼠的鉴定及特征
3.5 讨论
3.5.1 HMGBs蛋白家族基因缺失的表型
第4章 Hmgxb4 基因缺失改善LPS诱导的败血症死亡率和组织损伤
4.1 实验材料与方法
4.1.1 实验小鼠
4.1.2 试剂耗材
4.1.3 试剂配制
4.1.4 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 小鼠败血症模型制备及生存曲线
4.2.1.1 内毒素(LPS)诱导小鼠败血症模型的制备
4.2.1.2 多微生物(CLP)诱导小鼠败血症模型的制备
4.2.2 全身性炎症反应综合症(SIRS)的诱导
4.2.3 血清炎症因子的ELISA分析
4.2.4 组织包埋切片
4.2.5 苏木素-伊红(HE)染色
4.2.6 TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡
4.2.7 LGALS3(Mac2)免疫荧光鉴定肺组织巨噬细胞的浸润
4.2.8 肺组织通透性检测
4.3 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 Hmgxb4基因缺失延缓全身性炎症反应诱导的小鼠败血症死亡率
4.4.2 Hmgxb4 基因缺失减轻LPS诱导的多器官损伤
4.4.3 Hmgxb4 基因缺失改善LPS诱导的肺组织细胞凋亡,免疫细胞浸润与肺血管通透性
4.4.4 Hmgxb4基因缺失对经典的促炎细胞因子没有影响
4.5 讨论
4.5.1 全身性炎症反应综合症(SIRS)
4.5.2 血管内皮系统紊乱与多器官损伤
第5章 Hmgxb4 基因缺失通过抑制NOS2 的表达减少NO的产生改善LPS诱导的急性肺损伤
5.1 实验材料与方法
5.1.1 实验小鼠
5.1.2 实验细胞
5.1.3 试剂与耗材
5.1.4 试剂配制
5.1.5 主要仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 RNA测序
5.2.2 qRT-PCR
5.2.3 Western blot
5.2.4 NO测定
5.2.5 10T1/2细胞的培养
5.2.6 NOS2 enhancer双荧光素酶报告质粒构建
5.2.7 NOS2 enhancer双荧光素酶报告截短质粒构建
5.2.8 NOS2 enhancer双荧光素酶报告质粒的活性检测
5.2.9 肺组织通透性的检测
5.3 统计学分析
5.4 实验结果
5.4.1 HMGXB4 缺失显著改变LPS诱导的巨噬细胞基因表达谱
5.4.2 Nos2 基因是HMGXB4 调控的潜在靶基因
5.4.3 HMGXB4 过表达促进LPS介导的巨噬细胞NOS2 表达和NO产生
5.4.4 HMGXB4 反式激活Nos2 基因
5.4.5 HMGXB4 缺失明显减轻LPS诱导的肺组织损伤和NOS2 表达
5.5 讨论
5.5.1 一氧化氮合成酶
5.5.2 诱导型NOS(NOS2)产生的NO和血管内皮系统紊乱
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 工作总结示意图
6.3 进一步工作的方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
本文编号：3790534
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩写一览表
第1章 引言
第2章 LPS刺激对小鼠腹腔巨噬细胞HMGXB4 表达的影响
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验小鼠
2.1.2 试剂耗材
2.1.3 试剂配制
2.1.4 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离
2.2.2 实时荧光定量PCR
2.2.3 Western blot免疫印迹检测
2.2.4 巨噬细胞的免疫荧光
2.3 统计学分析
2.4 实验结果
2.4.1 LPS刺激可诱导小鼠巨噬细胞HMGXB4 的表达
2.4.2 证实HMGXB4是一细胞核蛋白
2.5 讨论
2.5.1 LPS刺激引起的先天性固有免疫应答反应
2.5.2 HMGB1蛋白与先天性固有免疫应答
第3章 Hmgxb4基因敲除小鼠的构建及其特征
3.1 实验材料与方法
3.1.1 Hmgxb4基因缺失小鼠的构建
3.1.2 试剂耗材
3.1.3 试剂配制
3.1.4 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 小鼠基因型鉴定
3.2.2 小鼠体重监测
3.3 统计学分析
3.4 实验结果
3.4.1 Hmgxb4neo/neo敲除小鼠的鉴定及特征
3.4.2 Hmgxb4-CMV-Cre敲除小鼠的鉴定及特征
3.5 讨论
3.5.1 HMGBs蛋白家族基因缺失的表型
第4章 Hmgxb4 基因缺失改善LPS诱导的败血症死亡率和组织损伤
4.1 实验材料与方法
4.1.1 实验小鼠
4.1.2 试剂耗材
4.1.3 试剂配制
4.1.4 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 小鼠败血症模型制备及生存曲线
4.2.1.1 内毒素(LPS)诱导小鼠败血症模型的制备
4.2.1.2 多微生物(CLP)诱导小鼠败血症模型的制备
4.2.2 全身性炎症反应综合症(SIRS)的诱导
4.2.3 血清炎症因子的ELISA分析
4.2.4 组织包埋切片
4.2.5 苏木素-伊红(HE)染色
4.2.6 TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡
4.2.7 LGALS3(Mac2)免疫荧光鉴定肺组织巨噬细胞的浸润
4.2.8 肺组织通透性检测
4.3 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 Hmgxb4基因缺失延缓全身性炎症反应诱导的小鼠败血症死亡率
4.4.2 Hmgxb4 基因缺失减轻LPS诱导的多器官损伤
4.4.3 Hmgxb4 基因缺失改善LPS诱导的肺组织细胞凋亡,免疫细胞浸润与肺血管通透性
4.4.4 Hmgxb4基因缺失对经典的促炎细胞因子没有影响
4.5 讨论
4.5.1 全身性炎症反应综合症(SIRS)
4.5.2 血管内皮系统紊乱与多器官损伤
第5章 Hmgxb4 基因缺失通过抑制NOS2 的表达减少NO的产生改善LPS诱导的急性肺损伤
5.1 实验材料与方法
5.1.1 实验小鼠
5.1.2 实验细胞
5.1.3 试剂与耗材
5.1.4 试剂配制
5.1.5 主要仪器设备
5.2 实验方法
5.2.1 RNA测序
5.2.2 qRT-PCR
5.2.3 Western blot
5.2.4 NO测定
5.2.5 10T1/2细胞的培养
5.2.6 NOS2 enhancer双荧光素酶报告质粒构建
5.2.7 NOS2 enhancer双荧光素酶报告截短质粒构建
5.2.8 NOS2 enhancer双荧光素酶报告质粒的活性检测
5.2.9 肺组织通透性的检测
5.3 统计学分析
5.4 实验结果
5.4.1 HMGXB4 缺失显著改变LPS诱导的巨噬细胞基因表达谱
5.4.2 Nos2 基因是HMGXB4 调控的潜在靶基因
5.4.3 HMGXB4 过表达促进LPS介导的巨噬细胞NOS2 表达和NO产生
5.4.4 HMGXB4 反式激活Nos2 基因
5.4.5 HMGXB4 缺失明显减轻LPS诱导的肺组织损伤和NOS2 表达
5.5 讨论
5.5.1 一氧化氮合成酶
5.5.2 诱导型NOS(NOS2)产生的NO和血管内皮系统紊乱
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 工作总结示意图
6.3 进一步工作的方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
本文编号：3790534
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3790534.html
