肿瘤细胞中ASPP2的表观遗传调控及其作用机制的研究

发布时间：2023-04-19 03:47

　　2015年世界卫生组织最新统计数据显示,172个国家的70岁以下人群中恶性肿瘤为第一或第二大死因的国家有91个,第三或第四大死因的国家有22个。而中国恶性肿瘤的发生率和死亡率均逐年升高,并已超过心脑血管疾病成为我国居民的第一大死因。因此,揭示恶性肿瘤发病分子机制将为有效治疗肿瘤提供关键的靶点,是提高人民健康水平的重中之重。表观遗传调控是指在不改变基因序列的前提下,影响基因表达的现象,具有可遗传性和可逆性。该机制广泛参与调控肿瘤的多种恶性表型,并与其发生、发展和耐药密切相关,因此备受关注。揭示表观遗传调控机制有望为肿瘤患者的早期检测、疾病监测及预后判断提供潜在的分子标志物。ASPP2(p53凋亡刺激蛋白2)属于ASPP家族成员,具有促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和生长等抑癌基因活性。研究表明,ASPP2在乳腺癌,肝癌等多种恶性肿瘤中表达下调,其下调水平与肿瘤的分期和不良预后相关,提示该基因可能为肿瘤治疗的重要靶点。肾癌和宫颈癌分别为泌尿系统和生殖系统重要肿瘤类型,晚期患者因缺乏有效治疗策略而预后极差。但目前,ASPP2在肾癌和宫颈癌中的表达情况,调控和作用机制均未见报道。因此,本文将对此进行...

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 课题背景
    1.2 肿瘤的特征性改变
        1.2.1 肿瘤细胞无限增殖的特性及调控
        1.2.2 肿瘤细胞死亡耐受的特性及调控
        1.2.3 肿瘤细胞转移特性及调控
        1.2.4 肿瘤微环境
    1.3 肿瘤中表观遗传研究进展
        1.3.1 表观遗传研究概况
        1.3.2 表观遗传调控与肿瘤
        1.3.3 表观遗传调控分子机制
    1.4 ASPP2研究进展
        1.4.1 ASPP2的发现
        1.4.2 ASPP2的生物学功能
        1.4.3 ASPP2与肿瘤
        1.4.4 ASPP2的表达调控机制
    1.5 课题研究的目的和意义
    1.6 主要研究内容
    1.7 技术路线
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 主要分析软件
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞总RNA提取
        2.2.3 质粒转染
        2.2.4 组织蛋白提取
        2.2.5 细胞总蛋白提取
        2.2.6 RNA反转录成cDNA
        2.2.7 MTT细胞活力检测
        2.2.8 细胞迁移
        2.2.9 细胞侵袭
        2.2.10 细胞划痕
        2.2.11 细胞免疫荧光染色实验
        2.2.12 Real-time PCR
        2.2.13 蛋白质免疫印迹(Western Blot)
        2.2.14 RNAi细胞转染
        2.2.15 慢病毒包装
        2.2.16 免疫组化
        2.2.17 生物信息学网站数据分析
        2.2.18 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation Assay,CHIP)
        2.2.19 荧光素酶报告基因检测
        2.2.20 质粒克隆
        2.2.21 质粒的提取
        2.2.22 裸鼠皮下成瘤实验
        2.2.23 统计学方法
第3章 ASPP2在肿瘤中表达特征研究
    3.1 引言
    3.2 ASPP2在肾癌中表达下调
        3.2.1 ASPP2在肾癌细胞系中表达下调
        3.2.2 ASPP2在肾癌组织中表达下调
        3.2.3 ASPP2表达下调与肾癌病理分期及预后相关
    3.3 ASPP2在宫颈癌中表达下调
        3.3.1 ASPP2在宫颈癌组织中表达下调
        3.3.2 ASPP2表达下调与宫颈癌预后相关
    3.4 本章小结
第4章 肿瘤中ASPP2表观调控分子机制研究
    4.1 引言
    4.2 ASPP2在肾癌中降低不依赖启动子甲基化
    4.3 HDAC1介导的组蛋白去乙酰化抑制ASPP2的表达
    4.4 HDAC1下调促进E2F1与ASPP2启动子结合
    4.5 MICRORNA(MIR-205)抑制ASPP2的表达
    4.6 本章小结
第5章 肿瘤中ASPP2生物学效应的研究
    5.1 引言
    5.2 体外细胞模型验证ASPP2促进细胞凋亡
    5.3 体外细胞模型验证ASPP2抑制肿瘤细胞的生长和迁移
    5.4 体内动物模型验证ASPP2促进凋亡抑制生长和迁移
    5.5 本章小结
结论
参考文献
附录
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果
致谢
个人简历



本文编号：3793652