CAFs源性POSTN通过PTK7影响口腔鳞癌生长和转移的研究
发布时间：2023-05-08 03:16
目的:课题组前期研究发现,蛋白酪氨酸激酶7(Protein tyrosine kinase 7,PTK7)在微球培养的口腔鳞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞中较贴壁细胞表达升高。在OSCC中,PTK7如何影响肿瘤细胞的生物学行为,以及和肿瘤间质的关系尚不清楚。本研究旨在探讨肿瘤间质中的癌相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)与PTK7的作用,探讨骨膜蛋白(Periostin,POSTN)和PTK7对OSCC生物学行为的调控效应和机制。方法:通过荧光定量PCR、免疫印迹和免疫组织化学实验,检测OSCC组织中PTK7的表达以及PTK7与临床病理特征及β-Catenin的相关性;通过裸鼠皮下成瘤及实验性肺转移实验,检测抑制PTK7对抑制皮下移植瘤和肺转移的作用。通过免疫共沉淀、蛋白质谱分析及免疫荧光实验检测PTK7和POSTN在OSCC中的相互作用。通过构建PTK7敲减和过表达的病毒载体,来改变PTK7的表达,用人重组POSTN蛋白处理OSCC细胞,通过细胞增殖、克隆形成、微球培养、细胞迁移和侵袭以及...
【文章页数】：131 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩写字母表
绪论
第一章 PTK7,Wnt/β-Catenin等相关蛋白在口腔鳞癌组织标本中的表达和临床意义
1.1 前言
1.2 材料与方法
1.2.1 主要仪器和设备
1.2.2 免疫印迹实验(Western blot)
1.2.3 组织石蜡包埋、切片
1.2.4 免疫组织化学实验
1.2.5 荧光定量PCR实验
1.2.6 OSCC病例和样本
1.2.7 统计学分析
1.3 实验结果
1.3.1 PTK7 在正常组织和OSCC组织中的表达情况
1.3.2 PTK7和CTNNB1 基因/β-Catenin蛋白在OSCC组织中表达的相关性
1.3.3 免疫组织化学实验检测OSCC组织中PTK7 蛋白的表达与临床病理特征的关系
1.4 小结
第二章 抑制PTK7 对动物体内抗瘤作用及肺转移率的影响
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 主要仪器和设备
2.2.2 人口腔鳞癌细胞系的复苏、传代与冻存
2.2.3 SD大鼠来源Rca-T细胞的复苏、传代
2.2.4 GFP对照慢病毒荧光感染Rca-T细胞
2.2.5 裸鼠皮下成瘤实验
2.2.6 癌细胞裸鼠尾静脉注射肺转移实验
2.2.7 H&E染色实验
2.2.8 免疫组织化学实验
2.2.9 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 抑制PTK7 对动物体内肿瘤体积及艾罗替尼抗瘤效果的影响
2.3.2 抑制PTK7 对动物体内β-Catenin蛋白表达的影响
2.3.3 抑制PTK7 对动物体内肺转移率的影响
2.4 小结
第三章 癌相关成纤维细胞分泌的POSTN与 PTK7 组织细胞来源观察
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 主要仪器主要仪器和设备
3.2.2 正常成纤维细胞(NFs)和癌相关成纤维细胞(CAFs)的原代培养
3.2.3 免疫共沉淀实验
3.2.4 蛋白银染实验
3.2.5 蛋白质谱分析
3.2.6 免疫荧光实验
3.2.7 Western blot实验
3.2.8 免疫组织化学实验
3.2.9 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 原代培养的NFs和 CAFs细胞
3.3.2 PTK7在OSCC中组织来源的验证
3.3.3 CAFs分泌的蛋白与PTK7 的关系
3.3.4 OSCC中,CAFs分泌的POSTN与 PTK7 的关系
3.4 小结
第四章 POSTN-PTK7 体外对口腔鳞癌细胞生物学行为影响的研究
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 主要仪器与设备
4.2.2 人口腔鳞癌细胞系的复苏、传代与冻存
4.2.3 荧光定量PCR实验
4.2.4 慢病毒感染实验
4.2.5 微球培养实验
4.2.6 细胞增殖实验(CCK8 法)
4.2.7 细胞平板克隆实验
4.2.8 细胞迁移实验(Transwell法)
4.2.9 细胞侵袭实验(Transwell法)
4.2.10 细胞划痕实验
4.2.11 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 对照、PTK7 敲减及过表达慢病毒感染肿瘤细胞
4.3.2 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系增殖的影响
4.3.3 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系克隆形成的影响
4.3.4 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系中干细胞标志物表达的影响
4.3.5 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系中微球形成的影响
4.3.6 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系迁移的影响
4.3.7 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系侵袭的影响
4.3.8 PTK7 对口腔鳞癌细胞系化疗药物敏感性的影响
4.4 小结
第五章 POSTN-PTK7 在动物体内对口腔鳞癌作用的研究
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 主要仪器和设备
5.2.2 慢病毒感染实验
5.2.3 裸鼠皮下成瘤实验
5.2.4 H&E染色实验
5.2.5 免疫组织化学实验
5.2.6 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 在裸鼠体内,POSTN-PTK7 对肿瘤生长的作用
5.3.2 裸鼠体内实验中,POSTN-PTK7对β-Catenin表达的影响
5.4 小结
第六章 口腔鳞癌中POSTN-PTK7对Wnt/β-Catenin通路的调控
6.1 前言
6.2 材料与方法
6.2.1 主要仪器与设备
6.2.2 Western blot实验
6.2.3 免疫荧光实验
6.2.4 统计学分析
6.3 实验结果
6.3.1 口腔鳞癌细胞系中POSTN-PTK7对β-Catenin蛋白表达的调控
6.3.2 口腔鳞癌细胞系中POSTN–PTK7对β-Catenin蛋白定位的调控
6.4 小结
讨论
全文总结
课题的主要创新点
口腔鳞癌治疗的展望
参考文献
致谢
攻读博士学位期间已发表或录用的论文
在读期间参与基金项目
本文编号：3811873
【文章页数】：131 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩写字母表
绪论
第一章 PTK7,Wnt/β-Catenin等相关蛋白在口腔鳞癌组织标本中的表达和临床意义
1.1 前言
1.2 材料与方法
1.2.1 主要仪器和设备
1.2.2 免疫印迹实验(Western blot)
1.2.3 组织石蜡包埋、切片
1.2.4 免疫组织化学实验
1.2.5 荧光定量PCR实验
1.2.6 OSCC病例和样本
1.2.7 统计学分析
1.3 实验结果
1.3.1 PTK7 在正常组织和OSCC组织中的表达情况
1.3.2 PTK7和CTNNB1 基因/β-Catenin蛋白在OSCC组织中表达的相关性
1.3.3 免疫组织化学实验检测OSCC组织中PTK7 蛋白的表达与临床病理特征的关系
1.4 小结
第二章 抑制PTK7 对动物体内抗瘤作用及肺转移率的影响
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 主要仪器和设备
2.2.2 人口腔鳞癌细胞系的复苏、传代与冻存
2.2.3 SD大鼠来源Rca-T细胞的复苏、传代
2.2.4 GFP对照慢病毒荧光感染Rca-T细胞
2.2.5 裸鼠皮下成瘤实验
2.2.6 癌细胞裸鼠尾静脉注射肺转移实验
2.2.7 H&E染色实验
2.2.8 免疫组织化学实验
2.2.9 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 抑制PTK7 对动物体内肿瘤体积及艾罗替尼抗瘤效果的影响
2.3.2 抑制PTK7 对动物体内β-Catenin蛋白表达的影响
2.3.3 抑制PTK7 对动物体内肺转移率的影响
2.4 小结
第三章 癌相关成纤维细胞分泌的POSTN与 PTK7 组织细胞来源观察
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 主要仪器主要仪器和设备
3.2.2 正常成纤维细胞(NFs)和癌相关成纤维细胞(CAFs)的原代培养
3.2.3 免疫共沉淀实验
3.2.4 蛋白银染实验
3.2.5 蛋白质谱分析
3.2.6 免疫荧光实验
3.2.7 Western blot实验
3.2.8 免疫组织化学实验
3.2.9 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 原代培养的NFs和 CAFs细胞
3.3.2 PTK7在OSCC中组织来源的验证
3.3.3 CAFs分泌的蛋白与PTK7 的关系
3.3.4 OSCC中,CAFs分泌的POSTN与 PTK7 的关系
3.4 小结
第四章 POSTN-PTK7 体外对口腔鳞癌细胞生物学行为影响的研究
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 主要仪器与设备
4.2.2 人口腔鳞癌细胞系的复苏、传代与冻存
4.2.3 荧光定量PCR实验
4.2.4 慢病毒感染实验
4.2.5 微球培养实验
4.2.6 细胞增殖实验(CCK8 法)
4.2.7 细胞平板克隆实验
4.2.8 细胞迁移实验(Transwell法)
4.2.9 细胞侵袭实验(Transwell法)
4.2.10 细胞划痕实验
4.2.11 统计学分析
4.3 实验结果
4.3.1 对照、PTK7 敲减及过表达慢病毒感染肿瘤细胞
4.3.2 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系增殖的影响
4.3.3 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系克隆形成的影响
4.3.4 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系中干细胞标志物表达的影响
4.3.5 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系中微球形成的影响
4.3.6 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系迁移的影响
4.3.7 POSTN-PTK7 对口腔鳞癌细胞系侵袭的影响
4.3.8 PTK7 对口腔鳞癌细胞系化疗药物敏感性的影响
4.4 小结
第五章 POSTN-PTK7 在动物体内对口腔鳞癌作用的研究
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 主要仪器和设备
5.2.2 慢病毒感染实验
5.2.3 裸鼠皮下成瘤实验
5.2.4 H&E染色实验
5.2.5 免疫组织化学实验
5.2.6 统计学分析
5.3 实验结果
5.3.1 在裸鼠体内,POSTN-PTK7 对肿瘤生长的作用
5.3.2 裸鼠体内实验中,POSTN-PTK7对β-Catenin表达的影响
5.4 小结
第六章 口腔鳞癌中POSTN-PTK7对Wnt/β-Catenin通路的调控
6.1 前言
6.2 材料与方法
6.2.1 主要仪器与设备
6.2.2 Western blot实验
6.2.3 免疫荧光实验
6.2.4 统计学分析
6.3 实验结果
6.3.1 口腔鳞癌细胞系中POSTN-PTK7对β-Catenin蛋白表达的调控
6.3.2 口腔鳞癌细胞系中POSTN–PTK7对β-Catenin蛋白定位的调控
6.4 小结
讨论
全文总结
课题的主要创新点
口腔鳞癌治疗的展望
参考文献
致谢
攻读博士学位期间已发表或录用的论文
在读期间参与基金项目
本文编号：3811873
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