肺腺癌脑膜转移相关脑脊液microRNA分子标志物的筛选及生物学功能的初步研究

发布时间：2023-08-25 20:14

　　目的:通过筛选、验证肺腺癌LM相关的CSF miRNAs,寻找具有LM诊断价值及监测疾病状态潜能的特异性CSF miRNA分子标志物,初步探究其生物学功能。方法:1.通过miRNA表达谱芯片检测肺腺癌LM患者、肺腺癌脑转移及非肿瘤性疾病患者的miRNA表达,同时检测肺腺癌LM患者初诊时及治疗后CSF样本miRNA表达谱变化,以筛选肺腺癌LM相关的CSF miRNAs。2.利用q RT-PCR方法在独立的肺腺癌LM患者、肺腺癌脑转移及非肿瘤性疾病患者群体的CSF样本中检测候选miRNAs表达变化是否与miRNAs芯片筛查结果一致。3.通过q RT-PCR方法检测及受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,在可疑存在LM的肺腺癌患者中检验候选CSF miRNA在LM诊断中的敏感性及特异性,并与传统的CSF细胞学检查及影像学检查方法进行比较,寻找具有诊断潜能的CSF miRNA分子标志物。4.通过q RT-PCR方法检测肺腺癌LM患者初诊时、治疗后、复发时及挽救治疗后CSF中候选miRNAs表达水平的变化,明确特异性CSF miRNAs是否具有作为LM疾病状态监测标志物的潜能。5.通过转染miR...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

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前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 引言
第2章 综述
第3章 材料与方法
    3.1 脑脊液样本来源及纳入标准
        3.1.1 研究设计流程
        3.1.2 肺腺癌LM患者脑脊液样本的来源
        3.1.3 肺腺癌LM患者脑脊液样本的获取
        3.1.4 其他疾病患者脑脊液样本的获取
        3.1.5 脑脊液样本的处理与保存
        3.1.6 肺腺癌LM患者临床资料的收集
    3.2 主要试剂和器材
        3.2.1 主要实验试剂
        3.2.2 主要实验仪器
    3.3 细胞系及细胞培养
    3.4 主要实验方法
        3.4.1 CSF标本RNA的提取
        3.4.2 CSF miRNA表达谱芯片检测
        3.4.3 细胞传代、冻存及复苏
        3.4.4 miRNAmimics及inhibitors的转染
        3.4.5 细胞miRNA及RNA提取与浓度测定
        3.4.6 Real-time qPCR检测miRNA表达
        3.4.7 Real-time qPCR检测mRNA表达
        3.4.8 MTT法检测细胞增殖
        3.4.9 划痕实验检测细胞迁移能力
        3.4.10 Transwell检测细胞侵袭能力
        3.4.11 miRNA靶基因的生物信息学分析
        3.4.12 Western blot方法检测蛋白表达
        3.4.13 统计学分析
第4章 结果
    4.1 肺腺癌LM患者与非LM患者的一般情况
    4.2 肺腺癌LM相关CSF miRNAs的筛选
        4.2.1 肺腺癌LM较非LM患者CSF中miRNAs表达谱差异分析
        4.2.2 肺腺癌LM患者治疗前后CSF中miRNAs表达谱差异分析
    4.3 肺腺癌LM相关CSF miRNAs的验证
    4.4 肺腺癌LM相关CSF miRNAs诊断LM效能的评价
    4.5 肺腺癌LM相关CSF miRNAs与LM病情变化之间的关系
    4.6 miR-7977 对肺腺癌细胞生物学行为的影响
        4.6.1 miR-7977 在肺腺癌细胞中的表达情况
        4.6.2 miR-7977 mimics及inhibitors转染肺腺癌细胞
        4.6.3 miR-7977 对肺腺癌细胞增殖能力的影响
        4.6.4 miR-7977 对肺腺癌细胞迁移能力的影响
        4.6.5 miR-7977 对肺腺癌细胞侵袭能力的影响
    4.7 miR-7977 下游靶基因的预测分析
    4.8 miR-7977 对肺腺癌细胞PCBP1表达的影响
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3843242