PolyI:C复合物在体内外对非小细胞肺癌的抗肿瘤作用及其机制

发布时间：2023-09-28 22:58

　　非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是癌症患者死亡的主要原因。现认识到免疫系统具有通过其先天和适应性免疫应答破坏癌细胞并抑制癌细胞生长的潜力,改变了 NSCLC治疗的前景。Toll样受体(toll like receptor,TLR),作为先天免疫中最重要的跨膜受体,参与诱导和调节免疫反应。TLRs存在于各种肿瘤细胞中,与癌症的发生和发展密切相关。一些类型的TLRs检测肿瘤抗原并引起原发性抗肿瘤免疫反应。TLRs可通过消除肿瘤抗原进一步阻止炎症性肿瘤微环境的形成。TLR3位于内体膜中,利用MyD88非依赖途径,募集TRIF激活激活蛋白1(active protain 1,AP-1),NF-κB 和干扰素调节因子(interferonregulatoryfactor,IRF)。作为 TLR3 的配体,PolyI:C 激活 TLR3,PKR,维甲酸诱导基因 1(retinoic acid-inducible gene-I,RIG-1)和黑色素瘤分化相关蛋白 5(melanoma differentiation-associated protein...

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
第一部分 PolyI:C复合物合物LL/2及A549缰胞株的抑制作用
    1. 材料与方法
        1.1 实验材料与实验仪器
            1.1.1 NSCLC细胞株
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验材料
            1.1.4 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 细胞培养
                1.2.1.1 细胞复苏
                1.2.1.2 细胞传代
                1.2.1.3 细胞冻存
            1.2.2 RT-OPCR
                1.2.2.1 RNA提取
                1.2.2.2 提取RNA中的DNA
                1.2.2.3 RNA琼脂糖凝胶电泳
                1.2.2.4 RNA反转录为cDNA
                1.2.2.5 PCR检测
                1.2.2.6 RT-PCR检测的引物设计
            1.2.3 细胞增殖-毒性实验
            1.2.4 单层细胞增殖实验
            1.2.5 细胞凋亡
            1.2.6 细胞周期
            1.2.7 划痕实验
            1.2.8 transwell迁移实验
            1.2.9 transwell侵袭实验
            1.2.10 统计学处理方法
    2. 结果
        2.1 PolyI:C复合物影响NSCLC细胞的TLR3 mRNA的表达
        2.2 PolyI:C复合物抑制NSCLC细胞增殖
            2.2.1 PolyI:C复合物对NSCLC细胞的增殖-毒性的影响
            2.2.2 PolyI:C复合物对NSCLC细胞的单层增殖的影响
            2.2.3 PolyI:C复合物促进NSCLC细胞凋亡
            2.2 4 PolyI:C复合物对NSCLC细胞周期的影响
        2.3 PolyI:C复合物对NSCLC细胞运动的影响
            2.3.1 PolyI:C复合物减弱NSCLC细胞平行运动能力
            2.3.2 PolyI:C复合物减弱NSCLC细胞迁移能力及侵袭能力
    3. 讨论
    4. 结论
第二部分 PolyI:C复合物对小鼠NSCLC移植瘤的抑制作用
    1. 材料与方法
        1.1 实验材料与实验仪器
            1.1.1 细胞株
            1.1.2 实验动物
            1.1.3 实验试剂
            1.1.4 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 动物模型的建立
            1.2.2 PolyI:C复合物对肺癌移植瘤的抑瘤作用
            1.2.3 肺癌移植瘤小鼠生存率
            1.2.4 TUNEL法分析移植瘤凋亡
            1.2.5 H&E染色分析各脏器转移
            1.2.6 统计学处理方法
    2. 结果
        2.1 PolyI:C复合物抑制肺癌移植瘤肿瘤体积
        2.2 PolyI:C复合物减少肺癌移植瘤肿瘤质量
        2.3 PolyI:C复合物对移植瘤小鼠体重的影响
        2.4 PolyI:C复合物对LL/2移植瘤小鼠生存率的影响
        2.5 PolyI:C复合物对肿瘤组织中凋亡与坏死的影响
        2.6 PolyI:C复合物抑制各脏器转移
    3. 讨论
    4. 结论
第三部分 PolyI:C复合物在体内外抑制非小细胞肺癌的作用机制
    1. 材料与方法
        1.1 实验材料与实验仪器
            1.1.1 NSCLC细胞株
            1.1.2 实验动物
            1.1.3 实验试剂
            1.1.4 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 多重免疫分析法检测血清中细胞因子的含量
            1.2.2 动物肺癌模型的建立
            1.2.3 流式细胞术检测脾脏DC细胞及其表面抗原表达
            1.2.4 免疫印迹实验
                1.2.4.1 溶液配制
                1.2.4.2 蛋白提取
                1.2.4.3 BCA法蛋白定量
                1.2.4.4 制备上样蛋白
                1.2.4.5 免疫印迹实验
            1.2.5 免疫组织化学染色
            1.2.6 统计学处理方法
    2. 结果
        2.1 PolyI:C复合物对正常小鼠炎性细胞因子的影响
        2.2 PolyI:C复合物对LL/2荷瘤小鼠脾脏组织DC细胞群CD80、CD86的影响
        2.3 PolyI:C复合物干预对NSCLC细胞PI3K/Akt/p53通道蛋白的影响
        2.4 PolyI:C复合物干预LL/2肺癌移植瘤PI3K/Akt/p53通道蛋白
    3. 讨论
    4. 结论
总结及展望
参考文献
致谢
综述
    参考文献
附录 攻读学位期间发表的论文



本文编号：3848782