SIVA在plumbagin抑制肝细胞癌细胞增殖、促进细胞凋亡中的作用及其机制研究

发布时间：2023-10-27 18:09

　　目的:研究plumbagin(PL)对肝细胞癌(HCC)细胞的抑制作用;探讨SIVA在PL抑制HCC细胞增殖、促进细胞凋亡中的作用及其机制;分析SIVA在HCC中的表达及其与疾病进展的关系。方法:1.采用CCK-8、Ed U、平板克隆形成实验检测PL对HCC细胞增殖的影响;PI单染检测PL对HCC细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双染、Western-bolt法检测PL对HCC细胞凋亡的影响;划痕实验检测PL对HCC细胞迁移的影响;Transwell实验检测PL对HCC细胞侵袭的影响。2.利用RNA-seq技术检测PL处理后HCC细胞全转录组的改变情况,运用Western Blot法检测目的基因在蛋白水平有无相应改变,筛选出目的基因(SIVA);过表达或干扰SIVA后,通过Western-blot验证其对下游通路m TOR的影响;过表达SIVA观察其在PL抑制HCC细胞增殖、调亡中的作用;建立裸鼠皮下肿瘤模型,PL腹腔注射给药,通过监测移植瘤的生长情况、免疫组化分析PL在裸鼠体内的作用。3.通过Western-blot、RT-PCR、IHC比较HCC细胞株与正常肝细胞,...

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
绪论
第一章 Plumbagin对人肝细胞癌细胞作用的研究
    引言
    材料与方法
        1.主要试剂与材料
        2.主要仪器及设备
        3.实验方法
            3.1 人肝细胞癌细胞株的培养
            3.2 细胞增殖-毒性检测(CCK-8)细胞活力
            3.3 EdU掺入实验检测细胞增殖
            3.4.平板克隆形成实验
            3.5 PI单染检测细胞周期
            3.6 AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡
            3.7 Western Blot
            3.8 伤口愈合实验(划痕实验)
            3.9 Transwell侵袭实验
            3.10 统计方法
    结果
        1.PL对人肝细胞癌细胞株增殖的影响
        2.PL对人肝细胞癌细胞株细胞周期的影响
        3.PL对人肝细胞癌细胞株凋亡的影响
        4.PL对人肝细胞癌细胞株的侵袭和迁移的影响
    讨论
第二章 SIVA在 plumbagin抑制肝细胞癌细胞凋亡、促进细胞凋亡中的作用及其机制研究
    引言
    材料与方法
        1.主要试剂与材料
        2.主要仪器及设备
        3.实验方法
            3.1 细胞培养
            3.2 RNA-Seq
            3.3 Western Blot
            3.4 SIVA干扰
            3.5 SIVA过表达质粒的瞬时转染
            3.6 SIVA过表达质粒的稳定转染
            3.7 细胞凋亡的检测
            3.8平板克隆形成实验
            3.9 细胞活力的检测
            3.10 裸鼠皮下异种移植瘤的构建
            3.11 免疫组化
            3.12 统计方法
    结果
        1.PL对 HCC细胞株转录本的影响
        2.PL通过下调SIVA的表达抑制m TOR信号通路
        3.SIVA/mTOR信号通路参与PL抑制HCC细胞株增殖的过程
        4.SIVA参与PL诱导HCC细胞株凋亡的过程
        5.PL对裸鼠皮下移植瘤的影响
    讨论
第三章 SIVA在肝癌中的表达及其与疾病进展关系的研究
    引言
    材料与方法
        1.主要试剂与材料
        2.主要仪器及设备
        3.实验方法
            3.1 细胞培养
            3.2 Western blot
            3.3 RT-PCR
            3.4 组织芯片
            3.5 生存曲线绘制
            3.6 统计方法
    结果
        1.SIVA在人HCC细胞株表达
        2.SIVA在人HCC肝癌组织中的表达
        3.SIVA在 TMA中的分析
        4.SIVA与 HCC进展的关系
    讨论
全文小结与展望
参考文献
攻读博士学位期间已发表或录用的论文
致谢



本文编号：3857015