LncRNA H19通过靶向调控Cyclin D1促进血管重塑的机制研究

发布时间：2023-10-29 18:36

　　目的:随着我国人口老龄化的到来以及人民生活水平的提高,心血管疾病的发生率正在逐年提高,而这些疾病多由血管重塑引起。因血管重塑引起的与血管狭窄相关的缺血性血管疾病正严重威胁着人类健康。目前认为,血管中膜平滑肌细胞迁移和增殖是导致远期血管重塑及动脉粥样硬化改变的重要因素。近年来对非编码RNA在血管重塑领域的研究越来越多,我们之前的工作已经证明LncRNAH19可以促进血管平滑肌细胞的增殖,2013年有研究发现LncRNAH19是let-7a的ceRNA。而Cyclin D1是通过调节细胞周期介导细胞增殖的重要蛋白。本研究主要探讨在血管平滑肌细胞中是否存在LncRNAH19/let-7a/Cyclin D1这条调控血管重塑的通路。研究方法:本研究建立大鼠颈动脉血管重塑模型通过免疫组化验证Cyclin D1在血管新生内膜中的表达情况。通过GEO数据库分析let-7a在血管重塑中的表达情况。为了研究let-7a在血管平滑肌细胞中的功能,本研究上调了 let-7a在血管平滑肌细胞中的表达,通过CCK-8实验检查细胞增殖能力的改变,通过细胞流式判断细胞周期的分布情况,通过qRT-PCR和Wester...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分：let-7a抑制血管平滑肌细胞增殖的机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 细胞选择
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 实验动物分组
            2.2.2 主要试剂配制
            2.2.3 大鼠颈动脉球囊损伤模型及假手术模型的建立
            2.2.4 大鼠颈动脉取材
            2.2.5 标本石蜡切片的制作
            2.2.6 组织切片脱蜡
            2.2.7 弹力纤维染色
            2.2.8 免疫组化Cyclin D1染色
            2.2.9 细胞培养
            2.2.10 细胞感染
            2.2.11 RNA提取
            2.2.12 qRt-PCR实验
            2.2.13 Western Blot实验
            2.2.14 双荧光素酶报告实验
            2.2.15 CCK-8实验
            2.2.16 细胞周期检测
            2.2.17 统计学分析
    3 结果
        3.1 造模结果
        3.2 颈动脉球囊损伤后的形态学改变
        3.3 Cyclin D1在新生内膜中的表达
        3.4 GEO数据库分析let-7a在血管再狭窄患者中的表达
        3.5 let-7a慢病毒在血管平滑肌细胞中的感染效率
        3.6 过表达let-7a对血管平滑肌细胞增殖的影响
        3.7 过表达let-7a对血管平滑肌细胞的细胞周期的影响
        3.8 let-7a对Cyclin D1表达的影响
        3.9 let-7a与Cyclin D1 mRNA3'-UTR区的靶向结合作用
    4 讨论
第二部分：LncRNA H19促进血管平滑肌细胞增殖的机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞选择
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 主要试剂的配制
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 细胞转染
            2.2.4 细胞感染
            2.2.5 RNA提取
            2.2.6 qRT-PCR实验
            2.2.7 Western Blot实验
            2.2.8 CCK-8实验
            2.2.9 细胞周期检测
            2.2.10 双荧光素酶报告实验
            2.2.11 RNA pull-down实验
            2.2.12 统计学分析
    3 结果
        3.1 LncRNA H19与let-7a结合的生物信息学预测
        3.2 LncRNA H19质粒在血管平滑肌细胞中的感染效率
        3.3 过表达LncRNA H19对血管平滑肌细胞增殖的影响
        3.4 过表达LncRNA H19对血管平滑肌细胞的细胞周期的影响
        3.5 过表达LncRNA H19对Cyclin D1表达的影响
        3.6 LncRNA H19与let-7a之间的相互影响
        3.7 LncRNA H19与let-7a的靶向结合作用
    4 讨论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述 非编码RNA在血管重塑中的作用
    参考文献
攻读学位期间取得的科研成果
致谢
个人简历



本文编号：3858639