BAG3通过p53依赖及非依赖方式降低肿瘤细胞对代谢应激的适应性反应

发布时间：2023-11-24 21:23

　　目的:葡萄糖是细胞增殖、分化过程中能量代谢最重要的能量底物,是细胞内主要的碳源。在实体恶性肿瘤的发生和发展过程中,由于代谢重编程导致对葡萄糖消耗过高,加之实体肿瘤细胞不受控的增殖引起的肿瘤内部的血供不足,持续或间断的葡萄糖缺乏是实体肿瘤的一个特征。因此实体肿瘤如何适应营养缺乏,尤其是葡萄糖缺乏,从而在代谢应激的环境下维持自身正常的生存及增殖仍是尚未解决的问题。BAG3是Bcl-2相关抗凋亡(Bcl-2 associated athanogene)BAG家族的重要成员,参与许多生命活动的调节,与肿瘤细胞的增殖、迁移侵袭、自噬以及氧化应激等密切相关。最近发现BAG3可以直接与己糖激酶HK2(Hexokinase 2,HK2)结合,促进胰腺癌细胞糖酵解,提示BAG3可能参与肿瘤细胞的代谢调节过程。但是BAG3在因葡萄糖缺乏造成的代谢应激条件下发挥何种作用尚不明确。p53作为一个肿瘤抑制因子,最近有报道证实其参与物质代谢及代谢调节来维持细胞的稳态,在抑制癌症的发生与发展的调节中发挥着关键作用。p53基因突变或缺失打破了肿瘤细胞有氧呼吸和糖酵解之间的平衡,促进肿瘤细胞的糖酵解,降低氧化磷酸化,从...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
    1.1 p53 在代谢应激中的作用
    1.2 BAG3
    1.3 立题背景
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系及实验动物
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要抗体
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 慢病毒感染构建细胞系
        2.2.2 总RNA提取
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 实时荧光定量PCR
        2.2.5 染色质免疫沉淀技术(CHIP)
        2.2.6 Click-iT?Nascent RNA Capture Kit检测新生mRNA
        2.2.7 蛋白质免疫印迹(Western blot)
        2.2.8 细胞计数检测细胞存活实验
        2.2.9 流式细胞术检测细胞周期
        2.2.10 流式细胞术检测细胞凋亡
        2.2.11 PCR Array
        2.2.12 HPG掺入检测新生蛋白合成
        2.2.13 Actinomycin D法检测mRNA的半衰期
        2.2.14 Duolink检测蛋白直接相互作用
        2.2.15 双荧光素酶报告基因系统
        2.2.16 RNA免疫沉淀
        2.2.17 Biotin Pull Down
    2.3 统计分析
3 结果
    3.1 葡萄糖缺乏抑制BAG3 的表达
    3.2 BAG3 高表达降低肿瘤细胞对葡萄糖缺乏的适应性
    3.3 BAG3与p53 直接相互作用并促进calpain依赖的p53 降解
    3.4 GADD45a、p21、SESN2 诱导表达提高葡萄糖缺乏条件下肿瘤细胞的适应性
    3.5 BAG3 在葡萄糖缺乏条件下抑制GADD45a、p21和SESN2 的诱导表达
    3.6 BAG3 通过67-76aa和261-294aa与 SESN2 mRNA的3'UTR直接相互作用
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3866622