健脾清肠方调控NF-κB/HIF-1α信号通路治疗溃疡性结肠炎的机制研究

发布时间：2024-01-20 16:57

　　目的:探讨健脾清肠方治疗溃疡性结肠炎的潜在药效机制,丰富中医药在溃疡性结肠炎治疗中的科学内涵,为其临床推广应用提供新的理论依据。方法:1.构建DSS诱导的结肠炎小鼠模型,给予健脾清肠方干预治疗,采用疾病活动指数评分表每日评估小鼠的结肠炎严重程度,观察健脾清肠方对小鼠体重变化、结肠长度变化的影响,苏木素-伊红染色、免疫组织化学法评估健脾清肠方对小鼠结肠组织的病理学改变,ELISA法检测健脾清肠方对小鼠血清中TNF-α、IL-1β含量的影响,RT-PCR法检测健脾清肠方对小鼠结肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-10基因表达水平的影响;2.运用系统药理学的方法,通过相关数据库对中草药所含活性化合物成分进行筛选、相应靶点匹配、与疾病效应靶点之间的网络构建分析、对潜在药效靶点的富集分析,对健脾清肠方在溃疡性结肠炎治疗中的潜在药效机制进行系统性的探索;3.提取与分离小鼠骨髓来源巨噬细胞,同时为更好模拟机体生理环境,构建Caco2细胞与小鼠骨髓来源巨噬细胞的共培养试验,给予TNF-α刺激构建细胞炎症模型,并分别给予健脾清肠方含药血清及阳性对照药吡咯烷二硫基甲酸酯、雷帕霉素干预治疗,采用RT-PC...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
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中文摘要
ABSTRACT
引言
实验研究
    实验一 健脾清肠方显著改善DSS诱导结肠炎模型小鼠的炎症反应
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 实验药品制备
            2.2 实验分组、造模及给药
            2.3 实验样本采集
            2.4 酶联免疫吸附试验
            2.5 苏木素-伊红染色
            2.6 免疫组化
            2.7 逆转录聚合酶链反应
            2.8 统计分析
        3 实验结果
            3.1 小鼠的一般情况
            3.2 小鼠给药期间体重变化
            3.3 小鼠给药期间结肠形态变化
            3.4 小鼠给药期间结肠组织病理学变化
            3.5 小鼠给药期间结肠免疫组织化学变化
            3.6 小鼠给药期间血清TNF-α、IL-1β表达情况
            3.7 小鼠给药期间结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10 基因表达情况
        4 实验小结
    实验二 基于系统药理学探索健脾清肠方治疗UC的潜在药效机制
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 药物活性成分筛选及化合物-靶点网络构建
            2.2 疾病相关靶点收集及蛋白质相互作用网络构建
            2.3 药效靶点筛查及富集分析
        3 实验结果
            3.1 健脾清肠方的药物活性成分检索及筛选
            3.2 健脾清肠方的药物活性成分相关靶点筛选及化合物-靶点网络构建
            3.3 健脾清肠方的药物-化合物-靶点网络构建
            3.4 UC疾病相关靶点收集
            3.5 健脾清肠方治疗UC蛋白质相互作用网络构建及潜在药效靶点筛选
            3.6 基于Omics Bean平台对健脾清肠方治疗UC潜在药效靶点的富集分析
            3.7 基于Cytoscape软件对健脾清肠方治疗UC潜在药效靶点的富集分析
        4 实验小结
    实验三 健脾清肠方调控TNF-α诱导炎症模型细胞中NF-κB/HIF-1α信号通路的机制研究
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 实验药品制备
            2.2 细胞培养
            2.3 Caco2细胞与骨髓来源巨噬细胞共培养试验
            2.4 CCK8法测定健脾清肠方含药血清对细胞活性的影响
            2.5 逆转录聚合酶链反应
            2.6 蛋白免疫印迹分析
            2.7 细胞免疫荧光染色
            2.8 统计分析
        3 实验结果
            3.1 小鼠骨髓来源巨噬细胞形态学观察
            3.2 健脾清肠方含药血清浓度测定
            3.3 健脾清肠方对TNF-α刺激下BMDMs中 IL-1β、TNF-α、IL-10基因表达量的影响
            3.4 健脾清肠方对TNF-α刺激下BMDMs中 HIF-1α表达情况的影响
            3.5 健脾清肠方对TNF-α刺激下BMDMs中 NF-κB及 m TOR表达情况的影响
            3.6 健脾清肠方对TNF-α刺激下BMDMs中 TRAF2、IκB、PI3K及 Akt蛋白表达量的影响
            3.7 Caco2细胞株形态学观察
            3.8 健脾清肠方对TNF-α刺激下Caco2 细胞中IL-1β、TNF-α、IL-10基因表达量的影响
            3.9 健脾清肠方对TNF-α刺激下Caco2 细胞中HIF-1α及 NF- κB表达情况的影响
            3.10 健脾清肠方对TNF-α刺激下Caco2 细胞中Claudin-1及ZO-1表达的影响
        4 实验小结
    实验四 健脾清肠方调控DSS诱导结肠炎模型小鼠中NF-κB/HIF-1α信号通路的机制研究
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 实验药品制备
            2.2 实验分组、造模及给药
            2.3 逆转录聚合酶链反应
            2.4 蛋白免疫印迹分析
            2.5 组织免疫荧光染色
            2.6 统计分析
        3 实验结果
            3.1 健脾清肠方对DSS诱导结肠炎模型小鼠结肠组织中HIF-1α表达情况的影响
            3.2 健脾清肠方对DSS诱导结肠炎模型小鼠结肠组织中NF-κB及mTOR蛋白表达量的影响
            3.3 健脾清肠方对DSS诱导结肠炎模型小鼠结肠组织中TRAF2、IκB、PI3K及 Akt蛋白表达量的影响
            3.4 健脾清肠方对DSS诱导结肠炎模型小鼠结肠组织中Claudin-1及ZO-1 表达的影响
        4 实验小结
讨论
    1 立论依据
    2 健脾清肠方的组方分析
    3 实验研究的机制探讨
    4 问题与展望
创新点
结论
致谢
参考文献
附录
    附录一 :文献综述 基于细胞自噬的中医药防治溃疡性结肠炎的作用研究
        参考文献
    附录二 :博士期间发表论著



本文编号：3881207