saRNA激活肾癌细胞E-cadherin表达及对肾癌细胞转移和侵袭的抑制作用

发布时间：2024-02-05 08:16

　　第一部分 saRNA激活肾癌细胞E-cadherin基因表达及其机制目的:检测肾癌细胞中的E-cadherin基因表达,观察E-cadherin表达水平与肾癌发生的相关性。遴选能和E-cadherin基因启动子区域序列互补的saRNAs,明确saRNA对肾癌细胞系ACHN和786-O细胞E-cadherin表达的激活效应。材料与方法:收集2016年8月²016年11月期间于瑞金医院泌尿外科手术并经病理确诊的15对“肾细胞癌”的癌组织及癌旁正常肾组织,采用免疫组化的方法了解石蜡切片中肾癌标本中E-cadherin表达;应用实时荧光定量PCR和Westernblot检测15对临床肾细胞癌组织和癌旁正常肾组织中E-cadherin基因的mRNA和蛋白表达水平;生物合成的dsControl,dsEad-215,siEcad+dsEcad-215(其中dsControl为阴性对照组,dsEad-215为实验组,siEcad+dsEcad-215为干扰组)通过脂质体转染肾癌细胞系ACHN和786-O细胞,72小时后采用实时荧光定量PCR和Westernblot分别检测两株肾癌...

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【部分图文】：

图1（A）.转膜所用“三明治”结构

上海交通大学医学院2019同等学力博士研究生毕业论文-22-另外，在两旁上样孔内加入5μL的蛋白marker。5）电泳：样品变性后上样，连接电极，插入电源插座，开启电泳仪的电源开关，初始电压80V，进行恒压电泳，约30min跑积层胶，当溴酚蓝进入到分离胶中将电压调至120V继续恒....

图1（B）.蛋白分子量marker指示条带④将转膜夹（放入“三明治”）安装在转膜槽上，辨清转膜槽正负极（转膜夹的

上海交通大学医学院2019同等学力博士研究生毕业论文-23-图1（B）.蛋白分子量marker指示条带④将转膜夹（放入“三明治”）安装在转膜槽上，辨清转膜槽正负极（转膜夹的黑色面对应转膜槽黑色面，转膜夹的白色面对应转膜槽红色面），向转膜槽内加转膜缓冲液，盖上转膜槽盖子，将转膜槽置....

图2.细胞培养板（研究组及对照组分布安排）

上海交通大学医学院2019同等学力博士研究生毕业论文-30-15mL的离心管中，予以900r/s，离心3min（普通离心机），加入1mL培养液重悬，形成细胞悬液，将细胞进行铺板（接种于6孔的细胞培养板）。每孔接种约1×105个细胞，保证转染时细胞的融合度（confluence）达....

图4（A）.15对配对临床肾细胞癌和癌旁正常肾组织的E-cadherinmRNA表达水平差异

上海交通大学医学院2019同等学力博士研究生毕业论文-39-图4（A）.15对配对临床肾细胞癌和癌旁正常肾组织的E-cadherinmRNA表达水平差异图4（B）.免疫组化显示肾癌细胞和癌旁正常肾组织的E-cadherin蛋白表达差异图4（C）.Westernblot显示肾癌细胞....

本文编号：3895929