RIP1K-RIP3K坏死小体在2型糖尿病心肌纤维化中的作用及其机制研究

发布时间：2024-02-14 11:42

　　目的:坏死性凋亡在脏器纤维化发生、发展中的作用逐渐引起研究者的重视,但其在糖尿病心肌纤维化中的作用及其机制尚缺少研究。本研究目的有:1.观察坏死性凋亡关键上游激酶受体相关蛋白激酶1、3(RIP1K、RIP3K)基因敲低及其抑制剂对高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化的影响,明确其作用机制与修复心脏成纤维细胞自噬流进程有关。2.研究 RIP1K 抑制剂 Nec-1、RIP3K 抑制剂 GSK872(GSK)对 RIP1K-RIP3K坏死小体的相互作用,探索低剂量Nec-1和GSK合用减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化的可行性。3.探讨Nec-1对T2DM大鼠体内心肌纤维化的作用及其与自噬流的联系。方法:体内实验选用SD雄性大鼠,通过高糖高脂饲养+链脲佐菌素腹腔注射法制备T2DM大鼠模型;体外实验选用原代乳鼠心脏成纤维细胞,传代后使用25 mM葡萄糖+500 μM棕榈酸盐的DMEM培养基培养48 h建立高糖高脂诱导的心脏成纤维细胞损伤模型。通过药理学方法(Nec-1、GSK)或基因敲低法(RIP1K knockdown、RIP3K knockdown)抑制体内、外RIP1K、...

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【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
    一、研究背景
    二、本课题的研究内容
    三、本课题的创新点
    四、本课题的研究意义和价值
材料和方法
    1. 动物选择
    2. 主要仪器和软件
    3. 主要试剂
    4. 溶液配制
    5. 体内实验部分
    6. 体外实验部分
    7. 蛋白样品制备及Western blotting步骤
    8. 流式细胞术
    9. ELISA检测法
    10.统计学处理
实验结果
    第一部分 RIP1K、RIP3K在T2DM大鼠心脏模型和高糖高脂培养的心脏成纤维细胞中表达升高
        结果
            1. 建立T2DM大鼠心脏模型
            2. 建立高糖高脂诱导的心脏成纤维细胞损伤模型
            3. RIP1K、RIP3K在糖尿病心脏成纤维细胞中表达及磷酸化激活升高
        小结
    第二部分 RIP1K、RIP3K基因敲低减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化
        结果
            1. RIP1K基因敲低抑制高糖高脂培养的心脏成纤维细胞RIP1K、p-RIP1K表达,减少心脏成纤维细胞损伤
            2. RIP1K基因敲低减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞纤维化
            3. RIP3K基因敲低抑制高糖高脂培养的心脏成纤维细胞RIP3K、p-RIP3K表达,减少心脏成纤维细胞损伤
            4. RIP3K基因敲低减少高糖培养下心脏成纤维细胞纤维化
        小结
    第三部分 RIP1K-RIP3K坏死小体在T2DM心肌纤维化中的机制研究
        第一节 RIP1K、RIP3K基因敲低改善高糖高脂培养的心脏成纤维细胞自噬流进程和增加溶酶体膜稳定性
            结果
                1. RIP1K基因敲低减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞LC3、P62和active-Cathepsin D表达
                2. RIP1K基因敲低改善高糖高脂培养的心脏成纤维细胞自噬流进程和增加溶酶体膜稳定性
                3. RIP3K基因敲低减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞LC3、P62和active-Cathepsin D表达
                4. RIP3K基因敲低改善高糖高脂培养的心脏成纤维细胞自噬流进程、增加溶酶体膜稳定性
            小结
        第二节 抑制RIP1K、RIP3K磷酸化降低高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化及其与自噬流的联系
            结果
                1. 筛选Nec-1和GSK减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤的合理浓度
                2. 自噬流阻断剂CQ消除Nec-1、GSK减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化的作用
                3. 自噬流阻断剂CQ消除Nec-1和GSK改善高糖高脂培养的心脏成纤维细胞自噬流进程和增加溶酶体膜稳定性的作用
                4. 低浓度DMSO未对高糖高脂培养的心脏成纤维细胞蛋白表达产生影响
            小结
        第三节 RIP1K、RIP3K信号相互调节通过调控自噬流减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化
            结果
                1. 基因敲低或药理抑制RIP1K/RIP3K磷酸化减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞RIP1K-RIP3K相互作用
                2. 低剂量Nec-1与GSK合用减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞RIP1K、RIP3K表达
                3. 低剂量Nec-1与GSK合用减少高糖高脂培养的心脏成纤维细胞损伤和纤维化
                4. 低剂量Nec-1与GSK合用改善高糖高脂培养的心脏成纤维细胞自噬流进程
            小结
    第四部分 NEC-1长期治疗减轻T2DM大鼠心肌纤维化及其与自噬流的联系
        结果
            1. Nec-1改善T2DM大鼠生化、心脏重量指标及心脏功能参数
            2. Nec-1改善T2DM大鼠心肌纤维化及肥厚
            3. Nec-1减少T2DM大鼠心脏RIP1K、RIP3K以及自噬溶酶体标志蛋白表达
        小结
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
中英文缩写词表
攻读博士学位期间公开发表的论文
攻读学位期间科研情况
致谢



本文编号：3898047