干扰素调节因子家族成员在流感病毒诱导的局部和全身炎症反应中的表达模式

发布时间：2024-03-04 20:51

　　流感病毒感染可诱发急性肺损伤(ALI)与其介导的大量I型干扰素(IFN-I)产生关系密切。干扰素调节因子(IRF)是负责IFN-I产生的转录因子家族,包括IRF1-9。尽管IRF3和IRF7被普遍认为是调控IFN-I产生的主要转录因子,IRF家族所有成员都能识别/结合其靶基因启动子上富含GAAA序列元件的特征提示可能都对流感病毒感染应答。本文以流感病人鼻咽上皮细胞和流感模型小鼠肺组织作为局部应答组织、流感模型小鼠外周血白细胞及其他组织如心、肠、肝、肾、脾、胃作为全身应答组织,观察了IRF家族成员对流感病毒应答的表达谱变化,并用专职产生IFN-I的人p DC样CAL-1细胞研究了流感病毒诱导IRF家族表达谱的变化规律及可能调控机制。本研究为流感病毒诱发急性免疫损伤如ALI的诊断和防治提供了分子靶标。

【文章页数】：158 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
提要
中文摘要
abstract
英文缩略词表
第一篇 文献综述
    (一)流感病毒感染与其相关免疫应答
        1.1 流感病毒简介
        1.2 流感病毒与固有免疫
        1.3 干扰素及其信号转导途径
        1.4 Ⅰ型干扰素与炎症反应
    (二)干扰素调节因子家族成员及其免疫调节作用
        2.1 IRF家族成员的结构特征
        2.2 IRF家族成员的生物学功能
        2.3 IRF3、IRF5和IRF7是TLR及 RLR信号传导中Ⅰ型 IFN表达的主要调控因子
    (三)寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)的研究进展
        3.1 免疫刺激性寡脱氧核苷酸的结构特征与功能
        3.2 免疫抑制性寡脱氧核苷酸的结构特征与功能
    课题设计思路
第二篇 研究内容
    第一章 流感病毒感染后对局部和全身IRF家族成员表达水平的影响
        前言
        第一节 流感病毒感染人局部组织中IRFs的表达水平变化
            1 材料与方法
                1.1 研究对象
                    1.1.1 患者鼻咽拭子标本采集
                    1.1.2 鼻咽拭子标本的病毒检测和分类
                    1.1.3 IAV、IBV和非呼吸道感染者临床指标采集
                1.2 实验试剂与器材
                1.3 实验方法
                    1.3.1 IAV、IBV和非呼吸道感染患者鼻咽拭子标本的收集及研究流程图
                    1.3.2 鼻咽拭子标本的处理和病毒检测
                    1.3.3 Trizol法提取IAV、IBV和非呼吸道感染者鼻咽上皮细胞内总RNA并逆转录成cDNA
                    1.3.4 RT-qPCR法检测流感病毒感染患者鼻咽拭子标本中IRF家族成员的m RNA表达水平
                1.4 统计分析
            2 实验结果
                2.1 不同流感病毒感染的鼻咽上皮细胞分类
                2.2 IAV、IBV和非呼吸道感染患者临床资料分析
                2.3 流感病毒感染患者鼻咽上皮细胞中IRF家族成员的m RNA水平检测
            3 讨论
            4 小结
        第二节 流感病毒感染小鼠局部和全身组织中IRFs的表达水平变化及GAAA ODN对其的调节作用
            1 材料与方法
                1.1 实验动物和细胞
                1.2 流感病毒
                1.3 寡脱氧核苷酸
                1.4 实验试剂与器材
                1.5 实验方法
                    1.5.1 流感病毒的扩增和血凝效价的测定
                    1.5.2 流感病毒在MDCK细胞上半数组织细胞感染剂量(TCID50)的检测
                    1.5.3 流感病毒感染小鼠LD50的检测
                    1.5.4 流感病毒感染小鼠模型的建立
                    1.5.5 流感病毒感染小鼠肺及其他重要脏器组织中IRF家族m RNA水平的检测
                    1.5.6 流感病毒感染小鼠经GAAA ODN M1 干预处理后,小鼠肺及其他重要脏器组织中IRF家族m RNA水平的检测
                1.6 统计分析
            2 实验结果
                2.1 H1N1流感病毒的扩增和血凝效价的测定
                2.2 H1N1流感病毒在MDCK细胞上半数组织细胞感染剂量的测定
                2.3 流感病毒感染BALB/c小鼠的LD50测定
                2.4 H1N1感染小鼠肺等脏器中IRF家族的m RNA表达谱及GAAA ODN M1对IRFs表达的调控作用
            3 讨论
            4 小结
    第二章 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞后对IRFs,TLR3/7,RIG-Ⅰ及其下游信号分子表达的影响
        前言
        第一节 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞IRF-IFN-Ⅰ信号通路相关因子的表达
            1 材料与方法
                1.1 细胞
                1.2 流感病毒
                1.3 实验试剂与器材
                1.4 实验方法
                    1.4.1 流感病毒H1N1 感染不同时间对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响
                    1.4.2 流感病毒H9N2 感染不同时间对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响
                    1.4.3 流感病毒H1N1 感染不同时间对IRFs上游PRR受体信号通路(TLR3、TLR7、RIG-Ⅰ)和下游IFN-Ⅰ及炎症因子表达影响
                    1.4.4 分别用人重组干扰素(rIFN-α2b)和重组rIFN-γ处理CAL-1 细胞对IRFs及ISGs表达的影响
                    1.4.5 统计分析
            2 实验结果
                2.1 流感病毒H1N1 感染对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响
                2.2 流感病毒H9N2 感染不同时间对人pDC样 CAL-1 细胞IRF家族表达谱的影响
                2.3 流感病毒H1N1 感染不同时间对IRFs上游PRR受体信号通路(TLR3、TLR7、RIG-Ⅰ)和下游IFN-Ⅰ及炎症因子表达影响
                2.4 分别用人重组干扰素(rIFN-α2b)和重组rIFN-γ处理CAL-1 细胞对IRFs及 ISGs表达的影响
            3 讨论
            4 小结
        第二节 流感病毒对CAL-1 细胞IRF家族及其上下游信号分子表达调控的可能机制探讨
            1 材料与方法
                1.1 细胞
                1.2 流感病毒
                1.3 寡脱氧核苷酸
                1.4 实验试剂与器材
                1.5 实验方法
                    1.5.1 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞用人重组干扰素(rIFN-α2b)处理对IRF家族表达水平的影响
                    1.5.2 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞用人重组干扰素(rIFN-α2b)处理对TLR3/7及其下游信号分子表达水平的影响
                    1.5.3 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的氯喹处理对IRF家族表达水平的影响
                    1.5.4 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的氯喹处理对TLR3/7 及其下游信号分子表达水平的影响
                    1.5.5 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的GAAA ODN A1 处理对IRF家族表达水平的影响
                    1.5.6 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞同时用不同浓度的GAAA ODN A1 处理对TLR3/7及其下游信号分子表达水平的影响
                    1.5.7 统计分析
            2 实验结果
                2.1 重组rIFN-α2b,氯喹和GAAA ODN A1对H1N1感染的CAL-1 细胞中IRF家族表达谱的影响
                2.2 重组IFN-α2b,氯喹和GAAA ODN A1对H1N1感染的CAL-1 细胞中TLR3/7 及其下游信号分子表达的影响
            3 讨论
            4 小结
        第三节 流感病毒感染CAL-1 细胞后对IRF3、IRF5和IRF7 磷酸化水平的影响
            1 材料与方法
                1.1 细胞
                1.2 流感病毒
                1.3 寡脱氧核苷酸
                1.4 实验试剂与器材
                1.5 实验方法
                    1.5.1 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 及用GAAA ODN A1 处理对IRF3,IRF5,IRF7 的表达和磷酸化水平的影响
                    1.5.2 GAAA ODN A1对H1N1感染CAL-1细胞中IRF5核转位的影响
                    1.5.3 统计分析
            2 实验结果
                2.1 流感病毒感染人pDC样 CAL-1 细胞及用GAAA ODN A1 处理对IRF3,IRF5,IRF7 的表达和磷酸化水平的影响
                2.2 GAAA ODN A1对H1N1感染CAL-1细胞中IRF5核转位的影响
            3 讨论
            4 小结
    第三章 不同单链RNA病毒对人pDC样 CAL-1 细胞中IRFs、TLR3/7和RIG-Ⅰ及其下游信号分子表达的影响
        前言
        1 材料与方法
            1.1 细胞
            1.2 不同ssRNA病毒
            1.3 实验试剂与器材
            1.4 实验方法
                1.4.1 不同流感病毒感染CAL-1 细胞中TLR3、7和RIG-Ⅰ及其下游信号分子m RNA水平动态变化
                1.4.2 不同ssRNA病毒对IRF家族表达谱的影响
                1.4.3 统计分析
        2 实验结果
            2.1 不同流感病毒感染CAL-1 细胞中TLR3、7和RIG-Ⅰ及其下游信号分子mRNA水平动态变化
            2.2 TNF-和 IFN-m RNA表达水平有可能是决定流感病毒致病性强弱和炎症强弱的重要指标
            2.3 不同ssRNA病毒对IRF家族表达谱的影响
        3 讨论
        4 小结
结论
创新点
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
附录



本文编号：3919153