UBA2对胃癌增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

发布时间：2024-03-13 19:02

　　背景和目的:胃癌是世界第4大常见的恶性肿瘤,在肿瘤导致的死亡原因中占第2位,在我国肿瘤发病率和肿瘤致死原因中亦占第2位,仅次于肺癌。目前,外科手术仍然是早期胃癌的主要治疗方法。但是由于该病的高度异质性、起病隐匿、发展迅速等特点,大多数胃癌患者确诊时已处于疾病的中晚期,往往需要联合化疗等其他治疗手段。随着对疾病病因、病理和分子机制等方面的认识逐步加深,胃癌化疗方案的选择以及分子靶向药物的研发有了一定进展,但尚未取得显著的效果。此外,疗效的限制也可能与胃癌发生发展过程比较复杂,常常涉及多个基因、信号通路的改变有关。因此,进一步阐明胃癌的发病机制,探索新的分子靶向药物并使患者的生存受益,仍是胃癌治疗中亟待解决的重点问题。小泛素相关修饰物(small ubiquitin-like modifiers,SUMOs)是一种新发现的泛素样分子,它能够可逆地修饰翻译后的蛋白,具有调节靶蛋白稳定性、定位及与其他蛋白相互作用的功能。多项研究指出SUMO化修饰参与胃癌的发生发展。然而,泛素样修饰物活化酶2(ubiquitin-like modifier activating enzyme 2,UBA2)作为...

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
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英文缩略词表
第1章 引言
第2章 文献综述
    2.1 胃癌的研究现况
        2.1.1 胃癌概述
        2.1.2 胃癌发病的分子机制
        2.1.3 胃癌治疗的研究进展
    2.2 UBA2 与肿瘤的发生发展
        2.2.1 UBA2 的功能与SUMO化循环
        2.2.2 UBA2和SUMO化修饰与肿瘤
        2.2.3 UBA2和SUMO化修饰与胃癌的发生发展
第3章 UBA2 在人胃癌组织中的表达及临床意义
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 组织标本来源
        3.2.2 免疫组织化学染色检测UBA2 蛋白表达水平
        3.2.3 Western blotting法检测蛋白表达
        3.2.4 TCGA数据库中胃癌UBA2 m RNA水平
        3.2.5 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 人胃癌组织中UBA2 水平
        3.3.2 UBA2 在人胃癌组织中的临床意义
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 UBA2对人胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和化疗敏感性影响的体外研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 实验分组
        4.2.2 建立稳定感染的胃癌细胞系
        4.2.3 Western blotting法检测蛋白的表达情况
        4.2.4 MTT法检测胃癌细胞增殖能力
        4.2.5 克隆形成实验检测胃癌细胞增殖能力
        4.2.6 流式细胞术检测胃癌细胞周期
        4.2.7 细胞划痕实验检测胃癌细胞迁移能力
        4.2.8 Transwell小室检测胃癌细胞迁移和侵袭能力
        4.2.9 应用MTT检测胃癌细胞顺铂化疗敏感性
        4.2.10 统计学分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 慢病毒感染胃癌细胞后UBA2 的表达情况
        4.3.2 UBA2 对人胃癌细胞增殖的影响
        4.3.3 UBA2 对人胃癌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响
        4.3.4 UBA2 对人胃癌细胞迁移和侵袭的影响
        4.3.5 UBA2 对人胃癌细胞侵袭及EMT相关蛋白表达的影响
        4.3.6 UBA2 对人胃癌细胞化疗敏感性的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 UBA2对Wnt/β-catenin和 Akt信号通路的作用机制探讨
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要试剂
        5.1.2 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 质粒的提取
        5.2.2 细胞瞬时转染
        5.2.3 双萤光素酶报告基因检测
        5.2.4 Western blotting法检测蛋白表达情况
        5.2.5 统计学分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 UBA2对Wnt/β-catenin信号通路的作用
        5.3.2 UBA2对Akt信号通路的作用
    5.4 讨论
    5.5 小结
第6章 UBA2 对胃癌细胞移植瘤增殖影响的体内研究
    6.1 实验材料
        6.1.1 主要试剂
        6.1.2 主要仪器
    6.2 实验方法
        6.2.1 细胞及实验动物
        6.2.2 实验分组
        6.2.3 裸鼠皮下移植瘤模型建立及移植瘤标本处理
        6.2.4 Western blotting法检测移植瘤蛋白表达情况
        6.2.5 统计学分析
    6.3 实验结果
        6.3.1 UBA2 对胃癌细胞移植瘤生长的影响
        6.3.2 胃癌细胞移植瘤中周期相关蛋白的表达
    6.4 讨论
    6.5 小结
第7章 结论
参考文献
附录
作者简介及在学期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3927431